Name: תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-27T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: למד תכנות תאי גזע לטיפול באנגיוגנזה באמצעות ננו-חלקיקים פולימריים מתכלים. השיטה מדגימה העמסת גנים טיפוליים לתאי גזע מבודדים משומן אנושי והזרקתם לגפיים איסכמיים במודל עכברים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להכיר איגוד לב האמריקאי הלאומי מדען הפיתוח גרנט (10SDG2600001), סטנפורד Bio-X הבינתחומי יוזמת תכנית, וחוקרי הרפואה של אוניברסיטת סטנפורד תכנית מחקר למימון.

1. פולימר סינתזה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במנדף, לשקול את 3,523 מ&quot;ג של diacrylate butanediol (C) ולהעביר לבקבוקון נצנץ זכוכית המכיל בר ומערבב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום חום 5-אמינו-1-pentanol (32) ל90 ° C לsolubilize מלח, ולאחר מכן במנדף, לשקול את 1,533 מ&quot;ג 32 ולהוסיף לבקבוקון הנצנץ המכיל ג שיטה זו תגרום ליחס טוחנת של C: 32 = 1:1.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד מניח את הבקבוקון המכיל את שני הפתרונות על גבי צלחת ומערבבים. הגדר את מהירות ומערבבים ב600 סל&quot;ד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את בקבוקון הנצנץ לתנור ב90 ° C. מהירות ערבוב מוגדר 1,000 סל&quot;ד במשך 4 שעות. אם בר והמערבב נתקע, להנמיך את המהירות. לאחר 4 שעות, מהירות נמוכה יותר כדי 300 סל&quot;ד ולשמור על 90 מעלות צלזיוס עוד שעה 12-16. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 גרם של C32 ל10 מיליליטר של tetrahydrofuran נטול מים (THF) בבקבוקון נצנץ זכוכית המכיל בר ומערבב. עוטף בנייר כסף ועל מערבולת גבוהה עד שהיא נמסה באופן מלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בconta בקבוקון נצנץ זכוכית נפרדining בר ומערבב, מוסיף 10 מ&quot;מ של Tetraethyleneglycoldiamine (122). הוסף 40 מיליליטר של THF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח שני הבקבוקונים (C32 ו122) על צלחת ומערבבים במשך 5 דקות לאחר מכן לשלב ביחד. כסה בנייר כסף ומשאיר בטמפרטורת חדר תוך ערבוב ב400 סל&quot;ד 24 שעות. המוצר הסופי נקרא C32-122. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את 5 x 50 צינורות מיליליטר פלקון עבור כל אצווה 5 גרם של C32-122. שים לב למסה של כל צינור במחברת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 30 מיליליטר של אתר diethyl נטול מים לכל צינור פלקון 50 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה 10 מיליליטר של C32-122 לכל צינור פלקון 50 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות פלקון וורטקס במרץ אז צנטריפוגות ב 2,500 סל&quot;ד במשך 2 דקות. הערה: הפולימר המופק יאסוף בבסיס של הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחק את הפתרון העליון וחזור על שלבים 1.9 ו1.11 עוד פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצינורות הפתוחים המכילים C32-122 חולצו בייבוש וואקום הלילה. ודא כי כל הצינורות מוגנים מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את כל הצינורות המכילים C32-122 כדי לקבוע את המסה הסופית שלפולימר שחולץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את הפולימר המופק בDMSO נטול מים בריכוז של 100 מ&quot;ג / מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את הפולימר המומס ב -20 ° C המוגנים מפני אור ולחות. </li></ol> 2. זריעת תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום מעיל הבסיס של בקבוק תרבות רקמת T-150 עם ג&#39;לטין 0.1% (wt / כרך). ג&#39;לטין צריך להישאר בבקבוק במשך 30-45 דקות. ציפוי ג&#39;לטין עוזר הידבקות של ADSCs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ג&#39;לטין לשאוב מהבקבוק T-150 המצופה מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 4 x 10 6 ADSCs (≤ קטע 3) לבקבוק ב20 מיליליטר של DMEM המכיל 10% FBS, 1% פניצילין / סטרפטומיצין ו10 ng / ml bFGF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את בקבוק T-150 בחממה על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 לילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תתחיל בהליך transfection ביום המחרת. </li></ol> 3. Nanoparticle הכנה וTransfection <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההליך הבא הוא עבור ההכנה של חלקיקים המכילים DNA פלסמיד 16.1 מיקרוגרם ל1.0 x 10 6 תאים בפולימר לפלסמיד יחס משקל של 30:1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל פלסמיד דנ&quot;א (1 מ&quot;ג / מיליליטר, pVEGF165, Aldevron, ND, ארה&quot;ב) לריכוז סופי של 120 מיקרוגרם / מיליליטר בנתרן אצטט (25 מ&quot;מ) בצינור פלקון 15 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל C32-122 (100 מ&quot;ג / מיליליטר) לריכוז סופי של 3.6 מ&quot;ג / מיליליטר בנתרן אצטט (25 מ&quot;מ) בצינור פלקון שני 15 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשלב את התוכן של כל צינורות פלקון לתוך צינור אחד 15 מיליליטר בז ומערבולת באופן מיידי על גבוה עבור 10 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו הצינור לשבת בטמפרטורת חדר למשך 10 דקות להיווצרות nanoparticle להתרחש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד דוגרים, להחליף בינוני בבקבוק תרבות רקמות עם DMEM בתוספת 7.8 מיליליטר מלא ל1.0 x 10 6 תאים transfected. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את פתרון nanoparticle לבקבוק תרבית הרקמה ולהטות קדימה ואחורה כדי להתפשט באופן שווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הבקבוק בתרבית רקמה בחממה על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 2 שעות, החלף את nanoparticle מכיל תקשורת עם DMEM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות דגירה 2 שעות נוספות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, התאים מוכנים in vivo הזרקה. </li></ol> 4. Hindlimb איסכמיה נוהל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות אוניברסיטת סטנפורד הטיפול בבעלי חיים ועדת שימוש ופרוטוקולי APLAC אושרו. יצירת המודל העכברי של איסכמיה hindlimb מתבצע כפי שתואר לעיל. 8 אנא עיינו בהתייחסות להוראות מפורטות. תיאור קצר מסופק בהמשך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר תחת הרדמה עם 1-3% isoflurane מינון על ידי שאיפה וקצב זרימת חמצן של 1 ליטר / דקה. ודא עומק הרדמה על ידי קמצוץ הבוהן, ירידה בקצב נשימה, ועייפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להסיר שיער מאזור הבטן ושני אזורי hindlimb של העכבר עם קצף גילוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך במרכז המדיאלי ירך לכיוון קו האמצע ולאחר מכן חתך את כרית שומן שמעליה לשעברלהוות עורק הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולקשור את העורק בשני אתרים: אתר הדיסטלי (קרוב לברכיים) ואתר הפרוקסימלי (דיסטלי רק לרצועה מפשעתי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי ליצור ligations, להפריד את העורק מהווריד וחוט תפר משי 5-0 סביב העורק. לקשור את העורק עם שני קשרים כדי להפוך את קשירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העורק בין שתי נקודות קשירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטוף את אזור הניתוח עם PBS ולאחר מכן תפר את החתך נסגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתן להסיר בהרדמה עכשיו. שמור חם העכבר עד ההתעוררות מחודשת. לטיפול שלאחר ניתוח, ניתן להזריק 2-4 מ&quot;ג / קילוגרם לידוקאין תת עורי באתר החתך לפני מחדש התעוררות. ניהול כאב נוסף עשוי לכלול משלוח תת עורית של 0.05-0.1 מ&quot;ג / קילוגרם עצירות ב12 ו24 שעות. לנטר את מצב בריאותם של העכברים פעם ביום למשך שבעה ימים על ידי התבוננות שינויים בדפוס נשימה, כאב או מצוקה גלוי, וצבע עור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר איסכמיה hindlimb ידי ההדמיה זלוף דופלר לייזר.</li></ol> 5. זריקות תא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר תאי transfected והעכברים מוכנים, לשטוף תאי transfected עם PBS, trypsinize, צנטריפוגה, ולאחר מכן לספור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend תאים בצפיפות של 10 x 10 6 תאים למ&quot;ל ב-PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השעיות תא צריכה להיות מופרדות לתוך צינורות Eppendorf נפרדים בהיקף של 110 μl. זה יבטיח כי כל עכבר מקבל כמות שווה של תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל עכבר תחת הרדמה (isoflurane 2.5%, קצב זרימת L 1 / חמצן דק &#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אזור ההזרקה עם מגבוני אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניצול מזרק טוברקולין 27 G, לצייר את התאים למעלה ולמטה לתוך המזרק כדי להבטיח השעיה הומוגנית מושגת. צייר את תא ההשעיה הנפח 100 μl לתוך המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק מחצית ההשעיה התא לאזור השרירים adductor ואז מזריק את החצי השני לאזור שריר שוק. לאחר הזרקה, השאר את המזרק במקום לפחות 15-30 שניות ללמנוע דליפה של ההשעיה התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקרות נאותות למחקר בבעלי החיים כוללות: 1) תאים transfected עם פלסמיד ללא קידוד (למשל פלסמיד ללא פעילות ביולוגית); 2) תאים לבד: 3) PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר זריקות הושלמו, הסר את העכבר מההרדמה ולהתחמם עד מחדש Awakes העכבר. </li></ol> 6. הדמיה פליטת אור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל הדמיה פליטת אור (BLI), להרדים עכברים כפי שתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אזור ההזרקה עם מגבוני אלכוהול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק ניצול אינסולין, 15 D-וציפרין מ&quot;ג / מיליליטר (המצע לגחלילית בלוציפראז) עומס 100 μl. שמור על מצע מהאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לבצע זריקות intraperitoneal, להחזיק עכברים בעור הגב שלהם כדי למשוך את העור הקדמי שלהם מתוח. הכנס מחט intraperitoneally לאזור הבטן ולהזריק של מצע 100 μl. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בחדר ההדמיה לוציפראז IVIS תחת הרדמה. </li><li&gt; תמונת העכברים עם זמן חשיפה של 1.0 דקות. כאשר פרמטרים מוגדרים, להתחיל לרכוש תמונות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התמונה שנרכשה, לסמן את האזור של עניין על מנת למדוד את אות לוציפראז. במקרה זה, תסמן את איבר איסכמי באתר תא ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך למדוד את אות לוציפראז כל דקות 3-5 עד האות מגיע לשיא ומתחיל לרדת. זהו הערך מנוצל להשוואה על פני עכברים ועל פני כמה נקודות זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר יושלמו, להסיר את העכברים מהאולם וההרדמה. שמור על עכברים חמים עד ההתעוררות מחודשת. </li></ol> 7. לייזר דופלר זלוף הדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההדמיה זלוף דופלר הלייזר מתבצעת כפי שתואר לעיל. 8 ההליך מתואר כאן בקצרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני דופלר הדמיה העכבר צריך להיות נקי ומגולח באזורים שמעל שניהם hindlimbs ואזור הבטן כדי למנוע חפץ בשל שיער. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כשהכין לתמונת דופלר, mouצריך להיות מורדם se כפי שתואר לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את העכבר כדי 36 ° C על צלחת חמה תוך ניטור טמפרטורת גוף על ידי מדחום רקטלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העכבר על משטח שחור שאינו רעיוני ולשמור בהרדמה על ידי חרטום. העכבר צריך להיות ממוקם על פני השטח הגבי שלה עם איבריה החשופים באופן שווה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את חיישן הלייזר דופלר בערך 15 ס&quot;מ מעל העכבר ולכוון את מצביע הלייזר מהחיישן כלפי אזור המפשעה של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר סמן העכבר וחיישן דופלר נמצאים בעמדה, ניתן למצוא תמונות של ניצול תוכנת LDPIwin ידי לחיצה על הכפתור &#39;התחל&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדידות זלוף יחסית יכולים להילקח על ידי המצביע על שתי hindlimbs (איסכמי וללא איסכמי) כאזור של אינטרסים (ROI). היחס של זלוף הממוצע של איסכמי לhindlimb אינו איסכמי יציין זלוף היחסי. </li></ol> 8. רקמת קציר נוהל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מוכן tis עכבר קצירלתבוע היסטולוגיה ו / או עיבוד ביוכימיים, צריך להיות מורדמים בעכבר. הנה, את העכבר הוא מורדמים על ידי החשיפה לisoflurane 5% ל3-5 דקות, ולאחר מכן הרדמת חסד העכבר על ידי נקע בצוואר הרחם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את העור שמעל מקיף את hindlimb circumferentially באזור הדיסטלי הבטן ופרוקסימלי לhindlimb. העור נחתך מהגחון למשטחי הגב, כך שהעור יכול להיות אסוף מעל hindlimb לכף הרגל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מושך את עור גב, הגפיים יכולים להיות קטועים על ידי ניצול מספריים לנתיחה בוטים לחתוך במפרק האגן וירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שתי רקמות עיקריות נלקחות לניתוח: שרירי adductor המדיאלי ושרירי הגסטרוקנמיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבדיקת רקמות, כדי לשבץ את הרקמות אחת או בשתי בטמפרטורה אופטימלית חיתוך (אוקטובר) לcryosectioning. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאנליזה ביוכימית, לאסוף רקמות אחד או שני למיליליטר Eppendorf 1.5 ולצלול לתוך אמבט של חנקן נוזלי לפחות 2 דקות. הדגימות יכולות להיותמאוחסן ב -80 מעלות צלזיוס במשך עיבוד עתיד. </li></ol>

