הכנת דגימות גידול משובצות פרפין קבועות פורמלין: פרוטוקול לשימור דגימות רקמות וציטולוגיה מסרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC)
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:39 דק׳ • April 30th, 2023
- בתור התחלה, יש להשיג דגימות של גידולי ריאה כדגימות רקמה או כדגימות ציטולוגיה משטיפות סימפונות - שטיפת מלח המכילה תאים מתוך דרכי הנשימה. כדי להכין דגימות רקמה, העבירו רקמת ריאה שזה עתה נחתכה לתוך קלטת הטבעה. לתקן ולשמר את הרקמה עם ריכוז מתאים של פורמלין.
כדי להכין דגימות ציטולוגיה, ראשית, לטפל שטיפות הסימפונות עם DL-dithiothreitol עבור הומוגניזציה. צנטריפוגה ולהסיר את supernatant. לאחר מכן, לטפל עם פתרון mucolytic כדי לנזול ריר ולהפריד את התאים. צנטריפוגה כדי pelletize את התאים ולתקן אותם עם פורמלין. טפל בתאים עם מגיב מתאים להכנת בלוק תאים כדי לרכז את הדגימה תוך כדי עבודה עם נפחי גלולה קטנים.
מעבירים את הגלולה לקלטת הטבעה. עבד את שני סוגי הדגימות על ידי ייבושם באמצעות סדרה של אמבטיות אלכוהול מדורגות. יש לסלק את האלכוהול באמצעות חומר ניקוי מתאים ולאחר מכן לחדור שעווה. הטמיעו את הקלטת בשעוות פרפין נוזלית ואפשרו לה להתמצק. זה יוצר שכבה סביב הרקמה, מחזיק את הדגימה במקום.
השתמש מיקרוטום כדי לקבל חלקים פרוסים דק. הניחו את המקטעים על שקופיות זכוכית טעונות חיובית כדי להקל על ההדבקה. יבש וכתם כדי לצפות שקופיות תחת מיקרוסקופ. בפרוטוקול הבא, אנו מדגימים טכניקות הכנת דגימות מרקמת גידול ריאה ומדגימות ציטולוגיה.
כדי להתחיל, לתקן את רקמת הגידול ב 10% פורמלין נייטרלי חוצץ בקלטת ולהטמיע את הקלטת ב
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים