בדיקת השתלה תת עורית: שיטה להשתלת תאי מלנומה מתורם למודל דג זברה מושתל

- במהלך בדיקת השתלת מלנומה, תאים סרטניים מדגי זברה נושאי גידול מושתלים במודל מושתל מדוכא חיסון כדי לחקור את התפתחות הגידול. התחילו בלקיחת דג זברה תורם נושא גידול שעבר המתת חסד וכרתו בניתוח את הגידול מגופו. מעבירים את הגידול לצלחת פטרי המכילה חיץ מתאים וטוחנים אותו לחתיכות קטנות.

לאחר מכן, triturate את שברי הגידול באמצעות פיפטה. זה מנתק את חתיכות הגידול לתוך תאים בודדים. כעת, טען את תרחיף תאי הגידול לתוך מזרק. לאחר מכן, הכינו מושתל מדוכא חיסון דג זברה קספר על נייר פילטר. גרסה מוטנטית זו של דג הזברה, חסרת פיגמנטציה, חסרה מלנוציטים ואירידופורים, מה שהופך אותה לשקופה ורב-תכליתית לניסויי הדמיה והשתלה.

לאחר מכן, הזריקו את תרחיף תאי המלנומה הטעון מראש באופן תת-עורי לאזור שמעל חלל הצפק, באמצע הדרך בין המוח האחורי לסנפיר הגבי של דג הזברה קספר. כעת, העבירו את הדג המקבל למים ועקבו אחריו כדי לצפות בהתפתחות הגידול. הגוף השקוף של דגי הזברה מסייע בהדמיה קלה של הגידולים המפותחים.

בפרוטוקול הבא נראה השתלת תאי מלנומה מתורם דג זברה נושא גידול מהונדס למודל דג קספר מושתל מדוכא חיסון.

- לאחר הקרנת דג קספר בן חודשיים עד שלושה חודשים עם הקרנת גמא של 25 Gy יום אחד לפני ההשתלה, יש לאפשר לדגים להתאושש במי דגים. השתמש tricaine כדי להרדים דג נושא גידול. חותכים את הגידול ומכניסים אותו לצלחת פטרי עם כ 5 מיליליטר של מסנן מעוקר 0.9x PBS עם 5% FPS. בעזרת סכין גילוח, חותכים את הגידול לקוביות בזמן שהוא בתמיסה.

עבודה בטמפרטורת החדר ועם פיפטה P1000, triturate לייצר תאים בודדים. העלו את עוצמת הקול ל-25 מיליליטר. סנן את התמיסה דרך מסנן רשת של 40 מיקרומטר וסובב בצנטריפוגה שולחנית במהירות של 453 rcf למשך 10 דקות. השהה מחדש את הגלולה ב 0.9% PBS 5% FBS לריכוז הרצוי.

באמצעות המוציטומטר, לחשב את מספר התא המדויק לדלל את השעיית התא כך נפח ההזרקה הסופי הוא כ 5 מיקרוליטר. לדוגמה, אם רוצים להזריק 50,000 תאים, יש לדלל את תרחיף התאים לריכוז סופי של 10,000 תאים למיקרוליטר. החלק את הצינור המכיל את תרחיף התא כל כמה דקות כדי למנוע התגבשות של התאים.

עם 100% אתנול ו 0.9x PBS, לשטוף מד 26s (קצה שיפוע) 701 N 10 מיקרוליטר מזרק המילטון 2 עד 3 פעמים לפני טעינת המזרק עם 5 מיקרוליטר של השעיית התא. לאחר הרדמת הדג המוקרן בטריקאין, הניחו אותו על צדו על קימגבון לח.

ייצבו את הדג ביד אחת והכניסו את המחט כשהשיפוע פונה כלפי מעלה בזווית של 45 מעלות לתוך צלע הדג שמעל חלל הצפק בערך באמצע הדרך בין הגבול האחורי של המוח האחורי לגבול הפנימי של סנפיר הגב. לחצו בעדינות על הבוכנה. אפשרו לדגים להתאושש במי דגים מתוקים והתבוננו בדגים מדי יום לקליטת גידולים. אם התרחשה קליטה, ניתן לראות גם המשך צמיחה והתפתחות מחלות.