Name: פיתוח בינוני אגר chromogenic רגיש וספציפי יותר לצורך זיהוי של Parahaemolyticus Vibrio ו אחר Vibrio מינים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: למדו להעריך את הרגישות והספציפיות של מדיום כרומוגני חדש לזיהוי Vibrio parahaemolyticus בהשוואה למדיות רגילות. שיטה זו משפרת את בטיחות המזון והניטור הסביבתי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים מ Channey, א צ&#39;או, ו ק תומס על עזרתם על הפרויקט. אספקה ​​הפרויקט מומנו חלקית על ידי אוניברסיטת מדינת הפוליטכני בקליפורניה.

<ol><li>Yeung, P. S., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology%2C+pathogenesis%2C+and+prevention+of+foodborne+Vibrio+parahaemolyticus+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Foodborne+Pathog.+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiology, pathogenesis, and prevention of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections.</a> Foodborne Pathog. Dis. 1 (2), 74-88 (2004).</li>
<li>Yeung, P. S. M., Boor, K. J. Epidemiology, molecular biology, and detection of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYeung%2C+PSM+%22Foodborne+and+Waterborne+Bacterial+pathogens%3A+Epidemiology%2C+Evolution+and+Molecular+Biology%22">Foodborne and Waterborne Bacterial pathogens: Epidemiology, Evolution and Molecular Biology</a>. Faruque, S. M. , Caister Academic Press. 153-184 (2012).</li>
<li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+Signs%3A+Incidence+and+Trends+of+Infection+with+Pathogens+Transmitted+Commonly+Through+Food+-+Foodborne+Diseases+Active+Surveillance+Network%2C+10+U.S.+Sites%2C+1996-2010%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Vital Signs: Incidence and Trends of Infection with Pathogens Transmitted Commonly Through Food - Foodborne Diseases Active Surveillance Network, 10 U.S. Sites, 1996-2010.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 10, 1996-2010 (2011).</li>
<li>Centers for Disease Control and Prevention. Summary of human Vibrio cases reported to CDC, 2008. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://stacks.cdc.gov/view/cdc/21591">https://stacks.cdc.gov/view/cdc/21591</a> (2008).</li>
<li>Scallan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foodborne+illness+acquired+in+the+United+States+-+major+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Foodborne illness acquired in the United States - major pathogens.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (1), 7-15 (2011).</li>
<li>Baross, J., Liston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+Vibrio+parahaemolyticus+and+related+hemolytic+vibrios+in+marine+environments+of+Washington+State%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Occurrence of Vibrio parahaemolyticus and related hemolytic vibrios in marine environments of Washington State.</a> Appl. Microbiol. 20 (2), 179-186 (1970).</li>
<li>Baross, J., Liston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Vibrio+parahaemolyticus+from+the+Northwest+Pacific%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Isolation of Vibrio parahaemolyticus from the Northwest Pacific.</a> Nature. 217 (5135), 1263-1264 (1968).</li>
<li>Kueh, C. S., Chan, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+in+bivalve+shellfish+with+special+reference+to+the+oyster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Bacteria in bivalve shellfish with special reference to the oyster.</a> J. Appl. Bacteriol. 59 (1), 41-47 (1985).</li>
<li>Food and Drug Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Bad+Bug+Book%2C+Foodborne+Pathogenic+Microorganisms+and+Natural+Toxins%22">Bad Bug Book, Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins</a>. , Second Edition, (2012).</li>
<li>Qadri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+and+inflammatory+immune+responses+in+patients+infected+with+strains+of+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Adaptive and inflammatory immune responses in patients infected with strains of Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Infect. Dis. 187 (7), 1085-1096 (2003).</li>
<li>Food and Drug Administration. Quantitative risk assessment on the public health impact of Vibrio parahaemolyticus in raw oysters. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/ResearchAreas/RiskAssessmentSafetyAssessment/ucm050421.htm">http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/ResearchAreas/RiskAssessmentSafetyAssessment/ucm050421.htm</a> (2005).</li>
<li>Food and Drug Administration. Bacteriological analytical manual online. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm070830.htm">http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm070830.htm</a> (2004).</li>
<li>MacFaddin, J. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMacFaddin%2C+JF+%22Media+for+isolation-cultivation-identification-maintenance+of+medical+bacteria%22">Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria</a>. 1, Williams & Wilkins. Baltimore, Md. (1985).</li>
<li>Bottone, E. J., Robin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+parahaemolyticus%3A+suspicion+of+presence+based+on+aberrant+biochemical+and+morphological+features%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio parahaemolyticus: suspicion of presence based on aberrant biochemical and morphological features.</a> J. Clin. Microbiol. 8 (6), 760-763 (1978).</li>
<li>Lotz, M. J., Tamplin, M. L., Rodrick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiosulfate-citrate-bile+salts-sucrose+agar+and+its+selectivity+for+clinical+and+marine+vibrio+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Clin.+Lab.+Sci%22%5BJournal%5D)">Thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose agar and its selectivity for clinical and marine vibrio organisms.</a> Ann. Clin. Lab. Sci. 13 (1), 45-48 (1983).</li>