<ol><li>Deveza, L., Choi, J., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+angiogenesis+for+treating+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Therapeutic angiogenesis for treating cardiovascular diseases.</a> Theranostics. 2, 801-814 (2012).</li>
<li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+engineering+of+human+stem+cells+for+enhanced+angiogenesis+using+biodegradable+polymeric+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Genetic engineering of human stem cells for enhanced angiogenesis using biodegradable polymeric nanoparticles.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 3317-3322 (2010).</li>
<li>Mangi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+modified+with+Akt+prevent+remodeling+and+restore+performance+of+infarcted+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells modified with Akt prevent remodeling and restore performance of infarcted hearts.</a> Nat Med. 9, 1195-1201 (2003).</li>
<li>Lee, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+bone+healing+based+on+ex+vivo+gene+therapy+using+human+muscle-derived+cells+expressing+bone+morphogenetic+protein+2%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhancement of bone healing based on ex vivo gene therapy using human muscle-derived cells expressing bone morphogenetic protein 2.</a> Hum. Gene Ther. 13, 1201-1211 (2002).</li>
<li>Park, K. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+may+be+uniquely+suited+for+combined+gene+therapy+and+cell+replacement%3A+Evidence+from+engraftment+of+Neurotrophin-3-expressing+stem+cells+in+hypoxic-ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells may be uniquely suited for combined gene therapy and cell replacement: Evidence from engraftment of Neurotrophin-3-expressing stem cells in hypoxic-ischemic brain injury.</a> Exp. Neurol. 199, 179-190 (2006).</li>
<li>Green, J. J., Langer, R., Anderson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combinatorial+polymer+library+approach+yields+insight+into+nonviral+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Acc+Chem+Res%22%5BJournal%5D)">A combinatorial polymer library approach yields insight into nonviral gene delivery.</a> Acc Chem Res. 41, 749-759 (2008).</li>
<li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+to+human+adult+and+embryonic+cell-derived+stem+cells+using+biodegradable+nanoparticulate+polymeric+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene delivery to human adult and embryonic cell-derived stem cells using biodegradable nanoparticulate polymeric vectors.</a> Gene Ther. 16, 533-546 (2009).</li>
<li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine model of hindlimb ischemia.</a> J. Vis. Exp. , e1035(2009).</li>
<li>Ceradini, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+cell+trafficking+is+regulated+by+hypoxic+gradients+through+HIF-1+induction+of+SDF-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Progenitor cell trafficking is regulated by hypoxic gradients through HIF-1 induction of SDF-1.</a> Nat. Med. 10, 858-864 (2004).</li>
<li>Kidd, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+of+mesenchymal+stem+cell+tropism+for+tumor+and+wounding+microenvironments+using+in+vivo+bioluminescent+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct evidence of mesenchymal stem cell tropism for tumor and wounding microenvironments using in vivo bioluminescent imaging.</a> Stem Cells. 27, 2614-2623 (2009).</li>
<li>Sunshine, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+end-groups+of+linear+polymer+determine+cell-type+gene-delivery+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Mater%22%5BJournal%5D)">Small-molecule end-groups of linear polymer determine cell-type gene-delivery efficacy.</a> Adv. Mater. 21, 4947-4951 (2009).</li>
<li>Sunshine, J. C., Akanda, M. I., Li, D., Kozielski, K. L., Green, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+base+polymer+hydrophobicity+and+end-group+modification+on+polymeric+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Effects of base polymer hydrophobicity and end-group modification on polymeric gene delivery.</a> Biomacromolecules. 12, 3592-3600 (2011).</li>
<li>Lynn, D. M., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradable+poly%28%CE%B2-amino+esters%29%3A+Synthesis%2C+characterization%2C+and+self-assembly+with+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Degradable poly(β-amino esters): Synthesis, characterization, and self-assembly with plasmid DNA.</a> J. Am. Chem. Soc. 122, 10761-10768 (2000).</li>
<li>Eltoukhy, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+molecular+weight+of+amine+end-modified+poly%28beta-amino+ester%29s+on+gene+delivery+efficiency+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Effect of molecular weight of amine end-modified poly(beta-amino ester)s on gene delivery efficiency and toxicity.</a> Biomaterials. 33, 3594-3603 (2012).</li>
<li>Glover, D. J., Lipps, H. J., Jans, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+safe%2C+non-viral+therapeutic+gene+expression+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Towards safe, non-viral therapeutic gene expression in humans.</a> Nat. Rev. Genet. 6, 299-310 (2005).</li>
<li>Dave, U. P., Jenkins, N. A., Copeland, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapy+insertional+mutagenesis+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gene therapy insertional mutagenesis insights.</a> Science. 303, 333(2004).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

