הכנת דגימות גידול משובצות פרפין קבועות פורמלין: פרוטוקול לשימור דגימות רקמות וציטולוגיה מסרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC)

- בתור התחלה, יש להשיג דגימות של גידולי ריאה כדגימות רקמה או כדגימות ציטולוגיה משטיפות סימפונות - שטיפת מלח המכילה תאים מתוך דרכי הנשימה. כדי להכין דגימות רקמה, העבירו רקמת ריאה שזה עתה נחתכה לתוך קלטת הטבעה. לתקן ולשמר את הרקמה עם ריכוז מתאים של פורמלין.

כדי להכין דגימות ציטולוגיה, ראשית, לטפל שטיפות הסימפונות עם DL-dithiothreitol עבור הומוגניזציה. צנטריפוגה ולהסיר את supernatant. לאחר מכן, לטפל עם פתרון mucolytic כדי לנזול ריר ולהפריד את התאים. צנטריפוגה כדי pelletize את התאים ולתקן אותם עם פורמלין. טפל בתאים עם מגיב מתאים להכנת בלוק תאים כדי לרכז את הדגימה תוך כדי עבודה עם נפחי גלולה קטנים.

מעבירים את הגלולה לקלטת הטבעה. עבד את שני סוגי הדגימות על ידי ייבושם באמצעות סדרה של אמבטיות אלכוהול מדורגות. יש לסלק את האלכוהול באמצעות חומר ניקוי מתאים ולאחר מכן לחדור שעווה. הטמיעו את הקלטת בשעוות פרפין נוזלית ואפשרו לה להתמצק. זה יוצר שכבה סביב הרקמה, מחזיק את הדגימה במקום.

השתמש מיקרוטום כדי לקבל חלקים פרוסים דק. הניחו את המקטעים על שקופיות זכוכית טעונות חיובית כדי להקל על ההדבקה. יבש וכתם כדי לצפות שקופיות תחת מיקרוסקופ. בפרוטוקול הבא, אנו מדגימים טכניקות הכנת דגימות מרקמת גידול ריאה ומדגימות ציטולוגיה.

כדי להתחיל, לתקן את רקמת הגידול ב 10% פורמלין נייטרלי חוצץ בקלטת ולהטמיע את הקלטת בפרפין כמתואר בפרוטוקול הטקסט. הטמיעו את הרקמה החדירה בתוך תבנית מלאה בפרפין מותך. תן לרקמות להישאר בתבנית עד הפרפין התמצק. לאחר מכן, השתמש במיקרוטום כדי לחתוך את הרקמה המשובצת פרפין בעובי של שלושה מיקרומטר.

העבר את סרט הפרפין לשקופית מיקרוסקופ זכוכית טעונה חיובית. לאחר מכן יבש את המגלשה במשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס. ראשית, לאסוף את שטיפות הסימפונות בתמיסה משמרת. מעבירים את השטיפות לצינור חרוטי 50 מיליליטר. מוסיפים שני גרם של DL-dithiothreitol ומערבלים את הצינור במשך 30 דקות. ואז צנטריפוגה ב 250 פעמים g במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.

מוציאים את הסופרנאטנט ומוסיפים 10 מיליליטר של תמיסה מוקוליטית. נערו את הדגימה במהירות בינונית במשך 20 דקות, וצנטריפוגה במהירות של 250 פעמים גרם במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להסיר את supernatant ולהפקיד את גלולת התא לתוך צינור איסוף המכיל 10% פורמלין חוצץ נייטרלי.

הוסף ארבע טיפות של חומר הכנה בלוק התא. מעבירים את גלולת התא לקלטת. תקן את גלולת התא להטמעת פרפין וחתך באמצעות התהליך שתואר קודם לכן להכנת דגימות רקמת גידול.