Name: Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק דרך Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: למדו מודל ניסיוני בעכברים לחקר התפשטות גידולים בקרצינומה של תאי השחלות דרך הזרקה אורתוטופית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התפתחות גידולים מקוריים וגרוריים בצפק.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לחברי מחלקת נשים ויולדות וביולוגיה סרטן לדיונים שלהם מסייע סיוע טכני. מחקר זה נתמך על ידי האגודה יפן לקידום המדע (JSPs) גרנט ב- Aid למחקר מדעי (15K15604; לה &#39;Kajiyama).

פרוטוקול הטיפול פועל בהתאם להנחיות לניסויים בבעלי חיים שאימצה נאגויה האוניברסיטה. 1. הכנת השעיות תא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שורת תאים ברורה תא קרצינומה שחלות אדם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על תאים ES-2 12 במדיום RPMI-1640 עם 10% בסרום שור עוברית (FBS) ו פניצילין / סטרפטומיצין (פניצילין: 100 יחידות / מ&quot;ל, סטרפטומיצין: 0.1 מ&quot;ג / מ&quot;ל). התרבות תאים על 37 מעלות צלזיוס חממה humidified 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף תאים בשלב הצמיחה לוגריתמי ב 0.05% טריפסין / 0.02% פתרון EDTA (טריפסין / EDTA). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, להסיר את המדיה הישנה מספינת תרבית תאים, ואז לשטוף את התאים פעם עם PBS (PBS ללא Ca 2 + / Mg 2+, 3 - 4 מ&quot;ל לכל 25 ס&quot;מ 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, הוסף 1 מ&quot;ל לכל 25 ס&quot;מ 2 של טריפסין / EDTA. סובב את כלי תרבית תאים כדי לכסות את monolayer תא עם טריפסין / EDTA. לאחר הסרת והשלכת טריפסין / EDTA, להחזיר את התאכלי תרבות כדי בחממה במשך 3 - 5 דקות או עד תאים מנותקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדקו את התאים תחת מיקרוסקופ כדי להבטיח את התאים מנותקים מפני השטח של כלי תרבית תאים צפים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף סרום טרי המכיל מדיום הגידול כדי להשבית טריפסין (5 מ&quot;ל לכל 25 ס&quot;מ 2), מחדש להשעות את התאים. העבר מחדש מושעה תאים צינור חרוטי 15 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה XG ב 300 במשך 5 דקות. בצע צנטריפוגה או על 4 מעלות צלזיוס או בטמפרטורת החדר. מוציאים בזהירות supernatant מחדש להשעות תאים עם מדיום הגידול (5 מ&quot;ל לכל 25 ס&quot;מ 2). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים (למשל, על ידי הרחקה trypan כחול) ולאחר מכן מחדש להשעות במדיום הגידול בצפיפות של 2 x 10 8 תאים / מ&quot;ל. שים את התאים מושעה על הקרח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מטריקס קפוא להפשיר (ECM) מבוסס aliquots הידרוג&#39;ל באמבט קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את השעית תא aliquots הידרוג&#39;ל המבוסס ECM ביחס של 1: 1 (ג תא סופיoncentration: 1 x 10 5 תאים / μl של הידרוג&#39;ל בינוני ECM מבוססי) ומערבבים היטב. מניח את מתלי תא המוכנים באמבט קרח עד לשימוש. </li></ol> 2. Orthotopic הרכבה עם השעיות תא הערה: ניתוח אינו דורש לחבילה ייעודית. הניתוח יכול להתבצע על benchtop מעבדה באזור של החדר כי הוא נפרד ויש לו פעילות מינימלית. מכסה מנוע למינרית גם יכול לשמש. יש להשתמש מכשירי ניתוח סטרילי ומספריים לא אמורים לשמש כדי לעשות חתכים בעור. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משתמשים בעכברים עירום נשי (BALB / c נו / נו) אחרי 8 שבועות של גיל עבור דגם חיסון orthotopic זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, להרדים את העכבר באמצעות שאיפה עם isoflurane (2 - 4%). בדוק עומק הרדמה על ידי אימות חוסר הנסיגה על קמצוץ בוהן משרד. אחרי העכבר הוא הרדים, להחיל משחה עיניים סטריליות תפל על העיניים כדי למנוע התייבשות כנדרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר הרדים על operating הבמה בצד הבטן כלפי מטה. לחטא את אזור הניתוח מספר פעמים הן עם אלכוהול ו לשפשף יוד המבוססת או כלורהקסידין מבוסס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך ~ 2 סנטימטר אנכי ליד עמוד השדרה בין לקשת ירך costal התקינה. השתמש לעטוף כירורגית סטרילית סביב אתר החתך. תקן את משטחי עור החרותים עם מהדק כדי לשמור על הפתיחה. הערה: Retractors יכול לשמש במקום מלחציים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, לעשות חתך שני (כ 1 סנטימטר) ב הצפק הקודקודית תחת החתך הראשון כדי לפתוח את חלל הבטן. קלאמפ משטחי בטן החרות. קליפ רקמת השומן המקיף את צינור השחלה השחלה ipsilateral עם מלחציים להסיר את השחלה מחלל הבטן. בזהירות את השחלה החצוצרה על גזה. לאחר מכן, הצב את העכבר בצד הבטן כלפי מטה תחת מיקרוסקופ לנתח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את ההשעיה תא מזרק אינסולין (1/2 סמ&quot;ק, 29 G) ממש לפני ההזרקה. בזהירות להזריק את השעית התא המוכנה (1- 2 μl) לתוך השחלה. במשך כמה שניות, לשמור את המחט בתוך השחלה כדי להבטיח gelation של הידרוג&#39;ל מבוסס ECM. לאחר gelation, תאי הגידול המוזרקים להישאר בתוך השחלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להחזיר את השחלה אל תוך הגוף. לתפור את החתך השני עם משי רפואי סטרילי, ואז לאטום את העור עם קליפים הפצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח, העכברים ינוהלו שיכוך כאבים (למשל, meloxicam, תוך שרירית (IM) או תת עורית (SC), 0.2 מ&quot;ג / קילו) לתקופת 24 שעות ראשוניות. </li></ol> טיפול 3. לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח כל עכבר בכלוב נפרד על נייר נקי עם חבילה חמימה כדי לשמור על חומו העכבר עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal. לאחר מכן, להחזיר את החיות בכלובים שלהם לגידול וניטור. לפקח על עכברים כל יום במשך 3 - 7 ימים לאחר טיפול כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניטור של עכברים לאחר ניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרה של סימנים של כאב, לנהל analgeSICS יומי (למשל, meloxicam, im או SC, 0.2 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם יש עכברים סימני זיהום (למשל, אדמומיות, נפיחות, הפרשות), לנהל זריקה יומית עם מגיב אנטי זיהומיות (למשל, פניצילין, im, 100,000 IU / ק&quot;ג). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סר חומר סגירת עור 10 - 14 ימים לאחר טיפול לאחר ניתוח. </li></ol> ניתוח 4. של גידולים וגרורות הערה: הגידול יוקם בבית 2 מוזרק השחלה - 3 השבועות לאחר חיסון. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב את העכברים על ידי פחמן דו חמצני, ולאחר מכן לאסוף דגימות (למשל, גידולים, גרורות, איברים) 13-15 לניתוח נוסף 14,16-20. הערה: אם מערכת הדמית in vivo זמינה, תאי נושאות אנזימים המייצרים פליטת אור (למשל, בלוציפראז) או חלבון פלואורסצנטי (למשל, ה- GFP) ניתן להשתמש בפרוטוקול זה. פרוטוקול שונה זה יספק מידע שימושיהדינמיקה של התפשטות תאים סרטניים מהגידול הראשוני. </li></ol>