כאן אנו מדווחים שיטה לתכנת תאי גזע בוגרים לביטוי יתר גורמים טיפוליים באמצעות חלקיקים שאינם נגיפיים, מתכלים. פלטפורמה זו שימושית במיוחד לטיפול במחלות בו תאי גזע באופן טבעי יכולים בבית, כגון איסכמיה וסרטן. 9-10 כמו כן, פלטפורמת מסירת הגן אינו נגיפית מאפשרת לביטוי יתר חולף של גורמים טיפוליים, אשר מתאים למרבית ההתחדשות ופצע הרקמות תהליכי ריפוי. תהליך transfection תלוי בכניסת ה-DNA יעילה לתאים, ובאופן כללי עובד היטב בסוגים באופן פעיל, חלוקת תא, אך לא כמו גם בתאים שאינם מתחלק...

המטרה הכללית של טכניקה זו היא לקדם אנגיוגנזה הטיפולית שימוש בתאי גזע שאינו באופן ויראלי מתוכנת ביתר גורמים טיפוליים באתר של איסכמיה. תאי גזע שונו vivo לשעבר ראשון באמצעות חלקיקים מתכלים מסונתזים במעבדה, ולאחר מכן הושתלו במודל עכברי של איסכמיה hindlimb כדי לאמת את הפוטנציאל שלהם לשיפור אנגיוגנזה והצלה רקמות. צמיחת כלי דם נשלט היא מרכיב חשוב של התחדשות רקמות מוצלחת, כמו גם לטיפול במחלות איסכמי שונים, כגון שבץ, איסכמיה איבר, ואוטם שריר הלב. מספר אסטרטגיות פותחו כדי לקדם את הצמיחה של כלי דם, כוללים משלוח גורם גדילה וטיפול מבוסס תאים. 1 למרות היעילות שנצפתה במודלים של בעלי החיים המחלה, שיטות אלה עדיין עומדות בפני מגבלות כגון צורך במינוני supraphysiological למסירת גורם גדילה, או לא מספיק אוטוקרינילשחרר על ידי תאים בלבד. אסטרטגיה פוטנציאלית אחד כדי להתגבר על המגבלות הנ&quot;ל היא לשלב טיפול בתאי גזע וריפוי גנטי, לפיה תאי גזע מתוכנתים גנטי vivo לשעבר לפני השתלה לביטוי יתר גורמים טיפוליים רצויים. גישה זו באה לביטוי במודלים של מחלה שונות, כולל hindlimb איסכמיה 2, מחלות לב 3, ריפוי עצם 4 ופגיעה עצבית 5, וכו &#39;. עם זאת, רוב טכניקות ריפוי גנטי מסתמכות על וקטורים ויראליים, אשר קשור עם חששות בטיחות, כגון immunogenicity הפוטנציאל וmutagenesis insertional. Biomaterials תיווך מסירת הגן אינו נגיפית יכול להתגבר על המגבלות האלה, אבל לעתים קרובות סובלים מיעילות transfection נמוכה. כדי לזרז את הגילוי של חומרים ביולוגיים חדשניים למסירת גן אינו נגיפית יעילה, מחקרים שנעשו לאחרונה הועסקו כימיה קומבינטורית וגישת הקרנת תפוקה גבוהה. ספריות פולימר מתכלים כגון פולי (es β-אמינוters) (PBAE) פותחו והוקרן, שהוביל לגילוי של פולימרים מובילים ביעילות transfection המשופרת במידה ניכרת בהשוואה לעמיתיהם וקטור פולימרים הקונבנציונלי. 6-7 במסמך זה, אנו מתארים את הסינתזה של PBAE והאימות של היכולת שלהם transfect תאי גזע שמקורם בשומן (ADSCs) במבחנה, ואחרי ההשתלה הבאה של ADSCs גנטי שונה overexpressing כלי דם גורם אנדותל צמיחה (VEGF) במודל עכברי של איסכמיה hindlimb . התוצאות הוערכו על ידי מעקב אחר גורל תא באמצעות הדמיה פליטת אור, הערכת reperfusion רקמות באמצעות ההדמיה זלוף לייזר דופלר (LDPI), וקביעת ההצלה אנגיוגנזה ורקמה על ידי היסטולוגיה.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Invitrogen</td><td>10082</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Invitrogen</td><td>15070</td><td></td></tr><tr><td>גורם גדילה בסיסי פיברובלסטים</td><td>פפרוטק</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>1,4-בוטנדיול דיאקרילט (90%)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>411744</td><td>ראשי תיבות: C</td></tr><tr><td>5- אמינו-1-פנטנול (97%)</td><td>אלפא אסאר</td><td>2508-29-4</td><td>ראשי תיבות: 32</td></tr><tr><td>טטרה-אתילן גליקולדיאמין > 99 %)</td><td>Molecular Biosciences</td><td>17774</td><td>ראשי תיבות: 122</td></tr><tr><td>נתרן אצטט</td><td>G-Biosciences</td><td>R010</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מי מלח</td><td>Invitrogen</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>טטרהיופוראן נטול מים (> 99.9%)</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>401757</td><td></td></tr><tr><td>דיאתיל אתר נטול מים (> 99%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>E138-4</td><td></td></tr><tr><td>DMSO נטול מים (> 99.9</td>% <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>G9391</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25200</td><td></td></tr><tr><td>D-לוציפרין</td><td>GoldBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טמפרטורת חיתוך אופטימלית (O.C.T)</td><td>Tissue-Tek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Rat Anti-Mouse CD31</td><td>BD Pharmingen</td><td>550274</td><td></td></tr><tr><td>Alexa פלואור 594 נגד חולדות IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A11007</td><td></td></tr></tbody></table>

תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים

Programming Stem Cells for Therapeutic Angiogenesis Using Biodegradable Polymeric Nanoparticles

צמיחת כלי דם מבוקרת היא קריטית עבור התחדשות רקמות מוצלחת וריפוי פצעים, כמו גם לטיפול במחלות איסכמי כגון שבץ, התקף לב או מחלות עורקים היקפיים. מסירה ישירה של גורמי גדילת angiogenic יש הפוטנציאל לעורר צמיחת כלי דם חדשה, אבל קשורה לעתים קרובות עם מגבלות כגון חוסר המיקוד וזמן מחצית חיים קצרים בגוף חי. ריפוי גנטי מציע גישה חלופית על ידי אספקת הגנים מקודדים גורמי angiogenic, אבל לעתים קרובות דורש שימוש בוירוס, והוא מוגבל על ידי חששות בטיחות. כאן אנו מתארים את האסטרטגיה שפותחה לאחרונה לעידוד צמיחת כלי דם על ידי תאי גזע תכנות לביטוי יתר גורמי angiogenic באתרו באמצעות חלקיקים פולימריים מתכלים. באופן ספציפי את האסטרטגיה שלנו מנוצל בתאי גזע כאספקת כלי רכב על ידי ניצול של היכולת שלהם נודדות לעבר רקמות איסכמי in vivo. שימוש בווקטורים פולימריים אופטימיזציה, נגזר שומןתאי גזע שונו כדי overexpress גן angiogenic קידוד כלי דם גורם אנדותל צמיחה (VEGF). אנחנו תיארתי את התהליכים לסינתזת פולימר, היווצרות nanoparticle, transfecting תאי גזע במבחנה, כמו גם שיטות לאימות היעילות של תאי גזע המבטא-VEGF לקידום אנגיוגנזה במודל איסכמיה hindlimb עכברי.

לאחר ערבוב יחד, הפולימר החיובי טיעונים (C32-122) וטעון שלילי עצמי מרכיב פלסמיד דנ&quot;א לתוך חלקיקים. היווצרות Nanoparticle ניתן לאשר באמצעות ניתוח אלקטרופורזה כלומר complexation בין C32-122 ופלסמיד דנ&quot;א ימנע התגייסות של ה-DNA באלקטרופורזה. הפולימר משמש כמגיב transfection כדי להקל על ספיגה משופרת של ה-DNA לתוך תאי היעד ואת הביטוי הבא של חלבוני קידוד (איור 2). ניתן transfected תאים עם כל גנים טיפוליים או DNA כתב כגון חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) כדי ...

אנו מתארים את השיטה של ​​תאי גזע תכנות לביטוי יתר גורמים טיפוליים לאנגיוגנזה באמצעות חלקיקים פולימריים מתכלים. תהליכים שתוארו כוללים סינתזת פולימר, transfecting בתאי גזע שמקורם בשומן במבחנה, ומאמת את היעילות של תאי גזע מתוכנתים לקדם אנגיוגנזה במודל איסכמיה hindlimb עכברי.