<li>Hara-Kudo, Y., Nishina, T., Nakagawa, H., Konuma, H., Hasegawa, J., Kumagai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+for+detection+of+Vibrio+parahaemolyticus+in+seafood%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Improved method for detection of Vibrio parahaemolyticus in seafood.</a> Appl. Environ. Microbiol. 67 (12), 5819-5823 (2001).</li>
<li>Eddabra, R., Piemont, Y., Scheftel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+new+chromogenic+medium%2C+chromID+Vibrio%2C+for+the+isolation+and+presumptive+identification+of+Vibrio+choleare+and+Vibrio+parahaemolyticus+from+human+clinical+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Clin.+Microbiol.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a new chromogenic medium, chromID Vibrio, for the isolation and presumptive identification of Vibrio choleare and Vibrio parahaemolyticus from human clinical specimens.</a> Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 30 (6), 733-737 (2011).</li>
<li>Kodaka, H., Teramura, H., Mizuochi, S., Saito, M., Matsuoka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Compact+Dry+VP+method+for+screening+raw+seafood+for+total+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food.+Prot%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Compact Dry VP method for screening raw seafood for total Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food. Prot. 72 (1), 169-173 (2009).</li>
<li>Su, Y. C., Duan, J., Wu, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectivity+and+specificity+of+a+chromogenic+medium+for+detecting+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Selectivity and specificity of a chromogenic medium for detecting Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food Prot. 68 (7), 1454-1456 (2005).</li>
<li>Bej, A. K., Patterson, D. P., Brasher, C. W., Vickery, M. C., Jones, D. D., Kaysner, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+total+and+hemolysin-producing+Vibrio+parahaemolyticus+in+shellfish+using+multiplex+PCR+amplification+of+tl%2C+tdh+and+trh%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tl, tdh and trh.</a> J. Microbiol. Methods. 36 (3), 215-225 (1999).</li>
<li>Yeung, P. S. M., DePaola, A., Kaysner, C. A., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PCR+assay+for+specific+detection+of+the+pandemic+Vibrio+parahaemolyticus+O3%3AK6+clone+from+shellfish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Sci%22%5BJournal%5D)">A PCR assay for specific detection of the pandemic Vibrio parahaemolyticus O3:K6 clone from shellfish.</a> J. Food Sci. 68 (4), 1459-1466 (2003).</li>
<li>Yeung, P. S. M., Hayes, M. C., DePaola, A., Kaysner, C. A., Kornstein, L., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+phenotypic%2C+molecular%2C+and+virulence+characterization+of+Vibrio+parahaemolyticus+O3%3AK6+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative phenotypic, molecular, and virulence characterization of Vibrio parahaemolyticus O3:K6 isolates.</a> Appl. Environ. Microbiol. 68 (6), 2901-2909 (2002).</li>
<li>Duan, J., Su, Y. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+a+chromogenic+medium+with+thiosulfate-citrate-bile+salts-sucrose+agar+for+detecting+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Sci%22%5BJournal%5D)">Comparison of a chromogenic medium with thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose agar for detecting Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food Sci. 70, M125-M128 (2005).</li>
<li>Pinto, A. D., Terio, V., Novello, L., Tantillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+thiosulphate-citrate-bile+salt+sucrose+%28TCBS%29+agar+and+CHROMagar+Vibrio+for+isolating+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Comparison between thiosulphate-citrate-bile salt sucrose (TCBS) agar and CHROMagar Vibrio for isolating Vibrio parahaemolyticus.</a> Food Control. 22 (1), 124-127 (2011).</li>
<li>Canizalez-Roman, A., Flores-Villaseñor, H., Zazueta-Beltran, J., Muro-Amador, S., Leòn-Sicairos, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+a+chromogenic+agar+medium-PCR+protocol+with+a+conventional+method+for+isolation+of+Vibrio+parahaemolyticus+strains+from+environmental+and+clinical+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of a chromogenic agar medium-PCR protocol with a conventional method for isolation of Vibrio parahaemolyticus strains from environmental and clinical samples.</a> Can J Microbiol. 57 (2), 136-142 (2011).</li>
<li>Kriem, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+Vibrio+spp.+in+raw+shrimps+%28Parapenaeus+longirostris%29+and+performance+of+a+chromogenic+medium+for+the+isolation+of+Vibrio+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Lett+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of Vibrio spp. in raw shrimps (Parapenaeus longirostris) and performance of a chromogenic medium for the isolation of Vibrio strains.</a> Lett Appl Microbiol. 61 (3), 224-230 (2015).</li>
<li>Food Drug Administration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+guidance+on+reporting+results+from+studies+evaluating+diagnostic+tests%5BTitle%5D)+AND+%22http%3A%2F%2Fwww.fda.gov%2FRegulatoryInformation%2FGuidances%2Fucm071148.htm%22%5BJournal%5D)">Statistical guidance on reporting results from studies evaluating diagnostic tests.</a> http://www.fda.gov/RegulatoryInformation/Guidances/ucm071148.htm. , (2007).</li>
<li>Burd, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+laboratory-developed+molecular+assays+for+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Validation of laboratory-developed molecular assays for infectious diseases.</a> Clin Microbiol Rev. 23 (3), 550-576 (2010).</li>
<li>World Organisation for Animal Health. Principles and methods of validation of diagnostic assays for infectious diseases. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.01.05_VALIDATION.pdf">http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.01.05_VALIDATION.pdf</a> (2013).</li>
</ol>

חלק מהמדיה סופקה בנדיבות על ידי Hardy Diagnostics, סנטה מריה, קליפורניה. כיום הוא עובד בחברת Hardy Diagnostics.

מחקר זה מתמקד בפיתוח התקשורת והתרבות והערכה. כמקובל, TCBS היא סלקטיבית ובינוניים ההפרש המשמש לבידוד ואיתור V. parahaemolyticus, V. cholerae ו V. vulnificus 12. עם זאת, מגבלות דווחו על המדיום הזה, כגון אי היכולת להבדיל V. cholerae ממיני Vibrio אחרים. סוכרוז אינדיקטור pH הם סוכני בידול של TCBS. לפיכך, ייצור חומצה על ידי פרמנטור סוכרוז גורם שינוי צבע של המדיום. הצביעה של המדיום היא חסרון של TCBS כי זה עלול לטשטש תצפית של מורפולוגיה מושבה...

כחבר של סוג Vibrio, V. parahaemolyticus הוא גראם שלילי, שאינם יוצרי נבגים, מעוקל, חיידק דמוי מוט. הוא מציג תנועתיות גבוהה בשתי סביבות נוזלות חצי מוצק. רוב V. זני parahaemolyticus הם פתוגניים לבני אדם, אך תת פתוגניים גרמו מגיפות מגפות, ומכאן מין זה נחשב פתוגן foodborne חשוב במדינות רבות 1,2. השכיחות של זיהום Vibrio בארה&quot;ב הוכיחה מגמת עלייה מאז 2000 3. בין spp Vibrio., V. parahaemolyticus הוא המין הנפוץ ביותר בגרימת מחלות בארצות הברית 4,5. מינים אחרים רלוונטיים קליני כוללים V. alginolyticus, V. vulnificus, V. cholerae ועוד אחוז קטן של המחלות נגרם על ידי מינים רבים בו זמנית. Parahaemolyticus V. הוא i טבעיnhabitant מים ימיים ולכן התפוצה הרחבה ביותר במי אוקיינוס ​​ברחבי העולם כולל שפכי נהרות. המין התגלה בשנת 1950 לאחר התפרצות של הרעלת מזון ביפן. בארה&quot;ב, המין בודד לראשונה במי ים, משקעים, סרטנים וצדפות באזור Puget Sound 6,7. ניזונים מסנן בבתי גידול ימי, כגון צדפות צדפה, עשויים להכיל סוגי V. parahaemolyticus כחלק פלורה 8 הטבעית שלהם. ככזה, V. זיהומים parahaemolyticus ב האנושי לעיתים קרובות קשור לצריכה של פירות ים מזוהמים, במיוחד צדפות נא או שלא בושל. מסלול משותף פחות כניסה מתרחש כאשר פצע פתוח חשוף מי ים, מוביל לזיהום עור. רוב V. זני parahaemolyticus אינם גורם למחל אדם, אך תת מסוימים מחסה גורמים ארסיים כמו המוליזין ישיר thermostable (TDH) הם פתוגניים. התסמינים הנפוצים ביותר של V. foodborne parahaemolyticus זיהום הנושלשולים וכאבי בטן, ואחריו בחילות, הקאות וחום. כאבי ראש וצמרמורות גם מדווחות. תקופת הדגירה החציוני הוא 15 שעות, אבל יכול להיות עד 96 שעות לאחר צריכת כמות מספקת של זנים פתוגניים 9. המחלה נמשכת בין יומיים לשלושה ימים. הסימפטומים גסטרואנטריטיס הנגרמת על ידי V. parahaemolyticus הם בעיקר מעצמם ולכן טיפול מיוחד אין צורך. מקרים קלים של גסטרואנטריטיס ניתן לטפל ביעילות על ידי למקרה של התייבשות. עוד מחלות קשות ניתן לטפל על ידי אנטיביוטיקה כגון טטרציקלין או ציפרופלוקסצין 10. שיעור תמותה הוא כ -2% למקרי גסטרו, אך הוא עשוי להיות גבוה ככל 29% למי לפתח זיהום או הרעלת דם דם. כל אדם אשר צורכת פירות ים או יש פצע פתוח חשופים מי ים נמצא בסיכון של V. זיהום parahaemolyticus. הצורה חמורה יותר של מחלות, הרעלת דם מסכני חיים, נפוצה יותר בתוך תת-אוכלוסייה