<ol><li>Jemal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics.</a> CA Cancer J Clin. 61 (2), 69-90 (2011).</li>
<li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+clinical+outcome+of+patients+with+recurrent+epithelial+ovarian+carcinoma%3A+is+it+the+same+for+each+histological+type%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Gynecol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Long-term clinical outcome of patients with recurrent epithelial ovarian carcinoma: is it the same for each histological type.</a> Int J Gynecol Cancer. 22 (3), 394-399 (2012).</li>
<li>Kikkawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+treatment+of+epithelial+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nagoya+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Advances in treatment of epithelial ovarian cancer.</a> Nagoya J Med Sci. 68 (1-2), 19-26 (2006).</li>
<li>Yoshikawa, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathologic+features+of+epithelial+ovarian+carcinoma+in+younger+vs.+older+patients%3A+analysis+in+Japanese+women%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinicopathologic features of epithelial ovarian carcinoma in younger vs. older patients: analysis in Japanese women.</a> J Gynecol Oncol. 25 (2), 118-123 (2014).</li>
<li>Kajiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+SDF-1alpha%2FCXCR4+axis+in+the+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Involvement of SDF-1alpha/CXCR4 axis in the enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Int J Cancer. 122 (1), 91-99 (2008).</li>
<li>Terauchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+involvement+of+TWIST+in+enhanced+peritoneal+metastasis+of+epithelial+ovarian+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Possible involvement of TWIST in enhanced peritoneal metastasis of epithelial ovarian carcinoma.</a> Clin Exp Metastasis. 24 (5), 329-339 (2007).</li>
<li>Bronstein, L., Zechner, C., Koeppl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bayesian+inference+of+reaction+kinetics+from+single-cell+recordings+across+a+heterogeneous+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Bayesian inference of reaction kinetics from single-cell recordings across a heterogeneous cell population.</a> Methods. 85, 22-35 (2015).</li>
<li>Guo, W., Zhang, S., Liu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+novel+orthotopic+model+of+breast+cancer+metastasis+to+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Rep%22%5BJournal%5D)">Establishment of a novel orthotopic model of breast cancer metastasis to the lung.</a> Oncol Rep. 33 (6), 2992-2998 (2015).</li>
<li>Lewis-Tuffin, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Src+family+kinases+differentially+influence+glioma+growth+and+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Src family kinases differentially influence glioma growth and motility.</a> Mol Oncol. , (2015).</li>
<li>Saar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+tumorgrafts+in+nude+mice%3A+A+new+method+to+study+human+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Orthotopic tumorgrafts in nude mice: A new method to study human prostate cancer.</a> Prostate. 75 (14), 1526-1537 (2015).</li>
<li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-29c+suppresses+pancreatic+cancer+liver+metastasis+in+an+orthotopic+implantation+model+in+nude+mice+and+affects+survival+in+pancreatic+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">miR-29c suppresses pancreatic cancer liver metastasis in an orthotopic implantation model in nude mice and affects survival in pancreatic cancer patients.</a> Carcinogenesis. 36 (6), 676-684 (2015).</li>
<li>Lau, D. H., Lewis, A. D., Ehsan, M. N., Sikic, B. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifactorial+mechanisms+associated+with+broad+cross-resistance+of+ovarian+carcinoma+cells+selected+by+cyanomorpholino+doxorubicin%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Multifactorial mechanisms associated with broad cross-resistance of ovarian carcinoma cells selected by cyanomorpholino doxorubicin.</a> Cancer Res. 51 (19), 5181-5187 (1991).</li>
<li>Bao, L., Matsumura, Y., Baban, D., Sun, Y., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inoculation+site+and+Matrigel+on+growth+and+metastasis+of+human+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Effects of inoculation site and Matrigel on growth and metastasis of human breast cancer cells.</a> Br J Cancer. 70 (2), 228-232 (1994).</li>
<li>Huang, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiological+investigation+on+major+depressive+disorder+in+the+most+heavily+damaged+areas+from+Wenchuan+earthquake+in+2008%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Liu+Xing+Bing+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Epidemiological investigation on major depressive disorder in the most heavily damaged areas from Wenchuan earthquake in 2008.</a> Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi. 31 (2), 167-170 (2010).</li>
<li>Ma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+of+neonatal+respiratory+failure+related+to+socioeconomic+factors+in+Hebei+province+of+China%5BTitle%5D)+AND+%22Neonatology%22%5BJournal%5D)">Mortality of neonatal respiratory failure related to socioeconomic factors in Hebei province of China.</a> Neonatology. 100 (1), 14-22 (2011).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+levels+of+FGF-21+are+increased+in+coronary+heart+disease+patients+and+are+independently+associated+with+adverse+lipid+profile%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Serum levels of FGF-21 are increased in coronary heart disease patients and are independently associated with adverse lipid profile.</a> PLoS One. 5 (12), e15534(2010).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lumbar+interspinous+non-fusion+techniques%3A+comparison+between+Coflex+and+Wallis%5BTitle%5D)+AND+%22Nan+Fang+Yi+Ke+Da+Xue+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">Lumbar interspinous non-fusion techniques: comparison between Coflex and Wallis.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 30 (11), 2455-2458 (2010).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wave+intensity+analysis+of+carotid+artery%3A+a+noninvasive+technique+for+assessing+hemodynamic+changes+of+hyperthyroid+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Huazhong+Univ+Sci+Technolog+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Wave intensity analysis of carotid artery: a noninvasive technique for assessing hemodynamic changes of hyperthyroid patients.</a> J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 30 (5), 672-677 (2010).</li>
<li>Song, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+transcriptional+profiling+and+preliminary+study+on+heterosis+mechanism+of+super-hybrid+rice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant%22%5BJournal%5D)">Comparative transcriptional profiling and preliminary study on heterosis mechanism of super-hybrid rice.</a> Mol Plant. 3 (6), 1012-1025 (2010).</li>
<li>Wan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+analysis+of+variation+of+Han+female+adolescent+bone+development+in+Henan+and+Zhejiang+province%5BTitle%5D)+AND+%22Fa+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">The analysis of variation of Han female adolescent bone development in Henan and Zhejiang province.</a> Fa Yi Xue Za Zhi. 26 (2), 97-99 (2010).</li>
<li>Wang, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitation-emission+fluorescence+characterization+study+of+the+three+phenolic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Guang+Pu+Xue+Yu+Guang+Pu+Fen+Xi%22%5BJournal%5D)">Excitation-emission fluorescence characterization study of the three phenolic compounds.</a> Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi. 30 (5), 1271-1274 (2010).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