Controlled vascular growth is critical for successful tissue regeneration and wound healing, as well as for treating ischemic diseases such as stroke, ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים את השימוש בננו-חלקיקים פולימריים לביטוי יתר של גנים טיפוליים בתאי גזע, תוך שימוש במודל של איסכמיה בגפה האחורית של יונק ימי. מטרה זו מושגת תחילה על ידי סינתזה של פולימרים מתכלים ביולוגית באמצעות תגובת addition מיקרוסקופית בשני שלבים, ולאחר מכן על ידי ייצור של ננו-חלקיקים פולימריים המקודדים גנים טיפוליים. השלב השני הוא ביצוע טרנספקציה של תאי גזע אנושיים המופקים מרקמת שומן in vitro כדי להשיג ביטוי יתר של vascular endothelial growth factor.בשלב הבא, תאי גזע מתוכנתים מוזרקים תוך-שרירית לגפה אחורית איסכמית לצורך ייצור גורמים טיפוליים. השלב הסופי הוא ניטור הישרדות התאים ופרפוזיה חוזרת של הדם בגפה האיסכמית לאורך זמן באמצעות דימות ביולומינסנציה ודימות לייזר דופלר. לבסוף, ניתן לבצע בדיקת ביטוי גנים כמותית והיסטולוגיה כדי להראות ביטוי מקומי של גורמים טיפוליים ויעילות של התחדשות הרקמה.היתרון של טכניקה זו על פני שיטות קונבנציונליות לעידוד אנגיוגנזה הוא השימוש בתאי גזע כנשאי תרופות. אסטרטגיה זו מאפשרת לנו לנצל את יכולת ההגירה (homing) הטבעית של תאי גזע לעבר אזורי איסכמיה, ומאפשרת גם תגובות דינמיות לרמזים מהמיקרו-סביבה. הננו-חלקיקים המשמשים להחדרה של DNA פלסמי הם יעילים ביותר ומתכלים ביולוגית, מה שמאפשר רעילות תאית נמוכה יותר ומספר גדול יותר של עותקי DNA המועברים לתוך התא.ניתן להחיל טכניקה זו על תרופות רבות מבוססות תאים בעלות רלוונטיות קלינית, מאחר שהיא משתמשת בווקטור לא-ויראלי מתכלה ביולוגית להחדרת גנים לתאים אוטולוגיים. בעבודה תחת מসহিত פuming, שקלו את ה-butane dial DLI והעבירו את החומר לבקבוק שאיפה מזכוכית המכיל מוט ערבוב. לאחר מכן, הוסיפו five amino one pentol שחומם מראש לאותו בקבוק. הניחו מיד את הבקבוק על פלטת ערבוב והגדירו את המהירות ל-600 RPM.העבירו את הבקבוק לתנור המוגדר על 90 °C והגבירו את מהירות הערבוב ל-1000 RPM; לאחר ארבע שעות, הנמיכו את המהירות ל-300 RPM וערבבו למשך 12 עד 16 שעות נוספות. כאשר התמיסה מוכנה, הוסיפו 10 milliliters של anhydrous tetra hydro uran לחמישה גרמים של C 32 בבקבוק זכוכית המכיל מגנט ערבוב. לאחר העטיפה בנייר אלומיניום, ערבבו ב-vortex במהירות גבוהה עד להמסה מלאה; בבקבוק זכוכית נפרד המכיל מגנט ערבוב, הוסיפו 10 millimolar של tetra ethylene glycol diamine.הוסיפו 40 milliliters של THF למבחנה זו והניחו את שתי המבחנות על פלטת ערבוב למשך חמש דקות לפני שילובן יחד. כסו את התוצאה בנייר אלומיניום והשאירו אותה לערבוב בטמפרטורת החדר למשך 24 שעות. המוצר הסופי נקרא C 32 1 22.בשלב הבא, העבירו 30 מיליליטר של dathyl ether אנוהידרי לכל אחד מחמישה מבחנות פלקון בנפח 50 מיליליטר. לאחר הוספת C 32 1 22 ל-anhydrous dyl ether, ייווצר תמיסה עכורה ולבנה; ערבלו את המבחנה באמצעות וורטקס ולאחר מכן סובבו אותה בצנטריפוגה. הפולימר המופק יספוג בתחתית המבחנה; השליכו את התמיסה העליונה וחזרו על שלבים אלו פעמיים נוספות.לאחר ההוצאה, הניחו את המבחנות הפתוחות במייבש ואקום למשך הלילה, תוך הבטחה שהמבחנות מוגנות מאור. למחרת, שקלו את המבחנות המכילות C 32 1 22 כדי לקבוע את המסה הסופית. לבסוף, המיסו את הפולימר שהופק ב-DMSO אניהידרי בריכוז של 100 milligrams per milliliter.להכנת ננו-חלקיקים. ראשית, דללו DNA של פלסמה לריכוז סופי של 120 µg/mL בנתרן אצטט. במבחנה שנייה, דללו C 32 1 22 לריכוז סופי של 3.6 mg/mL בנתרן אצטט. ערבבו את תכולת שתי המבחנות בתוך מבחנת Falcon אחת בנפח 15 mL, ובצעו ערבול מהיר (vortex) באופן מיידי למשך 10 שניות.