Name: הכנת פקטור T צמיחת תאים מן Splenocytes עכברוש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T22:24:33.000+00:00
Duration: 18 min 27 s
Description: למדו הכנת פקטור צמיחת תאי T מספלנוציטים של עכברושים בריאים באמצעות גירוי בקונקנבלין A. שיטה זו מאפשרת הרחבת תאי T אנטיגן-ספציפיים במעבדה לחקר אימונולוגיה ותאי גזע.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח spleens לואיס חולדה (חולדות בין 160-200 הם הטובים ביותר). Dilacerate על קרח בצלחת פטרי המכילות PBS + אנטיביוטיקה (PBS-PS) בעזרת מסננת התא. שים בתוך שפופרת 50 מ&quot;ל. מלא עם PBS-PS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין של 10 דקות ב 4 ° C עד גלולה התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה ב NH 4 Cl 0.15 מ &#39;(5 מ&quot;ל לכל טחול). מערבבים בעדינות עם pipet ברציפות למשך 3 דק &#39;על קרח lyse אריתרוציטים. מלאו את הצינור עם המדיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין של 10 דקות ב 4 ° C עד גלולה התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את התאים פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים. הטחול עכברוש נותן 200-250000000 תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרעים התאים ב -2 מיליון דולר מ&quot;ל במדיום שלם: 50 מ&quot;ל לכל בקבוק 75 ס&quot;מ 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תנו לגדול במשך 48 שעות בחממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין 15 דקות ב 4 ° C עד גלולה התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את supernatant; להשליך את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 15 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​mannoside מתיל אל supernatant. מערבבים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסנן (0.2 מ&quot;מ) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot ולאחסן ב -20 ° C. יכול להיות כל הזמן על 4 מעלות צלזיוס למשך 10 ימים במקרה הצורך. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blocking+of+voltage-gated+K%2B+channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. 166, 936-944 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K%2B+channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%2C+a+model+for+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad%22%5BJournal%5D)">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).</li>
<li>Mor, F., Cohen, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation+of+Lewis+rat+encephalitogenic+T+cell+lines%3A+T-cell-growth-factor+is+superior+to+recombinant+IL-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2.</a> J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

אנחנו מכינים TCGF מ splenocytes לואיס עכברוש מאז שאנחנו בקביעות להרדים חולדות נאיבי מהמאמץ הזה לקצור בסרום thymi לעורר לואיס עכברוש T שורות תאים במבחנה. TCGF זה יכול לשמש כדי לקדם את הצמיחה ואת ההישרדות של שורות תאים T מ זני עכברים אחרים. TCGF יכול גם להיות מוכנים מן זנים אחרים של חולדות.

כדי להכין מדיום תרבות להשלים את הפעולות הבאות כדי להוסיף בקבוק 500 מ&quot;ל של RPMI 1640 וסטרילי, מסנן: FCS 10%; 1 בקבוק סן ז&#39;רמן: 5 מ&quot;ל ויטמינים RPMI; 5 נתרן pyruvate מ&quot;ל, 5 מ&quot;ל שאינם חיוניים חומצות אמינו, 50 אממ בטא mercaptoethanol; 2 UG / ml Concanavalin א

הכנת פקטור t צמיחת תאים מן splenocytes עכברוש

Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes

תחזוקה של אנטיגן ספציפי לערמונית T שורות תאים או שיבוטים בתרבות דורש הפעלת סיבובים של אנטיגן-Induced מופרדות שלבי 1,2 הרחבת התא. תוספת של אינטרלוקין 2 לתקשורת התרבות בשלב ההתרחבות נחוצה כדי למנוע מוות של תאים ו מספיק כדי לשמור לטווח קצר שורות תאים T אבל הוכח להגדיל Th1 קיטוב 3. החלפה של אינטרלוקין 2 בפקטור תא T צמיחה (TCGF) אשר מכיל תערובת של ציטוקינים הוא יעיל יותר מאשר אינטרלוקין 2 בשמירה לטווח ארוך שורות תאים T במבחנה 3. יתר על כן, TCGF יכול בקלות להיות מוכנים בכמויות גדולות במעבדה, והוא הרבה יותר זול מאשר רקומביננטי אינטרלוקין 2. כאן, אנו מראים כיצד להכין TCGF מ supernatants עכברוש splenocyte תרבות. במשך התהליך הזה, שאנחנו קוצרים spleens מ נאיבי חולדות לואיס מורדמים עבור התימוס ואיסוף הדם. אנחנו מכינים תא בודד השעיות מן spleens, lyze את כדוריות הדם האדומות של הלם אוסמוטי, ואת הזרע splenocytes במדיום תרבות. התאים מגורה עם concanavalin, mitogen כי הלא סלקטיבי מפעיל כל T לימפוציטים עכברוש, וישכנע את הייצור של ציטוקינים. Supernantant תרבות נאסף 48 שעות לאחר מכן concanavalin andexcess חייב mannoside מתיל אלפא כדי למנוע את הפעלת הקווים תא T אשר TCGF יתווספו. TCGF אז הוא סטרילי, מסונן, aliquoted, ומאוחסנים ב -20 ° C.

אנו מתארים את הכנת גורם תא T צמיחה המשמש הרחבה של מבחנה של אנטיגן ספציפי לערמונית קווי עכברוש T לימפוציטים.

הכנת פקטור T צמיחת תאים מן Splenocytes עכברוש

תחזוקה של שורות תאי T או של קלונים ספציפיים לאנטיגן בתרבית דורשת סבבים של הפעלה מושרית על ידי אנטיגן, המופרדים על ידי פאזות של הרחבת תאים 1,2. ...