במודלים של בעלי חיים חיוניים כדי לנתח את מנגנוני התפתחות גידולים, התקדמות, גרורות, וכן יעילות התרופה כנגד תאים סרטניים. בעכברים נושאי בתאי סרטן שחלות אדם גם שמשו במודל חיה. כאן אנו מתארים הליך פולשני פחות עבור הממשל של תאים סרטניים בשחלות ב אתר orthotopic. באמצעות הליך זה, חיסון לתוך השחלה דרך גישה retroperitoneal מסירה מאגף הגבי מציע יתרונות משמעותיים על פני שיטות אחרות נפוץ. ראשית, חיסון orthotopic יכול לספק יותר תוצאות יעילות ומדויקות המשקפים סביבת הגידול באדם 13,21....

קרצינומה שחלות אפיתל (EOC) מסבירה את השיעור הגבוה ביותר של תמותה מסרטן בקרב ממאירויות גינקולוגיות 1. EOC מזוהה עם פרוגנוזה גרועה, בעיקר בשל הסימפטומים שלה מאוחר, והיא קשורה לעיתים קרובות עם disseminations intraperitoneal מרובים גרורות מרוחקות 2-4. הפצת הצפק היא תהליך רב שלבים. ראשית, תאים סרטניים להתנתק גוש הראשוני, ולהעביר לתוך חלל הבטן. כאשר התאים הסרטניים לצרף mesothelium הצפק, הם מתחילים לפלוש לרקמות דרך 5,6 mesothelium. על מנת להבין טוב יותר את הביולוגיה של הגידול (למשל, התקדמות סרטן תגובה לטיפול), במודלים של עכברים מספקים שפע של מידע. Xenograft עם תאים סרטניים אנושיים נעשה שימוש נרחב עבור מודלי עכבר שבו תאים סרטניים אנושיים הם מחוסנים תת עורי, intraperitoneally, לתוך וריד, orthotopically. במודל חיה עם g orthotopicallyגידול rafted יכול יותר ביעילות ובדייקנות ליצור לתוצאות המשקפות את סביבת גידול באדם בהשוואה במודל חיה עם גידול מורכב heterotopically. לכן, עבור גידולים אנושיים רבים, מודלי השתלת orthotopic הוקמו 7-11. כאן, אנו מתארים את חיסון orthotopic של תאים אנושיים EOC באמצעות גישה retroperitoneal מסירה מאגף הגבי, אשר הגביל הפולשנות לעומת חיסון הגחון. טכניקה זו יכולה לספק מגוון רחב של מידע שימושי על EOC, במיוחד מנגנון הפצת intraperitoneal.