השאירו את המבחנה בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות להיווצרות הננו-חלקיקים. החליפו את המצע בבקבוק תרבית רקמה שהוצב מראש ב-7.8 milliliters של DMEM מועשר באופן מלא.העבירו את תמיסת הננו-חלקיקים לבקבוק תרבית הרקמה ופזרו אותה באופן שווה לפני ההכנסה לאינקובטור. לאחר שעתיים, החליפו את המצע המכיל את הננו-חלקיקים ב-DMEM. לאחר ארבע שעות, התאים מוכנים להזרקה in vivo.כאשר התאים שעברו טרנספקציה מוכנים, ספרו אותם ודללו אותם בריכוז של 10^6 תאים למיליליטר ב-PBS כדי להבטיח שכל עכבר יקבל כמות שווה. חלקו את תרחיפי התאים למבחנות אפנדורף בנפח של 110 µL. לאחר מכן, הרדימו עכבר שעבר בעבר איסכמיה של הגפה האחורית.לאחר אישור ההרדמה באמצעות צביטה בבהו, נקה את אתר ההזרקה באמצעות מזרק 27 gauge. השהה מחדש את התאים ושאב 100 µL מהסספנזיה. הזרק מחצית מסספנזיית התאים לאזור שריר המקרבים (adductor muscle), ולאחר מכן הזרק את המחצית השנייה לאזור שריר התאומים (calf muscle).לאחר ההזרקה, השאירו את המזרק במקומו למשך 15 עד 30 שניות לפחות כדי למנוע דליפה. עם סיום ההזרקות, שמרו על חום גוף של בעל החיים עד להחלמתו המלאה. עבור דימוי ביו-לומנסנציה (bioluminescence imaging), ודאו את רמת ההרדמה באמצעות צביטה בבוהן, ולאחר מכן נקו את אזור ההזרקה כפי שהודגם קודם לכן.מלאו מזרק אינסולין ב-100 µL של Lucifer והזריקו אותו תוך-בטנית (intraperitoneal). לפני הנחת בעל החיים בתא הדמיית ה-ivus Luciferase, דמיינו את העכברים בזמן חשיפה של דקה אחת. לאחר קבלת התמונה, סמנו את אזור העניין (ROI).במקרה זה, יש להמשיך למדוד את אות הלוסיפראז בגפה האיסכמית באתר הזרקת התאים מדי שלושה עד חמישה דקות, עד שהאות מגיע לשיאו ומתחיל לרדת. ערך זה ישמש להשוואה בין העכברים ובנקודות זמן שונות. עם סיום הפעולה, יש להוציא את העכברים מהתא ולשמור על חום גוף של בעל החיים עד להחלמה מלאה. רקמות נאספות בנקודות זמן נבחרות.לאחר התעתוק ובשלבים שאחרי ההמתה, יש לחתוך את העור המקיף את הגפה האחורית באופן היקפי באזור הבטן הדיסטלי ובמקטע הפרוקסימלי לגפה האחורית. לאחר דחיפת העור לאחור, יש לקטוע את הגפה בין מפרק האגן למפרק הירך. לבסוף, יש לבודד את השריר המקרבי המדיאלי (medial adductor) ואת שריר התאומים (gastroc).לצורך ניתוח נוסף, תמונות אלו מציגות את הסינתזה של C 32 1 22. כאן, C 32 AC שנסתיים ב-AC הקשור ל-ACR נוצר על ידי תגובת הוספה של מיקרובין בין מונומר בעל קצוות DAL לבין מונומר בעל קבוצת קצה של אמין ראשוני. בדוגמה זו, ניתן להכין פולימרים של PBAE משופרים על ידי הוספת מונומרים שנסתיימו באמין לשיפור יעילות הטרנספקציה.טרנספקציה מוצלחת ניכרת מהביטוי המוגבר של חלבון פלואורסצנטי ירוק כפי שניתן לראות כאן. נתוני הדמיה ביולומינסצנטית אלו מראים עכבר ביום אפס וביום 14. לאחר הזרקת תאי גזע מנוקודים לשומן החיוביים ל-GFP luciferase לגפה האחורית, תמונות דופלר מייצגות מדגימות את השראת האיסכמיה בצד אחד של הגפה האחורית המקבילה ביום אפס וביצועו המוצלח של רפרופוזיה של הדם.14 ימים לאחר הזרקה של תאי גזע המופקים מרקמת שומן המבטאים ביטוי-יתר של VEGF. בדיקת R-T-P-C-R אישרה את העלייה המוצלחת בביטוי של vgf, החלבון הטיפולי המקודד, בקבוצה המטופלת ארבעה ימים לאחר הזרקת התאים, בעוד שבביקרת ה-PBS לא זוהה ביטוי. ניתן לבצע שיטות אחרות המיישמות גישה משולבת של הובלת תאי גזע וגנים על מנת לזהות מטרות טיפוליות חדשות לקידום התחדשות רקמות.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה מעמיקה לגבי האופן שבו ניתן לסנתז פולימרים מתכלים ביולוגית לטיפול גנטי לא-ויראלי, וכיצד להשתמש בפולימרים אלה כדי לתכנת תאי גזע לטיפול באיסכמיה in vivo. שימוש בתאי גזע מהונדסים באופן לא-ויראלי לביטוי יתר של גורמים טיפוליים in situ עשוי להיות שימושי באופן נרחב לטיפול במגוון רחב של מחלות ניווניות.

