כימות היווצרות קפלים ממברניים באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק

ממריצים חיצוניים מפעילים תאים וגורמים לבליטה תלת מימדית של קרום מעגלי, או היווצרות סלסול ממברנה, החיונית לפעילויות תאיות שונות.

כדי לדמיין היווצרות סלסול קרום, התחל עם צלחת מרובת בארות המכילה כיסוי בבסיס. בחלק העליון של הכיסוי יש מקרופאגים מתורבתים.

טפל במקרופאגים אלה באמצעות מולקולות ממריצות המפעילות את התאים, ומקלות על ארגון מחדש של שלד הציטו והיווצרות בליטת הממברנה. שכבו את התאים בתמיסה מקבעת, קשרו את החלבונים ושמרו על המבנה התאי.

טפל במקרופאגים הקבועים עם ריכוזי אלכוהול הולכים וגדלים להתייבשות מוחלטת. ייבשו את המקרופאגים הללו באמצעות מייבש נקודתי קריטי, תוך ביטול עקבות מים להדמיה טובה יותר.

התקן את הכיסוי על מיקרוסקופ אלקטרונים סורק, או SEM, מחזיק דגימה באמצעות סרט מוליך. מקרטע ציפוי את הכיסוי המכיל מקרופאגים בשכבת מתכת דקה, מה שמבטיח מוליכות אלקטרונית טובה במהלך ההדמיה.

הנח את הכיסוי בתא ה- SEM. מקד את קרן האלקטרונים על הכיסוי. קרן האלקטרונים פוגעת בקרום המקרופאג המצופה מתכת, וגורמת ליצירת אלקטרונים משניים באנרגיה נמוכה מפני השטח של הממברנה.

הבליטות התלת-ממדיות מפזרות אלקטרונים באופן שונה משאר הממברנה, ומדגישות את התכונות הללו על פני התא. הגלאי אוסף את האלקטרונים המפוזרים מאזורי פני התא השונים, ויוצר תמונת ניגודיות.

בתמונת ה-SEM, מקרופאגים נראים כהים יותר עם בליטות עגולות בהיר