עם שיתוף רפואי בסיסיnditions 11, הכולל אלכוהוליזם, מחלות כבדות, סוכרת, מחלת כליות, ממאירות, ומצבים אחרים מובילים לתגובה חיסונית מוחלשת. יש לציין, קבוצה זו של אנשים היא גם בסיכון גבוה יותר לחלות במחלות קשות שנגרם על ידי V. vulnificus, אשר ניתן למצוא בבתי גידול טבעי דומה V. parahaemolyticus. V. parahaemolyticus מבודדת באופן שגרתי באמצעות thiosulfate-ציטראט מרה מלחי סוכרוז (TCBS) אגר כמדיום סלקטיבית ההפרש. עשרה במי peptone אלקליין עלולים להקדים בידוד על אגר TCBS. מושבות משוערות על TCBS אז נבדקים נוספים מערך של בדיקות ביוכימיות / או מבחנים מולקולריים מיקוד הנוכחות של גנים ספציפי מינים. בשיטות מבוססות PCR משמשים לעתים קרובות כדי לאשר את זהותם של V. parahaemolyticus ידי הגברת גן המוליזין thermolabile, tlh 12. לא משנה של chOICE של שיטות אישור, חשוב שיהיה מדיום יעיל לבודד ולהבחין V. parahaemolyticus מ vibrios הימי אחר מלכתחילה. TCBS נעשה שימוש בדרך כלל להבדיל מינים בתוך הסוג Vibrio לפי היכולות שלהם כדי להתסיס סוכרוז 12. תגובת תסיסה חיובית מלווה בשינוי בצבע הכחול Bromothymol אינדיקטור pH. V. מושבות parahaemolyticus הן די מובחנות TCBS, מפגין כחול לצבע ירוק. עם זאת, המדיום הזה לא יכול בקלות להבחין V. alginolyticus ו V. cholerae. תסיסת סוכרוז מינים פרוטאוס עשויים לייצר מושבות צהובות דומות V. cholerae או V. alginolyticus 13. על בידוד ראשוני על TCBS, V. parahaemolyticus יכול להיות גם בטעות כמפר Aeromonas hydrophila, shigelloides Plesiomonas, ו Pseudomonas spp 14. זנים עם Ferm סוכרוז מתעכבentation עלול להתבלבל עם סוכרוז אחר nonfermenting 13 Vibrio, הכולל V. parahaemolyticus. TCBS נמצאה להיות רגישים לא נגד Escherichia coli, putrefaciens Pseudomonas, בין היתר. מינים אחרים כמה להניב ירוק מושבות אפורות אשר מבולבלות פוטנציאלי עם V. parahaemolyticus או V. vulnificus 15. כתוצאה מכך, רצוי לפתח תקשורת תרבות האלטרנטיבית ברגישות טובה יותר וספציפי כלפי גילוי ובידוד V. parahaemolyticus ומינים אחרים קשורים זה לזה. חלופות מדיה פותחו מספר לאחרונה. בנוסף להכללת סוכנים סלקטיבית, רוב לשלב מצעים chromogenic להבדיל מבוסס מינים על פעילות אנזימטית ההפרש שלהם. לדוגמה, indoxyl-β-glucoside ו indoxyl-β-galactoside שימשו מצעים chromogenic להבדיל V. פסקתימושבות haemolyticus (אשר מופיעים בצבע ירוק כחלחל) מאלו של V. cholerae (סגול) בשל היכולות ההפרש שלהם לייצר-glucosidase β ו β-galactosidase 16. ניסוחים שונים של אגר chromogenic שפותחו על ידי מספר קבוצות הוערכו ו דווחו לבצע דומה ל- או יותר טוב 17,18,19 TCBS. יתרון של שימוש בינוני chromogenic הוא כי והצביעה סביב המדיום היא מינימאלית ובכך מקלות על הבידוד של מושבות בפרט. במחקר זה, החוקרים העריכו את היכולת של מדיום chromogenic שעוצבה זה מקרוב כדי לזהות ולבודד V. cholerae, V. parahaemolyticus, ו V. vulnificus; עם דגש מיוחד על יכולתה להבחין V. parahaemolyticus ממינים אחרים.

<table><tbody><tr><td><חזק>ריאגנט/ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אגר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>DF0140-15-4</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>אוטוקלאב</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אבקת BHI</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>DF0418-17-7</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>בלנדר</td><td>כל</td><td></td><td>כדי לערבב בשר צדפות</td></tr><tr><td>גז CampyGen גנרטור</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>CN035A</td><td>כדי לספק אווירה מיקרואירופילית; עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>צלחות אגר שוקולד</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>E14</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>ריאגנטים PCR נפוצים (dNTPs, MgCl2, Taq פולימראז)</td><td>כל</td><td></td><td>או שימוש בחרוזי PCR (Fisher Sci 46-001-014)</td></tr><tr><td>צינורות תרבית</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50712</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>צינורות אפנדורף</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S348903</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>ג'ל דוק</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HardyChrom Vibrio אגר צלחות Hardy</td><td>Diagnostics</td><td>G319</td><td>מחקר זה מעריך את המדיום הזה</td></tr><tr><td>חממה</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>לולאות חיסון</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22-363-606</td><td>במחקר זה נעשה שימוש בגודל 10 מיקרוליטר</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>צדפות</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>R23701</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>צלחת פטרי</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>Pipette וטיפים</td><td>כל</td><td></td><td>טיפים מעוקרים</td></tr><tr><td>פריימרים לסולם DNA</td><td></td><td></td> tlh<td>IDT</td></tr> ניתן להשתמש <tr><td></td><td>בכל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מפזר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-100-11</td><td>חרוזים במקום</td></tr><tr><td>בלנדר Stomacher</td><td></td><td>400</td><td>הדגימות הומוגניות ב-200 סל"ד למשך 30 שניות. ניתן להשתמש בהומוגנייזר אחר.</td></tr><tr><td>שקיות סינון סטריליות לבלנדרים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>01-812-5</td><td></td></tr><tr><td>TCBS אבקה</td><td>הארדי אבחון</td><td>265020</td><td>מחקר זה מעריך</td></tr> זה <tr><td>בינוני Thermocycler</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אבקת TSB</td><td>פישר מדעי</td><td>DF0370-07-5</td><td>עשוי להשתמש במותגים אחרים</td></tr><tr><td>UV צפייה ארון</td><td>כל</td><td></td><td>פלוט גל ארוך UV אור</td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>כל</td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>שם</td><td>מקורות</td><td>מספר קטלוגי</td><td>הערות</td></tr><tr><td>מינים וזנים של חיידקים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aeromonas hydrophila</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Candida albicans</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Campylobacter jejuni</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Proteus mirabilis</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Pseudomonas aeruginosa</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Salmonella Choleraesuis</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella boydii</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella flexneri</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella sonnei</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Vibrio alginolyticus</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. cholerae (הסרוטיפים כוללים O139, O1, non O1, El Tor biovars)FDA</td><td>, ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>V. damsela</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. fisheri</td><td>Environment</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. fluvialis</td><td>CDC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. furnissii </td><td>CDC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. hollisae</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. metschnikovii</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>V. mimicus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. parahaemolyticus (הסרוטיפים כוללים O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8, etc.)</td><td>ATCC, FDA, CDC, Environment</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. proteolyticus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. vulnificus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

