אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:08 דק׳ • April 30th, 2023
מולקולות הידבקות של תאי אפיתל, או EpCAMs, הן גליקופרוטאינים טרנסממברניים על פני השטח המתבטאים יתר על המידה בתאי אפיתל המתרבים במהירות בסרטן הערמונית. כדי לבודד תאים המבטאים EpCAM, התחל עם חוט בדרגה רפואית הנושא קצה מצופה זהב פונקציונלי. שכבות פונקציונליזציה ג'ל פולימרי המכיל נוגדנים ספציפיים ל-EpCAM קשורים קוולנטית.
טבלו את החוט בתרחיף דם היקפי המכיל תאים סרטניים המסומנים בפלואורסצנט. ודא שהחלק הפונקציונלי נשאר טבול בתרחיף הדם. ה-EpCAMs על תאי הסרטן מזהים ונקשרים לנוגדנים הספציפיים שלהם המתפקדים על החוט.
שטפו עם מאגר כדי להסיר תאים לא קשורים ממשטח החוט. כופפו את החוט והרכיבו אותו על מגלשת זכוכית המכילה מאגר, כאשר החלק הפונקציונלי שקוע במאגר. השתמש במיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לבדוק פלואורסצנטיות בהירה מציטופלזמה וגרעינים של תאים ולאשר את נוכחותם של תאים שנלכדו על החוט.
טפל בחוט עם מאגר שחרור. האנזימים הפרוטאוליטיים במאגר מבקעים את הג'ל הפולימרי, ומשחררים את קומפלקסי תאי הנוגדנים-סרטן לתוך המאגר. צנטריפוגה את מכלול החוט כדי לאסוף את קומפלקסי תאי הנוגדנים המשוחררים בגלולה. הסר את החוט ואת הסופרנטנט המכיל אנזים. השעו מחדש את הגלולה המכילה תא מטרה במדיום מתאים.
ב-5 מיליליטר של דם היקפי, הוסיפו כ-500 עד 500,000 תאים ולאחר מכן ערבבו על ידי היפוך הצינור. לאחר הוצאת החוט מתא האחסון, הסר את מ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים