הדמיית פאזה כמותית תלת מימדית לאפיון תת-סוגים של לימפוציטים

טען תרחיף תת-סוג לימפוציטים לתוך תא הדמיה.

מקם את החדר על שלב מיקרוסקופ הדמיית הפאזה הכמותית התלת מימדית.

התאם את פרמטרי המיקרוסקופ ואת מישור המוקד להדמיה אופטימלית.

במהלך הדמיית לימפוציטים, קרן הלייזר מתפצלת לקרני ייחוס ודגימה.

מכשיר המיקרו-מראה הדיגיטלי, הכולל מערך מיקרו-מראה בנתיב קרן הדגימה, מאפשר לקרן להסתובב 360 מעלות סביב הציר האופטי.

כל קרן העוברת דרך הלימפוציט עוברת שינוי פאזה המבוסס על שינויים במקדם השבירה בתוך התא.

הדגימה המתקבלת ואלומות הייחוס מתאחדות מחדש ויוצרות הולוגרמה דו-ממדית.

רצף של הולוגרמות המכילות מידע פאזה ומשרעת מזוויות שונות נלכד באמצעות סיבוב הקרן סביב הלימפוציטים.

רכוש הולוגרמות רקע מרובות עם זוויות תאורה משתנות, למעט לימפוציטים.

באמצעות אלגוריתם טומוגרפיית העקיפה, שחזר את ההולוגרמות לטומוגרפיה תלת מימדית של מקדם שבירה, המספק מידע מורפולוגי וביוכימי של לימפוציטים ללא צורך בתיוג.

להדמיה אופטימלית, יש לדלל כל דגימת תא לריכוז של 180 תאים למיקרוליטר של מדיום RPMI, ולהזריק לאט 120 מיקרוליטר מהדגימה המדוללת הראשונה לתא הדמיה. לאחר אישור היעדר בועות בתוך החדר, הנח טיפת מים מזוקקים על עדשת האובייקט של מיקרוסקופ פאזה כמותי תלת מימדי, והנח את תא ההדמיה על שלב התרגום של המיקרוסקופ. כוונן את ה-stagה כך שהדגימה תתיישר עם עדשת המטרה, ולחץ על פוקוס ומשטח בלשונית כיול של פרספקטיבת המיקרוסקופ של תוכנת ההדמיה, כדי להתאים את המיקומים הציריים של האובייקטיב, ועדשות המעבה בהתאמה.

לחץ על מצב אוטומטי כדי ליישר את המטרה, ועדשות הקבל. כדי לייעל את היישור, פתח את מצב סריקה והתאם ידנית את העדשות כדי ליישר את תבנית התקן המיקרו-מראה הדיגיטלית למרכז. לאחר מכן, חזור למצב רגיל והתאם את שלב התרגום כדי לאתר תא בשדה הראייה. התאם את המיקום הצירי של עדשת האובייקט כדי למצוא את מישור המוקד עד שגבול הדגימה המוצג על המסך כמעט בלתי נראה.

חשוב להתאים בצורה מושלמת את המיקוד של התא כדי ליצור טומוגרפיה תלת מימדית אופטימלית. אם התמונה לא תצולם כראוי, שחזור תלת מימד ייפגע וכתוצאה מכך טומוגרפיה רועשת.

כוונן את שלב התרגום כדי למצוא מיקום ללא תא, ולחץ על כיול כדי למדוד הולוגרמות דו-ממדיות מרובות עם זוויות תאורה משתנות. התאם את שלב התרגום כדי לאתר תא במרכז שדה הראייה, ותחת הכרטיסייה רכישה, תן שם לדגימה המצולמת.

לחץ על תמונת מצב תלת-ממדית כדי למדוד את ההולוגרמות של התא באמצעות אותן זוויות הארה כמו עבור ההולוגרמות הדו-ממדיות שנמדדו זה עתה. כאשר הנתונים שנרכשו מופיעים בלוח ניהול הנתונים, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על הנתונים ולחץ על תהליך כדי לשחזר טומוגרפיה תלת-ממדית של מקדם שבירה מההולוגרמות הדו-ממדיות באמצעות אלגוריתם טומוגרפיית העקיפה המיושם בתוכנת ההדמיה. לאחר ההדמיה, בחלונית ניהול הנתונים, לחץ לחיצה ימנית על הנתונים ולחץ על פתח כדי להציג את הנתונים.

לחץ על מרכז התא כדי למקם אותו מחדש ולחץ על RI Tomogram בחלונית Data Manager. בכרטיסייה קביעה מוגדרת מראש, לחץ על טען ולחץ פעמיים על lymphocytes.xml, שהיא פונקציית העברה מוגדרת מראש המסופקת על-ידי תוכנת ההדמיה כדי להציג באופן חזותי את הטומוגרפיה בהתאם להתפלגות RI תלת-ממדית. גלול את העכבר כדי להגדיל את התצוגה וגרור את התא כדי לסובב אותו בכיוון כלשהו.