פיתוח בינוני אגר chromogenic רגיש וספציפי יותר לצורך זיהוי של<em&gt; parahaemolyticus vibrio</em&gt; ו אחר<em&gt; vibrio</em&gt; מינים

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

זיהומי foodborne בארה&quot;ב נגרמת על ידי מיני Vibrio הראו מגמת עלייה. בשנת מהמין Vibrio, parahaemolyticus V. אחראי רוב דלקות -associated Vibrio. לפיכך, בידול מדויק בין spp Vibrio. וזיהוי של V. parahaemolyticus יש חשיבות קריטית כדי להבטיח את שלומם של אספקת המזון שלנו. למרות בטכניקות מולקולריות נפוצות יותר ויותר, שיטות-תלוי תרבות עדיין נעשות באופן שיגרתי והם נחשבים שיטות סטנדרטיות בנסיבות מסוימות. לפיכך, מדיום אגר chromogenic רומן נבדק במטרה לספק שיטה טובה יותר עבור בידוד ובידול של spp Vibrio משמעות קלינית. הפרוטוקול משווה את הרגישות, סגולי וזיהוי הגבול לצורך זיהוי של V. parahaemolyticus בין מדיום chromogenic החדש מדיום קונבנציונלי. V. השונה זני parahaemolyticus (n = 22) מחדשהצגת קפסיד ומקור מגוונים של מקורות ששמשו. הם זוהו בעבר על ידי מינהל המזון והתרופות האמריקאי (FDA) המרכז לבקרת מחלות ומניעתן (CDC), ומאומת נוספת במעבדה שלנו על ידי tlh -PCR. לפחות ארבעה ניסויים נפרדים, זנים אלה היו מחוסנים על מלחי סוכרוז chromogenic אגר thiosulfate-ציטראט-מרה (TCBS) אגר, המהווה את המדיום המומלץ culturing מין זה, ואחריו דגירה על 35-37 מעלות צלזיוס למשך 24 hr -96. שלושה V. זני parahaemolyticus (13.6%) לא גדלו באופן אופטימלי על TCBS, בכל זאת הציגו מושבות ירוקות אם יש צמיחה. שני זנים (9.1%) לא הניב המושבות ציאן הצפויות על אגר chromogenic. V. אי זני parahaemolyticus (n = 32) נבדקו גם כדי לקבוע את הספציפיות של אגר chromogenic. בין זנים אלה, 31 לא גדלו ולא הפגינו שום מורפולוגיה מושבה אחרות. ההתאוששות הממוצעת של V. parahaemolyticus על chromogenic אגר היה ~ 96.4% ביחס ל אגר סויה tryptic בתוספת 2% NaCl. לסיכום, אגר chromogenic החדש הוא מדיום יעיל לגילוי V. parahaemolyticus וכדי להבחין בינו vibrios האחר.

במחקר זה, 54 זנים של חיידקים נאספו, שכלל 22 זנים בתוך V. מיני parahaemolyticus, 19 מיני Vibrio אחרים, ו -13 מיני Vibrio מייננת (טבלה 1). רוב V. זני parahaemolyticus התקבלו גם מן ה- FDA, ה- CDC או מחלקות בריאות ממלכתיות אחרות. הם מייצגים קפסיד מגוונים ומקורות בידוד. זנים אלה זוהו בעבר על ידי רשויות רגולטוריות. אנחנו עוד חיזק את זהותם של V. אלה parahaemolyticus י...

איתור ובידוד של מיני ויבריו רלוונטיים מבחינה קלינית דורשים אמצעי תרבית סלקטיביים ודיפרנציאליים. מחקר זה העריך את יכולתו של מדיום כרומוגני חדש לזהות ולזהות V. parahaemolyticus ומינים קשורים אחרים. נמצא כי למדיום החדש יש רגישות וסגוליות טובות יותר מהמדיום הקונבנציונלי.

