הדמיית ביטוי חלבון מבוססת קובייה: הליך להדמיית ביטוי חלבון בעובי מלא ביופסיות עור עכבר

- העור הוא איבר מורכב המורכב מאוכלוסיות תאים מגוונות המסודרות במספר שכבות. CUBIC, טכניקת הדמיה תלת-ממדית מבוססת ניקוי רקמות, מסייעת לדמיין דפוסי ביטוי חלבונים בתוך תאי עור אלה באמצעות ביופסיות עור שלמות. התחילו בלקיחת עכבר שעבר המתת חסד והסרת שיער מאזור הצוואר הגבי שלו. הבלו חתיכת עור לחתוך אותו לחתיכות קטנות.

השקיעו את החתיכות בתמיסת סליקה CUBIC1 ודגרו. תאי העור אינם שקופים, בשל נוכחותם של כרומופורים ושומנים הגורמים לפיזור אור. הכימיקלים בתמיסה המעוקבת מסירים מולקולות אלה, ובכך מפחיתים את פיזור האור והופכים את הרקמה לשקופה.

לאחר מכן, טפלו ברקמה באמצעות הנוגדנים הראשוניים הרצויים הנקשרים באופן ספציפי לחלבוני המטרה התוך-תאיים המתבטאים בתאי העור. יתר על כן, לטפל עם נוגדנים משניים מסומנים פלואורסצנטית להיקשר קומפלקסים נוגדנים ראשוניים חלבון. מכתימים את הרקמה בצבע קושר DNA שמכתים את הגרעין.

לבסוף, לטבול את הדגימה בתמיסת CUBIC2. התמיסה מפחיתה עוד יותר את פיזור האור בתוך הרקמה, מה שהופך אותה לשקופה יותר להדמיה. התבונן תחת מיקרוסקופ קונפוקלי כדי לדמיין אזורים בעלי תווית פלואורסצנטית של עניין בדגימה התלת-ממדית. הפרוטוקול הבא מאפשר הדמיה של ביטוי סמני התפשטות קרטינוציטים בביופסיות עור שלמות באמצעות פרוטוקול CUBIC.

- התחילו בשימוש בגוזמים כדי לגלח את השיער מצווארו של עכבר שעבר המתת חסד, תוך