Name: Dépistage de petites molécules et essais de toxicité chez les larves de poisson-zèbre à un stade précoce (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 2 min 52 s
Description: Découvrez un protocole de criblage de médicaments chez les larves de poisson-zèbre âgées de 3 à 7 jours post-fécondation. Cette méthode permet d'évaluer les effets toxiques des molécules sur le développement embryonnaire.

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<ol><li>Teame, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29+as+biomedical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Front%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish (Danio rerio) as biomedical models.</a> Anim Front. 9 (3), 68-77 (2019).</li>
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<li>Hayot, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+toxicity+of+chemicals+using+a+zebrafish+vibration+startle+response+screening+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Evaluating toxicity of chemicals using a zebrafish vibration startle response screening system.</a> J Vis Exp. (203), e66153(2024).</li>
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<li>Lipton, J. H., Brümmendorf, T. H., Sweet, K., Apperley, J. F., Cortes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+considerations+in+the+management+of+patients+treated+with+bosutinib+for+chronic+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Hematol%22%5BJournal%5D)">Practical considerations in the management of patients treated with bosutinib for chronic myeloid leukemia.</a> Ann Hematol. 103 (9), 3429-3442 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tube de microcentrifugation de 1,5 mL</td><td>Starlab</td><td>E1415-1510</td><td></td></tr><tr><td>10 & micro ; Micropipette L (P10)</td><td>Gilson</td><td>F144802&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>10/20 et micro ; Pointes de pipette L</td><td>Starlab</td><td>S1110-3810</td><td></td></tr><tr><td>1000 &micro ; Micropipette L (P1000)</td><td>Gilson</td><td>F123602&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>1000 et micro ; Pointes de pipette en L</td><td>Starlab</td><td>S1111-6001</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 12 puits</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7512</td><td>Stérile, mono-enveloppé, non traité, avec couvercle</td></tr><tr><td>20 & micro ; Micropipette L (P20)</td><td>Gilson</td><td>F123600&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>200 et micro ; Micropipette L (P200)</td><td>Gilson</td><td>F123601&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>200 et micro ; L pipette multicanaux&nbsp ;</td><td>Gilson</td><td>F81024</td><td></td></tr><tr><td>200 & micro ; Pointes de pipette en L</td><td>Starlab</td><td>S1113-1006</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à 96 puits</td><td>Starlab</td><td>CC7672-7596</td><td>Stérile, emballée individuellement, à fond plat, non traitée, avec couvercle</td></tr><tr><td>Cuves d’élevage avec grille intérieure à fond incliné, séparateurs de cuves et couvercles</td><td>Tecniplast</td><td>ZB17BTISLOP, ZB17BTE,&nbsp ; ZB17BTL, ZB17BTD</td><td>Réservoir intérieur incliné</td></tr><tr><td>Passoire</td> en <td>maille/</td><td>/Gants</td><td></td></tr> <tr><td>en nitrile</td><td>Mercator</td><td>/</td><td>/</td></tr><tr><td>Plat de Petri&nbsp ;</td><td>Starlab</td><td>CC7672-3394/CC7672-3359</td><td>100 x 20 mm ou 60 x 15 mm</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica M205 FCA Stéréomicroscope à fluorescence</td><td>Leica</td><td>10450826</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur refroidi par Peltier avec 2 étagères avec module de lumière blanc froid</td><td>Memmert</td><td>IPP110ecoplus, T8</td><td>Équipé d’un cycle</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> jour/nuit <tr><td>Diméthyl Sulfoxyde de diméthyle</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>504341000</td><td>Pour préparer une solution à 1 % dans du</td></tr><tr><td>chlorure de calcium dihydraté</td> E3 <td>Biochem Chemopharma</td><td>303080500</td><td>Pour préparer E3</td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium heptahydraté</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>313060500</td><td>Pour préparer E3</td></tr><tr><td>Chlorure de potassium</td><td>Biochem Chemopharma</td><td>316030500</td><td>Pour préparer E3</td></tr><tr><td>SCREEN-WELL&nbsp ; Wnt Pathway library (Bosutinib)</td><td>Enzo</td><td>BML-2838-0500</td><td></td></tr><tr><td>Chlorure de sodium</td><td>Fisher Scientific</td><td>S/3161/53</td><td>Pour préparer E3</td></tr></tbody></table>

dépistage de petites molécules et essais de toxicité chez les larves de poisson-zèbre à un stade précoce

