הדמיית דינמיקת סידן תת-תאית בתאי עצב של Caenorhabditis elegans

קח שני זני Caenorhabditis elegans טרנסגניים נפרדים על מגלשות עם רפידות אגר. הרפידות מכילות תמיסת גלגול עם חומר משתק הממזער את התנועה.

חוט העצב הגחוני של התולעים, או VNC, מכיל אינטרנוירונים מעוררים המבטאים מדדי סידן ציטופלזמיים בזן אחד ומדדי סידן מיטוכונדריאלי בשני.

הניחו כיסוי כדי לגלגל את התולעים, כוונו את ה-VNC להדמיה, ואז מקמו אותן מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי.

השתמש באור נראה כדי לאתר את התולעים, ולאחר מכן עבור למצב פלואורסצנטי.

בתאי עצב במנוחה, סידן תוך-תאי נמוך שומר על האינדיקטורים לא קשורים, וכתוצאה מכך פלואורסצנטיות חלשה.

פעילות עצבית ספונטנית פותחת תעלות סידן מגודרות מתח, ומאפשרת זרימת סידן.

בזן עם אינדיקטורים ציטופלזמיים, סידן נקשר לאינדיקטורים, ומשפר את הקרינה הציטופלזמית.

עודף סידן ציטופלזמי נכנס למיטוכונדריה דרך תעלות. בזן עם אינדיקטורים מיטוכונדריאליים, קשירת הסידן מגבירה את הקרינה המיטוכונדריאלית.

דמיין את הנוירונים בשני הזנים כדי לנטר את דינמיקת הסידן התת-תאית.

בצינור תרבית זכוכית בגודל 13 על 100 מילימטר, הכינו 3 מיליליטר של אגר 10% על ידי המסת אגר בדרגה מולקולרית ב- M9 ומיקרוגל למשך מספר שניות. להכנת רפידות האגר, הכינו תחילה שתי שקופיות על ידי הוספת שתי שכבות של סרט מעבדה. לאחר מכן הנח שקופית מיקרוסקופ בין שתי השקופיות. חותכים את הקצה של קצה פיפטה של 1,000 מיקרוליטר ומשתמשי