Name: Contraste de phase et les interférences de contraste différentiel (DIC) Microscopie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Apprenez la microscopie à contraste de phase et DIC pour visualiser les spécimens biologiques transparents. Ces techniques améliorent la résolution des structures cellulaires fines en recherche biomédicale.

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Plusieurs clips vidéo montrant le contraste de phase et la microscopie DIC ont été prélevés sur une autre vidéo-article, intitulé <a href="details.stp?ID=197">Des couches de Symbiose</a> . JoVE reconnaît gracieusement cette contribution faite par le laboratoire de Leadbetter.

Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">Current Protocols in Cell Biology.</a>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

contraste de phase et les interférences de contraste différentiel (dic) microscopie

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase microscopie à contraste est souvent utilisé pour produire de contraste pour transparentes, non absorbant la lumière, des spécimens biologiques. La technique a été découvert par Zernike, en 1942, qui a reçu le prix Nobel pour sa réalisation. Microscopie DIC, introduit dans la fin des années 1960, a été populaire dans la recherche biomédicale, car il souligne les bords de détail spécimen structurelles, offre une haute résolution de sections optiques des échantillons d&#39;épaisseur, y compris les cellules des tissus, des œufs et des embryons et ne souffre pas de halos de phase typique des images à contraste de phase. Ce protocole met en évidence les principes et les applications pratiques de ces techniques de microscopie.

Ce protocole met en évidence les principes et les applications pratiques de la phase et contraste interférentiel différentiel (DIC) Microscopie

Contraste de phase et les interférences de contraste différentiel (DIC) Microscopie

La microscopie à contraste de phase est souvent utilisée pour produire un contraste pour des échantillons biologiques transparents et non absorbants pour la lumière. La technique a été découverte par...

La microscopie optique est l'un des outils les plus, sinon le plus, déterminants dans le domaine de la recherche biomédicale. Selon votre application, différents modes d'éclairage sont souhaitables pour l'observation des échantillons. Cette vidéo démontrera deux modes optiques d'éclairage en lumière transmise : le contraste de phase et la microscopie à contraste interférentiel, ou DIC (differential Interference contrast).Bonjour, je suis Victoria San Frolic du centre d'imagerie optique de l'Université du Centre des sciences de la santé du Texas à San Antonio. Aujourd'hui, je vais vous montrer comment observer correctement des échantillons en utilisant la microscopie en contraste de phase et en contraste interférentiel différentiel. Commençons donc.La microscopie optique classique n'est pas adaptée à l'observation d'échantillons transparents et incolores. La microscopie en contraste de phase est souvent utilisée pour produire du contraste avec des spécimens biologiques transparents non absorbants de lumière. Cette technique a été découverte par Zurich en 1942, qui a reçu le prix Nobel pour cette réalisation.Le microscope à contraste de phase est un microscope optique à champ clair doté d'objectifs spéciaux à contraste de phase, qui contiennent une lame ou une lame annulaire de phase, ainsi que d'un diaphragme annulaire remplaçant le diaphragme classique. L'anneau est généralement situé dans la tourelle du condenseur, et sa taille doit être choisie en fonction des différents objectifs. Après avoir réglé l'éclairage de Köhler, sélectionnez l'objectif à contraste de phase approprié, puis faites tourner l'anneau de phase correspondant en position dans le condenseur.Une fois l'anneau de phase de l'objectif et l'anneau du condenseur correctement alignés de manière concentrique et superposée, nous pouvons observer l'échantillon et régler correctement la mise au point. Voyons donc à quoi ressemble le contraste de phase au microscope. Voici une image d'une coupe de foie de rat.En contraste de phase. Cette méthode améliore la visualisation du matériel biologique en modifiant le contraste, passant de différentes nuances de gris à des nuances allant du noir au blanc. Vous remarquerez toutefois que les échantillons sont entourés d’un halo, qui masque les détails fins de la structure.Cet halo est un artefact dû à l'éclairage par l'anneau de phase. Vous remarquerez maintenant que, lorsque nous passons en champ clair, cet échantillon est très difficile à observer. En revenant au contraste de phase, nous pouvons clairement voir la structure et la forme des cellules dans le tissu hépatique du rat depuis son introduction à la fin des années 1960.La microscopie à contraste interférentiel ou microscopie CIN est largement utilisée en recherche biomédicale car elle produit des images haute résolution de structures fines en accentuant les interfaces contrastées ; l'image obtenue correspond à une section optique très mince. En effet, la capacité de la CIN à produire des sections optiques en a fait un mode d'éclairage en lumière transmise particulièrement utile en complément de la microscopie confocale. Le microscope CIN est un microscope optique en champ clair auquel on a ajouté les éléments suivants : un polariseur placé entre la source lumineuse et le condenseur.Un prisme de séparation du faisceau DIC dans le condenseur, un prisme de combinaison du faisceau DIC juste derrière l'objectif et un analyseur dans l'espace à l'infini avant les deux lentilles. Pour obtenir les meilleures performances des optiques DIC, il est important d'abord d'aligner le microscope lumineux pour une illumination de Köhler, puis de placer les éléments DIC dans le trajet optique. La lumière provenant de la source traverse un polariseur, puis est divisée par le premier prisme.Ces faisceaux jumelés voyagent proches l'un de l'autre. Si la paire traverse le même matériau dans l'échantillon, alors lorsqu'ils sont recombinés par le second prisme, ils ne s'interfèrent pas mutuellement et apparaissent donc en gris. Toutefois, au niveau d'un bord d'une structure, l'un des faisceaux du couple traverse un matériau différent de celui de son partenaire et est modifié.Lorsque ces faisceaux sont recombinés par le second prisme, ils interfèrent soit de manière constructive, produisant une tache lumineuse, soit de manière destructive, produisant une tache sombre. Voici une observation de diatomées en contraste DIC. Vous remarquerez que les détails fins de la structure des diatomées sont clairement visibles.Cependant, si les optiques de contraste interférentiel différentiel (DIC) sont retirées, ces détails disparaissent. Le contraste à travers l'échantillon est brillant d'un côté et plus sombre de l'autre. Cela donne l'impression d'une topographie, mais en réalité, il s'agit d'une illusion.Le sens de l'effet de projection d'ombre peut être inversé en tournant le polariseur au-delà d'un point de croisement jusqu'au contraste opposé. Nous venons de passer en revue les modes optiques de contraste de phase et de contraste interférentiel (DIC). Pour vous rappeler, l'élimination du contraste de phase accentue les spécimens contrastés du noir au blanc et s'avère utile pour observer des spécimens incolores et transparents.Le DIC produit également un contraste dans l'échantillon. Il crée une image haute résolution d'une coupe optique fine. Voilà tout.Merci d'avoir regardé et bonne chance avec votre microscopie.

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Apprenez la microscopie à contraste de phase et DIC pour visualiser les spécimens biologiques transparents. Ces techniques améliorent la résolution des structures cellulaires fines en recherche biomédicale.

Contraste de phase et les interférences de contraste différentiel (DIC) Microscopie

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