מהו המח עצם?

המח עצם הוא רשת של תאים בחדרי המוח האחראיים על ייצור נוזל השדרה.

מדוע קיבוע חשוב בהכנת מדגם?

קיבוע משמר את המבנה התאי ומונע השתנות בשלבי העיבוד הבאים.

מה התפקיד של טטרוקסיד אוסמיום בפרוטוקול?

טטרוקסיד אוסמיום נקשר לשומנים של קרום התא, ומייצב את הממברנות להדמיה טובה יותר.

איך ההתייבשות משפיעה על דגימות רקמה?

ההתייבשות מונעת עיוות של מבנה הרקמה במהלך ההדמיה על ידי הסרת תכולת המים.

מהו מטרת ציפוי הדגימה בפלטינה?

שכבת הפלטינה מפזרת אלקטרונים במהלך SEM, ומונעת הצטברות מטען ומיזעור חסרי משמעות.

הדמיה של מקלעת כורואיד במוח עכבר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קחו את מקלעת הכורואיד ממוח עכבר בסל דגימות.

הרקמה, הממוקמת בתוך חדרי המוח, מכילה שכבה של תאי אפיתל הכוללים מיקרוווילי על פני השטח האפיקליים שלהם.

דגירה של הרקמה בתמיסה מקבעת כדי לשמר את הארכיטקטורה התאית שלה.

יש לשטוף עם מאגר כדי להסיר עודף קיבוע ולייצב את ה-pH.

דגרו את הרקמה עם אוסמיום טטרוקסיד שנקשר לשומנים בקרום התא, תוך שמירה על יציבות הממברנה, ולאחר מכן שטפו עודפי מגיב

ייבש את הרקמה באמצעות ריכוזי אלכוהול הולכים וגדלים כדי למנוע עיוות רקמות במהלך ההדמיה.

יבש את הרקמה, אבטח אותה על תושבת דגימה מצופה פחמן, ולאחר מכן צפה אותה בשכבת פלטינה מוליכה.

באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק, מקד קרן אלקטרונים על פני השטח. שכבת הפלטינה מפזרת אלקטרונים, מונעת הצטברות מטען וממזערת את חפצי ההדמיה.

גלאי לוכד את האלקטרונים המפוזרים לאחור מפני השטח, ומייצר תמונה של הרקמה המציגה תאי אפיתל עם מיקרוווילים.

כדי לבצע את הכנת הדגימה ל-SEM, העבירו את מקלעת הכורואיד המבודדת הטרייה לתמיסת קיבוע טרייה, ודגרו למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר שתסיים, שטפו את הדגימה שלוש פעמים באמצעות 3 עד 5 מיליליטר של מאגר נתרן קקודילאט 0.1 מולארי למשך חמש דקות כל אחד.

לאחר תיקון הדגימות ב -3 עד 5 מיליליטר של 2% אוסמיום טטרוקסיד במאגר נתרן קקודילאט 0.1 מולרי למשך 30 דקות. לאחר מכן שטפו את הדגימות שלוש פעמים למשך חמש דקות כל אחת באמצעות 3 עד 5 מיליליטר מים טהורים במיוחד. לאחר מכן, יבשו את הדגימות בסדרה הולכת וגדלה של ריכוזי אלכוהול אתילי קרים כקרח עם 15 דקות לכל תמיסת אלכוהול אתילי. השתמש במייבש נקודה קריטית כדי לייבש את הדגימה כראוי. מקם את הדגימה בזהירות על תושבת דגימה עם מדבקת פחמן, ודמיין את דגימות מקלעת הכורואיד באמצעות SEM.