שלום, אני כריסטין ביטון. אני עזרת מחקר במעבדה של ג'ורג' צ'ן במחלקה לפיזיולוגיה וביופיזיקה של אוניברסיטת קליפורניה באירוואין. ובשני הימים הבאים אראה לכם כיצד להכין TCGF, שהוא קיצור של T cell growth factor.לכן, עבור תרביות תאים שגרתיות, כאשר איננו זקוקים לידע מדויק על הרכב הציטוקינים במצע התרבית, אנו משתמשים ב-T-cell growth factor, שהוא על-נוזל (supernatant) מתרבית של תאי טחול, המכיל את הציטוקינים הדרושים לסיוע בהתרחבות תאי ה-T. דרך ההכנה של ה-TCGF היא על ידי הוצאת הטחול מחולדות Lewis בריאות, הכנת תרחיף של תאים בודדים, הסרת תאי הדם האדומים באמצעות ליזיס, ולאחר מכן גירוי של התאים המונונוקליאריים באמצעות Con A (Concanavalin A), אשר יעניק גירוי לתאי ה-T להפיק את כל הציטוקינים הדרושים לצמיחתם. כדי להפיק את ה-TCGF, עלינו להפעיל את התאים.הדרך שבה אנו מבצעים זאת היא על ידי הוספת לקטין Concanavalin A, המקוצר כ-Con A, לתרבית התאים שלנו. כאשר אנו מוסיפים Con A לתרבית התאים, הוא נקשר לקומפלקס הקולטן של תאי T הגליקוזילציה, ובשל הקישור למספר קומפלקסים בו-זמנית, הוא יבצע תהליך הנקרא capping. כך הוא יגרום לאגרגציה, ויצור צבר של כל הקולטנים על פני השטח של התא, דבר שישרה אות פעולה בלימפוציטים מסוג T.לאחר שהתאים הופכים לפעילים, הם יעברו תהליך של blast. כלומר, הם יגדלו ואז יתחילו להפריש ציטוקינים. בתחילה חשבנו ש-TCGF הוא בעיקר interleukin two, אך כיום אנו יודעים שזה לאו דווקא המקרה.הוא מכיל גם interferon gamma, TNF alpha וכנראה גם cytokines בכמויות קטנות מאוד, הנחוצות רק כדי לשמור על חיוניות התאים לאחר 48 שעות בתרבית; התאים ייצרו את כל ה-cytokines הדרושים לנו. לכן, אנו עומדים להסיר את התאים, וכשנסיר אותם ונשאר עם supernatant בלבד, עדיין יישאר חלק מה-conal החופשי ב-snat. דבר זה יהווה בעיה, מכיוון שאנו מעוניינים להשתמש ב-T-cell growth factor שלנו כדי לשמור על צמיחתם של קווי תאי T.ואם נשאיר את ה-concanavalin חופשי שם, הוא יפעיל את התאים כאשר איננו רוצים שהם יופעלו. לכן, כדי לפתור בעיה זו, נוסיף עודף של סוכר שייקשר לכל ה-concanavalin החופשי בתוך התמיסה. כך הוא יהיה מושבת לחלוטין ולא ייקשר לקולטנים גליקוזילים אחרים על התאים כאשר נוסיף את ה-TCGF לתרבית.אם כן, נתחיל. השלב הראשון בניסוי זה הוא הוצאת הטחול מהחולדה מיד לאחר ההמתה. זה מה שאעשה כעת באמצעות מכשירים סטריליים.ברגע שהוצאתי את הטחולים, אני אעביר אותם ל-PBS מועשר באנטיביוטיקה, ובאשר לאנטיביוטיקה אני משתמש בפניצילין וסטריפטומייצין. אז בואו נתחיל. אני מרסס את החולדה ב-70% ethanol כדי להבטיח שלא תהיה כל זיהום של התרבית שלי.כעת, באמצעות המכשירים שלי, אבצע חתך קטן בעור כאן. לאחר מכן אסיר שכבת שריר והטחול יופיע ממש כאן. אני לוקח פינצטה אחרת ומושך בעדינות את הטחול החוצה מבלי לפגוע בו.אני מסיר את הרקמה החיבורית באופן הזה. כעת יש לי את הטחול. כמובן, אני נזהר מאוד לא לפגוע בדבר אחר בתוך חלל הבטן, מכיוון שכל פגיעה במעי תוביל לזיהום מיידי של הטחול שלי.כעת אעביר את הטחול לשפופרת המכילה PBS בתוספת אנטיביוטיקה. שפופרת זו אשמור על קרח. כעת השגתי את הטחולים משלוש חולדות.כעת אנו מוכנים להכין תרחיף של תאים בודדים מהטחולים הללו. כעת, לאחר שיש לי את הטחולים, העברתי אותם למנדף תרביות רקמה כדי להכין מהם תרחיף של תאים בודדים באמצעות מסנני תאים של 70 מיקרון. אדרש למספר דברים כדי להכין את תרחיף התאים הבודדים מהטחולים.אני זקוקה למכשרים סטריליים, זוג פינצטות וזוג מספריים. לאחר מכן, הנחתי את הבוכנה של מזרק סטרילי של 1 mL בתוך פטריה.ובפיתריה נוספת הנחתי מסנן תאים של 70 מיקרון ב-10 milliliters של PBS בתוספת אנטיביוטיקה. השלב הראשון הוא לוודא שהטחולים נקיים, כיוון שכפי שניתן לראות כאן, ישנם עדיין חתיכות קטנות של רקמה חיבורית ואני אסיר אותן כיוון שהן יסתימו את מסנן התאים במהירות. לשם כך, אני פשוט חותך את החלקים שאינם רצויים ומשליך אותם אל מכסה הפיתריה.כעת, כאשר הטחולים נקיים ברובם, אני אקח את הטחולים אחד אחד, אעביר אותם למסנן התאים (cell trainer) ואחתוך אותם לחתיכות קטנות, ואערבב את שלושת הטחולים. השלב הבא הוא יצירת סספנסיה של תאים בודדים. כדי להבטיח שכל התהליך יהיה סטרילי, אני לא אגע כלל במסנן התאים ואשתמש בבוכנה של מזרק סטרילי של 1 ml כדי לדחוס את חתיכות הטחול דרך מסנן התאים.וכפי שניתן לראות בחלקו החיצוני של מכשיר הריסוק (cell trainer), אני מכין תרחיף של תאים בודדים. בסיבוב הראשון עדיין נשארו כמה חתיכות קטנות של טחול, אך אני כבר הולך להוציא את תרחיף התאים הבודדים. כבר העברתי אותו לשפורת של 50 mil השמורה על קרח.כעת אמלא שוב את מסנני התאים ב-10 mL נוספים של PBS ואנטיביוטיקה. לכן, אקח כ-10 mL נוספים של PBS עם אנטיביוטיקה; זה לא חייב להיות בדיוק 10 mL, שכן אנו רק שוטפים. אשפוך זאת לתוך מסנני התאים ואוסיף להשתמש באותו הליך.אני חוזר לבוכנה של המזרק ולוחץ דרך ה-ocid מעט יותר. כמובן שמעולם לא תצליחו להעביר הכל מכיוון שיש רקמות חיבור וחלקי שומן קטנים שלא הצלחתי להסיר ויישארו במסננת התאים. אך אתם אמורים להעביר את רוב הטחול למסננת התאים.כעת אני חוזר בדיוק על הפעולות שביצעתי קודם לכן. אני אקצור את תרחיף התאים הבודדים שלי ואוסיף אותו לאותה השן. בשלב זה כמעט ולא נותר דבר מהמסננת בתוך מסננת התאים, וה-PBS שיוצא צלול הרבה יותר. אני פשוט אשטוף פעם נוספת, וכעת רוב התאים אמורים להיות בחוץ.כעת יש לי תרחיף של תאי PLE בודדים, ואני אסובב אותם בצנטריפוגה פשוט כדי להשקיע אותם למשקע. סבוב למשך 8 עד 10 דקות יספיק. כעת סובבנו את תאי ה-PLE ויש לנו משקע יפה.לכן, מה שאעשה הוא להסיר את הנוזל העליון ולאחר מכן אבצע ליזיס לתאי הדם האדומים. אני אשעה את המיוציטים בתוך אמוןיום כלוריד. זהו תמיסה של 0.15 molar אמוןיום כלוריד, ואשתמש ב-5 mL לכל טחול.מכיוון שיש לי שלושה טחולים, אשתמש ב-15 milliliters של ammonium chloride ואעשה זאת על קרח. כדי לפרק את האריתרוציטים, אעביר את הנוזל בעדינות למעלה ולמטה בעזרת פיפטה במשך שלוש דקות. אוקיי, נשתמש במיקרוסקופ זה עם החשיפה הגבוהה יותר כאן.כעת סיימתי לנתח את האלקטרוציטים במשך שלוש דקות. אני עומד למלא את המבחנה ב-PBS, או שניתן להשתמש גם במצע גידול. זאת כדי להחזיר את האוסמולריות של התמיסה לטווח הנורמלי עבור התאים.אני אסחרר את התאים למטה, כפי שעשיתי קודם לכן, למשך 8 עד 10 דקות כדי להשקיע אותם. לאחר מכן, אשטוף אותם פעמיים באמצעות אותו PBS עם אנטיביוטיקה. כעת אנו מסחררים את התאים לאחר שחרור האלקטרוציטים, ואל תדאגו – אנחנו אף פעם לא מקבלים שחרור של מאה אחוז מהאלקטרוציטים.כך המשקע עדיין יהיה אדום, אך הנוזל העליון יהיה צלול יותר. כעת ארוקן את הנוזל העליון, אפריס את המשקע, אוסיף PBS עד לנפח של 50 ml, אסחר ואחזור על השלב הזה פעם נוספת כדי שיהיו שני שטיפות. לאחר מכן אוכל לספור אותם. שטחתי את המיוציטים פעמיים, לאחר מכן תליתי אותם במצע גידול וספרתי אותם באמצעות ציטומטר.