הדמיה וכימות של צברי חלבונים במוחות דרוזופילה מהונדסים גנטית

התחל עם מוחות דרוזופילה מהונדסים גנטית. מוחות אלה מבטאים חלבון מוטנטי אדום מתויג פלואורסצנטי בתא העצב שיכול להתפשט לתא הגליה שמסביב, ומבטא את החלבון הנורמלי הצהוב המתויג פלואורסצנטי, מה שגורם להצטברות שלהם.

הוסף תמיסה מקבעת השומרת על שלמות התא.

הסר את הקיבוע ושטוף בעזרת מאגר.

הוסף מגיב נוגד דהייה ודגר כדי למנוע דהייה של אותות פלורסנט.

העבירו את המוח למגלשה והסירו עודפי נוזלים.

אפשרו למוח להיצמד לשקופית.

בעזרת חתיכות קטנות של כיסוי כמרווחים, הניחו עליהם כיסוי כיסוי. הוסף מגיב נגד דהייה ואטום אותו.

תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, צלם תמונות באמצעות אורכי גל עירור שונים עבור פלואורסצנטיות אדומה וצהובה.

באמצעות תוכנת ניתוח תמונה, כמת את אגרגטים של החלבון.

לוקליזציה משותפת של פלואורסצנציה אדומה וצהובה מצביעה על התפשטות של חלבונים מוטנטיים.

לאחר שכל המוחות נותחו, העבירו את צינור האיסוף למזין בטמפרטורת החדר ונדנדו אותם למשך כ-5 דקות. לאחר תקופת הקיבוע, הסר את רוב תמיסת הקיבוע באמצעות פיפטה P1000 והשליך אותה, תוך הקפדה רבה להשאיר את המוח בצינורות. זה דורש יניקה עדינה והתבוננות קפדנית.

לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר PBST טרי למוח. מכסים את הצינור ונותנים לו להתנדנד על האגוז למשך כדקה כדי לשטוף את הקיבוע שנותר. לאחר מכן, הסר את התמיסה וחזור על שלב הכביסה הקצר הזה.

לאחר שתי השטיפות הקצרות יש שטיפה אחת של