programming-stem-cells-for-therapeutic-angiogenesis-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

הליך כירורגי עבור משלוח של תא גזע עובריים שמקורם בתאי האנדותל כדי hindlimb איסכמי הוא הוכיח, עם מעקב פולשני על ידי הדמיה פליטת אור.

עובריים, נגזר גזע לתאי אנדותל לטיפול איסכמיה Hindlimb

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצר שתלי כלי רקמה מהונדסת, כי הם פונקציונליים להשתלה לעכברים על ידי זריעה כפולה תאי גזע pluripotent מושרה באופן חלקי (PiPSC) - נגזר תאי שריר חלק וPiPSC - תאי האנדותל נגזרו על bioreactor פיגום כלי decellularized.

דור והארכת כלי רקמות מהונדסות במודל עכבר

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול להמחיש כלי דם היווצרות ויוו ואת בזמן אמת ב- 3D פיגומים על ידי מיקרוסקופ multiphoton. אנגיוגנזה פיגומים מהונדסים נחקרה מודל פגם מאתר calvarial עצם קריטי. עוד כלי דם חדשים התגלו בקבוצה טיפול יותר שולטת.

אנגיוגנזה להמחיש באמצעות מיקרוסקופ Multiphoton Vivo ב מהונדסים גנטית לגרדום 3D-PLGA/nHAp Calvarial תיקון פגם קריטי של העצם

כתב היד הזה מתאר את משלוח יעיל, שאינו ויראלי של miR לתאי אנדותל ידי וקטור PEI / MNP ו המגנטיזציה שלהם. לכן, בנוסף שינוי גנטי, גישה זו מאפשרת להדרכת תא מגנטית ויכולת גילוי MRI. הטכניקה יכולה לשמש כדי לשפר את המאפיינים של מוצרי תא טיפוליים.

הכנה<em&gt; במבחנה</em&gt; אפיון ממוגנטים miR-modified לתאי אנדותל

פרוטוקול זה מתאר פבריקציה נוספת של מערכת התרבות התא כדי לאפשר זריעה של תאי גזע על גרדום פולימר מוליך ועבור במבחנה גירוי חשמלי העוקבים ויוו השרשה של לגרדום נזרע תאי הגזע באמצעות...

מוליכות חשמלית לגרדום לווסת ולהעביר תאי גזע

פרוטוקול זה ממחיש הליך בטוחים ויעילים כדי לשנות CD133+ hematopoietic תאי גזע. הציג נגיפי, מגנטי polyplex-הגישה המבוססת על עשוי לספק בסיס אופטימיזציה של תאי גזע טיפולית אפקטים כמו גם לגבי ניטור המוצר תא מנוהל באמצעות תהודה מגנטית.

פרוטוקול להעברת MicroRNA לתוך למבוגרים הנגזרות מח עצם Hematopoietic תאי גזע כדי לאפשר הנדסה תא בשילוב עם מיקוד מגנטי

אנו מתארים הליך כירורגי המשמש כדי לגרום איסכמיה היקפית בארנבים עם היפרליפידמיה וסוכרת. ניתוח זה משמש כמודל טרום קליני לתנאים המנוסים במחלות עורק היקפי בחולים. אנגיוגרפיה מתואר גם אמצעי כדי למדוד את היקף הוכנסו איסכמיה והתאוששות של perfusion.

המודל הקליני של איסכמיה הגפיים האחוריות בארנבים סוכרתית

הושלתי האנדותל שנגזר מתאי גזע המושרה ביותר (iPSC-EPs) יש את הפוטנציאל לחולל מהפכה לטיפולי מחלות לב וכלי דם ולאפשר יצירת מודלים נאמנים יותר של מחלות לב וכלי דם. בזאת, כימוס של iPSC-EPs בתלת מימדי (3D) קולגן מיקרוסביבה וניתוח כמותי של הפוטנציאל הגלום בתאים אלה מתוארים.

מודל תלת מימד וצינור חישוב מתורבת לכמת את הפוטנציאל הוושלתי של iPSC-נגזר של התגובה האנטי-מגנטית

שיטה זו מתארת את התרבות של תאים מבוססי iPSC-נגזרות כמו 40 מיקרוכלי תלת-ממד של מיקרו בפלטפורמת microfluאידיג מתוקננת. פלטפורמה זו מאפשרת לימוד של לבלוב אנגיוגנטית מונחה הדרגתי ב-3D, כולל השקה וייצוב של נבטי האנגיוגנטי באופן מדרגי ותפוקה גבוהה.

שיטת הלימוד הסטנדרטית והמדמדית למחקר בלבלוב אנגיוגנטית בתלת-ממד של התאים הנגזרים מתוך מבחנה

בדיקה זו משתמשת בתאי גזע עובריים של עכברים המתמיינים לגופי עובר בתרבית בג'ל קולגן תלת-ממדי כדי לנתח את התהליכים הביולוגיים השולטים באנגיוגנזה נובטת במבחנה. הטכניקה יכולה להיות מיושמת לבדיקת תרופות, מידול מחלות, ולחקר גנים ספציפיים בהקשר של מחיקות קטלניות עוברית.

במבחנה בדיקת הנבטה תלת מימדית של אנגיוגנזה באמצעות תאי גזע עובריים של עכבר לצורך מידול מחלות כלי דם ובדיקות סמים

מאמר זה מציג פרוטוקול להעברה מדויקת מונחית אולטרסאונד של תאי גזע וסקולריים לדופן כלי העורקים. הטכניקה מכוונת ביעילות לדופן כלי הדם ומקדמת תיקון כלי דם במפרצות ודיסקציות של אבי העורקים.

אספקת תאי גזע מונחית אולטרסאונד מדויקת לתיקון כלי דם במחלות אבי העורקים

למד תכנות תאי גזע לטיפול באנגיוגנזה באמצעות ננו-חלקיקים פולימריים מתכלים. השיטה מדגימה העמסת גנים טיפוליים לתאי גזע מבודדים משומן אנושי והזרקתם לגפיים איסכמיים במודל עכברים.

תאי גזע תכנות טיפולי אנגיוגנזה שימוש אורגניים פולימריים חלקיקים

גלה סרטונים נוספים