כמצופה. משלושה טחולים קיבלתי כ-600 מיליון תאים, וזה צפוי כיוון שטחול אחד מספק בדרך כלל 200 עד 250 מיליון תאים. לכן, כעת אני הולך לזרוע את התאים בריכוז של 2 מיליון למ"ל במצע המעשיר ב-10% fetal calf serum.ולמדיום זה אני עומד להוסיף 2 µg/mL של conc A כדי לעורר את התאים. לאחר מכן, אני פשוט אכניס את התאים לאינקובטור למשך 48 שעות. התאים שהו את התאים באינקובטור במשך 48 שעות וכפי שאראה לכם, הם גדלו היטב.המצע הפך לכתום. לפיכך, אנו מוכנים כעת להשלים את ההכנה עבור ה-TCGF. כפי שאתם זוכרים, הוספתי con carnaval לתליה התאית שלי כדי להפעיל את התאים.אם כך, ה-concanavalin A הוא לקטין. הוא ייקשר לסוכרים על פני כל הרצפטורים של תאי ה-T ויפעיל באופן מלאכותי את כל התאים הללו. הבעיה העומדת בפנינו כעת היא שעדיין נשאר חלק מה-concanavalin A בנוזל העל של התאים.ומכיוון שאנו עומדים להשתמש ב-snat בתרביות T cell אחרות כדי להרחיב את התאים, איננו רוצים ש-con carnaval in יהיה נוכח בתרביות תאים אלו. לכן, כדי להיפטר ממנו, אני אוסיף עודף של סוכר שאליו con naval in נקשר, וזהו methyl alpha D cyte המוצג כאן. אני אוסיף עודף של סוכר זה ואהמסס אותו לחלוטין.זה יקשור את כל ה-conc naval שנותר, ולאחר מכן אבצע סינון סטרילי לת上-סופרנטט של התאים ואקפיא את כל הנוזלים לשימוש בשבועות או חודשים הבאים. בואו נתחיל בשלב האחרון הזה. אני מוסיפה את הסופרנטט של תרבית התאים למבחנות בנפח 50 mil כדי שניתן יהיה לסבב אותן ולהיפטר מהתאים.לכן אני פשוט ממלא כמה מבחנות ככל שנדרש, ואני לא עושה זאת בתוך מנדף התרביות; אני יכול הייתי, אך מכיוון שבכל מקרה אצטרך לסנן את התמיסה שלי בסוף בגלל הוספת הסוכר, שאינו סטרילי, אני פשוט עושה זאת על השולחן. זה קל יותר. כעת שפכתי את כל התאים והעל-נוזל (supernatant) למבחנות הפאלקון בנפח 50 mil.כעת אעביר אותם לצנטריפוגה ואסבב אותם למשך כ-10 דקות. הסיבה היחידה לסבבבם היא כדי לשקיע את התאים למשקע, כך שיהיו לי עיליים צלולים. התאים שקעו כעת, ולכן העילי הוא צלול, וזהו החלק שרציתי לאסוף.כעת אאסוף את כל הנוזל העליון (supernatant) לתוך בקבוק תרבית נקי של 150 סמ"ר. לבקבוק זה אוסיף את הסוכר. בזמן שהתאים הופרדו בצנטריפוגה, שקלתי כמות סוכר מספיקה להוספה של 15 mg/ml של הנוזל העליון.אני אתן לזה להימסס לחלוטין, ולאחר מכן אבצע סינון סטרילי לנוזל העליון. כעת אני אוסיף את הסוכר בריכוז של 15 milligram per ml של הנוזל העליון. אני מחזירה את הפקק, ומכיוון שאיני עובדת בתנאים סטריליים, אין זה משנה אם חלק מהחומר יגיע אל הפקק, לכן אערבב עד שכל הסוכר יתרסס.זה אמור להיות די מהיר. כן, כל הסוכר מומס כעת. לכן, כל שעלי הוא לסנן באופן סטרילי את העילאי (supernatant) ואז אחלק אותו למנות (aliquot).בדרך כלל אני מכין מנות (aliquots) של 10 עד 15 ml השומר אותן בטמפרטורה של 20- מעלות. מנות כאלו ניתן לשמור למשך מספר חודשים. ניתן גם לשמור את ה-TCGF במקרר, אך במקרה כזה אשתמש בו במהלך 10 עד 15 הימים הבאים.במהלך היומיים האחרונים, הדגמתי לכם כיצד להכין גורם גדילה לתאי T; עלנוני זה פשוט מאוד להכנה וזול מאוד להפקה. לכן, אנו משתמשים בו לעיתים קרובות במעבדה כדי לתחזק את שורות תאי ה-T שלנו בתרבית, מבלי שנצטרך לרכוש תערובות יקרות של ציטוקינים. בהצלחה בניסוייכם.