Small Molecule Screening and Toxicity Testing in Early-stage Zebrafish Larvae

Les anomalies peuvent être examinées individuellement ou cumulativement sur la chronologie expérimentale jusqu’à 7 dpf. Le score morphologique maximal par anomalie peut être utilisé pour calculer les anomalies morphologiques en pourcentage du nombre de larves utilisées. Par exemple, si au jour 7, les scores morphologiques de l’œdème péricardique sont de 19 et 20 pour les marqueurs 1 et 2, respectivement, sur un score possible de 24, c’est-à-dire que 19 ou 20 larves sur 24 présentent un œdème péricardique, le score en pourcentage peut être calculé comme suit :
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67759/67759eq1.jpg">
Le tableau supplémentaire S1 montre les résultats du score morphologique (des deux scoreurs) à 4 dpf après des essais de toxicité pour le composé Bosutinib, un inhibiteur de la tyrosine kinase indiqué pour le traitement de la leucémie myéloïde chronique15. Le même score morphologique est répété pour les poissons exposés âgés de 5 dpf à 7 dpf. Le composé a été testé en utilisant une plage de concentration de 100 μM à 6,25 μM. Trois répétitions techniques ont été effectuées à différents moments, et le taux de mortalité cumulatif moyen à 7 dpf a été utilisé pour déterminer la CL50, la concentration à laquelle 50 % des larves survivent. La CL50 peut être déterminée à n’importe quel point de temps d’exposition. Cependant, nous recommandons de le calculer à 7 dpf.
La mortalité moyenne cumulée à 7 dpf a été utilisée pour générer une courbe CL50 , que l’on peut voir à la figure 3. Pour le bosutinib, la concentration de CL50 a été estimée à 37,95 μM.
REMARQUE : Cette concentration estimée de CL50 s’applique strictement à ce système modèle et peut ensuite être utilisée pour d’autres tests de phénotypage en aval.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig1.jpg"> 
Figure 1 : Schéma du dépistage de drogues proposé chez les larves à 3-7 dpf. Les plaques d’essai à 96 puits sont configurées pour l’étude de cinq concentrations allant de 100 μM à 6,25 μM pour le composé Bosutinib. Abréviation : dpf = jours après la fécondation. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig1large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig2.jpg"> 
Figure 2 : Défauts morphologiques représentatifs observés chez les larves de poisson-zèbre à 5 dpf exposées à diverses concentrations chimiques (2 jours après l’exposition). (A) Poisson-zèbre témoin (non affecté), (B) Larve de poisson-zèbre présentant un léger œdème péricardique, (C) Poisson-zèbre présentant un œdème péricardique sévère et une hémorragie vitelline, (D) Poisson-zèbre présentant un retard de développement, une pigmentation réduite, une petite vessie natatoire, (E) Poisson zèbre avec un jaune gonflé et une nageoire caudale pliée, (F) Poisson zèbre sans nageoire caudale, (G) Poisson zèbre avec notocorde incurvée, (H) Poisson zèbre avec queue tronquée, et (I) Poisson zèbre mort avec nécrose. Les défauts sont signalés par des pointes de flèches rouges. Barres d’échelle = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67759/67759fig3.jpg"> 
Figure 3 : Courbe LC50 montrant la concentration en fonction du % de mortalité. Les cinq concentrations testées étaient de 100 μM, 50 μM, 25 μM, 12,5 μM et 6,25 μM, le % de mortalité étant respectivement de 100 %, 100 %, 29,2 %, 12,5 % et 12,5 %. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/67759fig3large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Défauts morphologiques</td>
			<td>Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Œdème péricardique</td>
			<td>Accumulation de liquide autour du cœur avec un cœur étiré et un dysfonctionnement de la circulation sanguine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Battements cardiaques (par minute)</td>
			<td>Réduction du nombre de battements par minute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jaune</td>
			<td>Présence ou absence d’œdème ou d’hémorragie du vitellus pouvant survenir en même temps que des anomalies cardiaques</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extension du jaune d’œuf</td>
			<td>Jaune gonflé, mince ou absent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Notocorde incurvée</td>
			<td>Présence d’une notocorde pliée ou ondulée, et/ou d’une queue incurvée</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vessie natatoire</td>
			<td>Présence, absence ou développement partiel de la vessie natatoire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pigmentation</td>
			<td>Moins ou pas de mélanocytes par rapport aux poissons non traités du même âge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nécrose</td>
			<td>Présence (légère ou grave) ou absence de nécrose dans n’importe quelle partie du corps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Développement retardé</td>
			<td>Développement retardé ou bloqué par rapport aux témoins de type sauvage du même âge.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Réponse au toucher</td>
			<td>Réponse retardée ou inexistante à la suite d’un sursaut (p. ex., utilisation d’une pointe de pipette)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Troncature</td>
			<td>Absence de corps postérieur du poisson-zèbre (c’est-à-dire formation de la queue)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ailettes</td>
			<td>Présence ou absence de la nageoire caudale qui peut être accompagnée d’une mince extension vitellline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axe du corps réduit</td>
			<td>Les poissons qui semblent normaux, mais qui, lorsqu’ils sont mesurés, sont plus courts</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 1 : Une liste des défauts morphologiques visuels qui peuvent être observés à la suite d’études d’exposition aux médicaments.
Tableau supplémentaire S1 : Résultats morphologiques représentatifs pour le bosutinib à 4 dpf (1 jour après l’exposition). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67759/SupplementalTable_1.xlsx" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour télécharger ce tableau.</a>

Dépistage de petites molécules et essais de toxicité chez les larves de poisson-zèbre à un stade précoce

Zebrafish have become a prominent model organism for human translational research, toxicity testing of small molecules and environmental pollutants, ...

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