<table><tbody><tr><td>מטריצת מטריגל&nbsp;</td><td>מזרק</td><td></td><td>אינסולין הידרוג'ל מבוסס BD 354234 ECM</td></tr><tr><td></td><td>TERUMO</td><td>SS-05M2913</td><td>1/2 סמ"ק, 29 גרם x 1/2 אינץ'</td></tr> <tr><td>מחט תפירה עם תפר</td><td></td><td></td><td>11 מ"מ, 3/8, Nylon6-0</td></tr><tr><td>רפלקס 7 מ"מ קליפ פצע Applier CellPoint</td><td>Scientific</td><td>204-1000</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; מהדקי פצע רפלקס 7 מ"מ</td><td>CellPoint Scientific</td><td>203-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

קרצינומה השחלות אפיתל (EOC) קשורה עם פרוגנוזה גרועה כי זה מראה הפצת הצפק. כדי לשפר את סיכויי ההחלמה, חשוב לשלוט בהפצת הצפק. עם זאת, עדיין לא ברור כיצד תאים סרטניים להתנתק נגעים ראשוניים לצרף mesothelium. הקמת מודל חיה מתאים נדרשה כדי להשיג הבנה של המנגנון של הפצת הצפק in vivo. במחקר הנוכחי, אנחנו מציגים את התהליך מן הזריקה המקומית של תאי EOC לתוך שטח שחלות murine להתפתחות גרורה, כולל הצפק לאיברים מרוחקים. עכברים עירום נשי (BALB / c נו / נו) אחרי 8 שבועות של גיל היו בשימוש. תחת שדה מיקרוסקופי מבט, תאי EOC (1 x 10 5 תאים / μl של מטריקס הבינוני-תאי (ECM) מבוסס הידרוג&#39;ל / השחלה חד-צדדית / עכבר) הוזרקה השחלות בעכברים באמצעות גישת retroperitoneal מסיר המאגף הגבה. השיטה המוצעת זהו leהליך ss פולשני העכבר ממזער נזקים השחלה. כאן אנו מתארים את השלבים מתודולוגיים בפיתוח של היווצרות הגידול המקורי גרורתי של EOC.

<html> שישה עכברים בעירום חסנו השחלות שלהם עם תאי תאי קרצינומה הקו ברור הגזע עוברי-2, כמתואר בפרוטוקול זה. כפי שניתן לראות בתרשים 1 א &#39;, לאחר 2 שבועות, 5 מתוך 6 העכברים היה גידול בשחלה מחוסן עם ES-2 תאים, אבל לא היה גידול בשחלה הנגדי ללא חיסון (ששימשו כביקורת). יתר על כן, 2 מתוך 5 העכברים הראו disseminations הצפק המרובה עם מיימת. תאים גרורות בכבד (איור 1B). השחלות, הוא עם מסת הגידול באתר החיסון ובצד השליטה, נותח...

כדי להבהיר את תהליך רב שלבי של הפצת הצפק של קרצינומה השחלות, המחקר הנוכחי מציג מודל ניסיוני בעכברים של התפתחות גידולים המקורי וגרורות הצפק באמצעות חיסון orthotopic עם תאים סרטניים אלה.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא לצפות בהתפתחות של גידול מקורי וגידול גרורתי בקרצינומה אפיתליאלית של השחלה. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום האונקולוגיה הגניקולוגית, כגון הבנת הביולוגיה של הגידול או הפריטוניאומיזציה (peritoneal dissemination). היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שההחדרה האורטופית של קרצינומה אפיתליאלית של השחלה אנושית, או תאי EOC, מבוצעת בגישה רטרו-פריטוניאלית המגודלת באזור השפשפת הגבנית (dorsal flank). כדי להכין שורת תאים של קרצינומת תאי בהירים של השחלה אנושית, זרע ותחזק תאי ES2 במצע RPMI-1640 עם 10% FBS ו-PenStrep בטמפרטורה של 37 °C ו-5% CO2. בשלב הצמיחה הלוגריתמי, הסר את המצע הישן מהתרבית והשתמש ב-3-4 mL של PBS כדי לשטוף את התאים פעם אחת. לאחר מכן, הוסף 1 mL של trypsin/EDTA ונער את המכל כדי לכסות את כל השכבה החד-שכבתית (monolayer). הסר והשלך את תמיסת ה-trypsin והחזר את התאים לאינקובטור למשך שלוש עד חמש דקות. לאחר בדיקת התאים תחת מיקרוסקופ כדי לוודא שהתאים התנתקו ומרחפים, הוסף 5 mL של מצע גידול טרי המכיל סרום כדי להשבית את ה-trypsin ולהשעות מחדש את התאים לפני העברתם למבחנה קונית של 15 mL. סבב את התוךה במערך צנטריפוגה ב-300 ×g ובטמפרטורת החדר

murine-experimental-model-original-tumor-development-peritoneal

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

במודלים של בעלי חיים orthotopic של סרטן השחלות לשכפל טוב יותר מחלות אנושיות, ולכן לשפר את ההבנה שלנו של התקדמות סרטן תגובת הגידול לטיפול. מודל העכבר מקבל זריקה intrabursal של בלוציפראז-להביע תאים סרטניים בשחלות. טיפול מנוהל באמצעות gavage הפה. הגידול מנוטרת על...