preparing-t-cell-growth-factor-from-rat-splenocytes

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אקס הרחבה vivo של גידול תאים T-reactive באמצעות 1/Ionomycin Bryostatin ואת גמא נפוצים שרשרת גיבוש ציטוקינים

סרטון זה מדגים את ההקרנה של תרכובות אימונומודולטוריות באמצעות בדיקה מבוססת פלורסנט. לימפוציטים T שמקורם בעכבר מהונדס עם קלטות ביטוי חלבון פלואורסצנטי ירוק מטופלים בתרכובות אלה. אותות ה-GFP המשופרים והמופחתים מאפשרים לזהות את ההשפעות הממריצות והמעכבות של התרכובות, בהתאמה.

בדיקה מבוססת פלואורסצנטיות המשתמשת בלימפוציטים מהונדסים לבדיקת תרכובות אימונומודולטוריות

הסרטון מציג בדיקה מבוססת ציטומטריה של זרימה להערכת דומיננטיות חיסונית בלימפוציטים ציטוטוקסיים מסוג T או בתגובות CTL. תאי מטרה פלואורסצנטיים מוזרקים מציגים פלואורסצנטיות משתנה המתאימה לאפיטופים אימונוגניים. איסוף ומיון לאחר הטחול חושפים ירידה בתאים פלואורסצנטיים בעוצמה גבוהה, מה שמאשר דומיננטיות חיסונית בתגובות CTL.

בדיקה להערכת דומיננטיות חיסונית בתגובות לימפוציטים ציטוטוקסיים מסוג T

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת תאי T מסוג קולטן אנטיגן כימרי ספציפי לגידול (CAR). וקטורים רטרו-ויראליים הנושאים RNA מהונדס מעורבבים עם תאי טחול בתווך בתוספת אינטרלוקין-2 כדי לקדם הישרדות ושגשוג של תאי T. לאחר מכן התערובת מועברת לצלחת המצופה במקטעי פיברונקטין אנושיים רקומביננטיים וצנטריפוגה כדי להקל על איחוי הנגיף עם התא, מה שמאפשר לרנ"א להשתלב בגנום המארח ולייצר מכוניות הקשורות לפני השטח המכוונות לאנטיגן הגידול.

טכניקת Ex Vivo ליצירת תאי T קולטני אנטיגן כימריים ספציפיים לגידול

סרטון זה מדגים טכניקה ליצירת תאי T של קולטן אנטיגן כימרי ספציפי לאנטיגן (CAR) באמצעות התמרה רטרו-ויראלית. תאי מורין CD8+ T פעילים מתווספים לצלחת מיקרווול המצופה בשברי פיברונקטין רקומביננטיים. לאחר מכן מוצגים וקטורים רטרו-ויראליים המכילים RNA מהונדס המקודד קולטן אנטיגן כימרי ספציפי לאנטיגן (CAR), והלוחית עוברת צנטריפוגה כדי להקל על הטרנסדוקציה. לאחר הדגירה, התאים המומרים מבטאים CARs ספציפיים לאנטיגן על פני השטח שלהם.

טכניקה ליצירת תאי CAR T ספציפיים לאנטיגן

ניתן למנף את ההשפעות הלימפודו-דפלטיביות והאימונומודולטוריות של טיפול סטנדרטי בכימותרפיה והקרנות כדי לשפר את היעילות האנטי-גידולית של אימונותרפיה של תאי T. אנו מתארים שיטה ליצירת תאי T קולטני אנטיגן כימריים ספציפיים ל-EGFRvIII (CAR) ומתן אותם בהקשר של סטנדרט הטיפול בגליובלסטומה.

דור של תאי T CAR למאמצת תרפיה בהקשר של גליובלסטומה טיפול סטנדרטי

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול להבדיל מאתר granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing T helper (THGM) תאים מתאי CD4 + T נאיביים, כולל בידוד תאי CD4 + T נאיבי, הבידול של THGM, ו- ניתוח של תאים THGM. בשיטה זו ניתן ליישם לימודי ההוראה ותפקוד תאי THGM.

במבחנה הבידול של העכבר גורם גרנולוציט-מקרופאג-המושבה-מגרה (GM-CSF)-הפקת תאי T Helper (THGM)

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול לייצר במהירות, reproducibly articifical בהשראה ביולוגית, מתכלה אנטיגן הצגת תאים (aAPC) עם tunable גודל, צורה של הדם המצגת ל- T cell הרחבה שמחוץ או ויוו .

ייצור של אניסוטרופי אנטיגן מלאכותי פולימריים הצגת תאי CD8 + T Cell ההפעלה

MALT1 מסדיר מולדת חסינות אך איך זה מתרחש נשאר מעורפל. השתמשנו החומר המדכא paracaspase סלקטיבית MALT1 הטכנולוגי-827 לפענח את התרומה של MALT1 איתות מולדת במורד הזרם של קולטני לקטין דמוי כמו אגרה או C-type, הוכחת MALT1 מסדיר את הייצור של תאים מיאלואידים ציטוקינים, ויוצאת של קולטני לקטין דמוי C-type, באופן סלקטיבי.

תאים מיאלואידים מולדת איתות לשביל רגולציה על-ידי פעילות Paracaspase MALT1

אנו מתארים כאן הזרימה cyvivo try מבוסס בתוך שיטת ההרג המאפשרת לבדוק את החיסונית של האימונוטוקסיט T לימפוציטים (CTL) התגובות של הגידול מודל אנטיגן. אנו מספקים דוגמאות לאופן השימוש בבחינה אלגנטית זו למחקרים מכניסטיים ולבדיקת יעילות בסמים.

תפירה Vivo ציטורעילות Assays ללמוד אימונומימינינס ב-CD8 התגובות הספציפיות לגידול של תאים

אנו מציגים פרוטוקולים משופרים להתמרה רטרו-ויראלית של קולטני סחר וביות תחרותי כדי לחקור מיקום לימפוציטים ספציפיים לאיברים ומיקרו-סביבה בתיווך קולטנים. שיטה זו מציעה תובנות חשובות לגבי מנגנוני סחר בתאי חיסון ויש לה יישומים פוטנציאליים במחקר בסיסי וטיפולי עתידי.

התמרה רטרו-ויראלית יעילה וביות תחרותי לחקירת לוקליזציה של תאי T בתיווך GPCR במיקרו-סביבות רקמה מגוונות

למדו הכנת פקטור צמיחת תאי T מספלנוציטים של עכברושים בריאים באמצעות גירוי בקונקנבלין A. שיטה זו מאפשרת הרחבת תאי T אנטיגן-ספציפיים במעבדה לחקר אימונולוגיה ותאי גזע.

הכנת פקטור T צמיחת תאים מן Splenocytes עכברוש

גלה סרטונים נוספים