בשנת vivo ההדמיה לטיפולים במודל עכבר orthotopic של סרטן השחלות

דגם orthotopic של סרטן השחלות הצפק ב עכברים immunocompetent עבור In vivo הדמיה ניטור הגידול של המערכת החיסונית גידול

בסרטון זה אנו מדגימים פיתוח מודל תלת מימדי במבחנה של רירית חלל הצפק. תרבית אורגנוטיפית זו יכולה לסייע בחקירת הידבקות תאי סרטן השחלות, פלישה והתפשטות.

מידול גרורות סרטן השחלות ברירית חלל הצפק: שיטה להקמת מודל תלת ממדי במבחנה של רירית הצפק

בסרטון זה אנו מדגימים הזרקה תוך רחמית של תאי סרטן השחלות במודל עכברי. מודל מורין אורתוטופי זה מסייע לנו לעקוב באופן לא פולשני אחר צמיחת הגידול ולהעריך את יעילותם של טיפולים חדשים למניעה וטיפול בסרטן שחלות חוזר.

הזרקת תאי סרטן תוך רחמיים: טכניקה להעברת תאים סרטניים להקמת מודל עכבר סרטן שחלות תוך פריטוניאלי

סרטון זה מתאר את הפרוטוקול ליצירת מודל ניסויי מורין לחקר התפתחות הגידול וגרורות בצפק. מודל סרטן השחלות הזה נוצר על ידי חיסון אורתוטופי של תאי סרטן שחלות אפיתל אנושי לתוך השחלות של עכברה נקבה.

חיסון אורתוטופי של תאי סרטן השחלות לשחלות מורין: הליך להקמת מודל עכבר סרטן השחלות לחקר הפצת תאים בצפק

אנו מתארים פלטפורמת הדמיה לא פולשנית של בעלי חיים המאפשרת זיהוי, כימות וניטור של צמיחה והישנות של סרטן השחלות. מודל קסנוגרפט תוך-צפקי זה מחקה את הפרופיל הקליני של חולות עם סרטן השחלות.

דגם Murine הדמיה בלתי פולשנית לזיהוי ומעקב סרטן השחלות הישנות

גרורות סרטן השחלות מאופיינת בנגעים תוך-צפקיים מפוזרים רבים, כך שכימות חזותי מדויק של עומס הגידול הוא מאתגר.  כאן אנו מתארים שיטה לכימות במקום ומחוץ לגוף של עומס גידול גרורתי באמצעות תאי גידול עם חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) והדמיה אופטית.

כימות של גרורות סרטן השחלות תוך הצפק

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הזרקת תאי intratibia osteosarcoma כדי ליצור מודלים עכבר הנושאים אוסטאוסרקומה אורתוטופית ונגעים גרורות ריאתיות.

הזרקת תאי אוסטאוסרקומה אינטראטיביאלית להפקת אוסטאוסרקומה אורתוטופית ומודלים של עכבר גרורות ריאות

פרוטוקול זה מתאר את הקמתו של מודל אקס ויו תלת-ממדי (3D) של אינטראקציה בין תאים סרטניים ל-omentum. המודל מספק פלטפורמה להבהרת מנגנונים מעודדי גידול בתוך נישת השומן ולבדיקת טיפולים חדשניים.

מודל Ex Vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות Omentum אנושי

כתב יד זה מתאר פיתוח של מודל בבעלי חיים המאפשר בדיקה ישירה של השפעות היפוקסיה של הגידול על גרורות ופענוח מנגנוני פעולתה. למרות שהניסויים המתוארים כאן מתמקדים בסרקומה של יואינג, ניתן ליישם גישה דומה על סוגי גידולים אחרים.

In vivo מודל השפעת בדיקה של היפוקסיה על גרורות של גידולים

למדו מודל ניסיוני בעכברים לחקר התפשטות גידולים בקרצינומה של תאי השחלות דרך הזרקה אורתוטופית. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התפתחות גידולים מקוריים וגרוריים בצפק.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק

גלה סרטונים נוספים