פיתוח בינוני אגר chromogenic רגיש וספציפי יותר לצורך זיהוי של<em&gt; Parahaemolyticus Vibrio</em&gt; ו אחר<em&gt; Vibrio</em&gt; מינים

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להעריך את הרגישות והסגוליות של מצע כרומוגני חדש ליכולת לזהות ולבודד Vibrio parahaemolyticus בהשוואה למצעים קונבנציונליים. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום המיקרוביולוגיה של מזון וסביבה, כגון מהי השכיחות של מיני Vibrio במזון ובסביבות איסוף? היתרון המרכזי של הפרוצדורה שלנו הוא שניתן להשתמש בבידודים בקטריאליים רבים, כולל בנוכחות מטריקס של מזון.לפני תרבית החיידקים, יש לעקר באוטוקלב את כל מצעי האגר. לאחר מכן, קררו את האגר ל-45 עד 50 degrees Celsius באמבט מים. כאשר האגר מוכן, סדרו פיתחים ריקים בערימות של חמישה עד שישה פיתחים.לאחר מכן, החל מהשכבה התחתונה של הערימה, שפכו את האגר הנוזלי לתוך כל צלחת עד למילוי של כחצי מהנפח, והחזירו את המכסים לאחר השפיכה. המתינו לאגר להתמצק בטמפרטורת החדר למשך 12 שעות לפחות. להכנת תרביות הזנימים המיקרוביאליים, כאשר האגר מוכן, השתמשו בלולאת הזרקה סטרילית להעברת התרביות אל צלחות האגר הבלתי-סלקטיביות המתאימות, תוך מריחה של החיידקים בתבנית שתאפשר צפייה במושבות מבודדות.לאחר שכל המושבות הועברו לצלחות, דגרו את התרביות במצב הפוך בטמפרטורה של 35 עד 37 מעלות צלזיוס למשך עד 48 שעות, למעט מיני Campylobacter, שיש לדגר בצנצנת עם מכסה סגור המכילה שקית גז ליצירת סביבה מיקרו-ארובילית. בחנו את מורפולוגיית המושבות בסוף הדגירה. ת

development-more-sensitive-specific-chromogenic-agar-medium-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

דיווחנו לאחרונה גישה חדשנית להפקת בדיקות DNAzyme fluorogenic כי ניתן להחיל על הקמת פשוט, "תמהיל-and-לקרוא" assay ניאון לגילוי חיידקי. אלו בדיקות דנ"א מיוחד לזרז את המחשוף של מצע ה-DNA-RNA-chromophore שונה chimeric בנוכחות תערובת תאי גולמי (CEM) המיוצר על ידי חיידק מסוים, ובכך לתרגם את גילוי החיידק לדור אותות הקרינה. בדוח זה נתאר את הליכי הניסוי העיקריים שבהם בדיקה DNAzyme מסוים כונה "RFD-EC1" מועסק לצורך זיהוי של החיידק...

זיהוי של חיידקים באמצעות DNAzymes Fluorogenic

מקור: Heering, J., et al. אינדוקציה של התמיינות תאית והדמיה של תאים בודדים של תאי שחיין ונחיל Vibrio parahaemolyticus . J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים את השראת התמיינות תאי הנחיל ב-Vibrio parahaemolyticus באמצעות מדיום אגר שהוכן במיוחד. על ידי מניפולציה של רמזים סביבתיים כגון דלדול ברזל, תוספת סידן ומגע עם פני השטח, החיידקים מגורים לעבור מצורת השחיין שלהם לתאי נחיל מוארכים עם דגלים לרוחב. תאים מובחנים אלה מתפשטים על פני השטח המוצק, ויוצרים התפרצויות נחיל אופייניות המסמלות שינוי מורפולוגי...

אינדוקציה של התמיינות של Vibrio parahaemolyticus לתאי נחיל

מקור: Heering, J., et al.אינדוקציה של התמיינות תאית והדמיה של תאים בודדים של תאי שחיין ונחיל Vibrio parahaemolyticus ., J. Vis. Exp. (2017).סרטון זה מדגים את הכנת תאי הנחיל ממושבת Vibrio parahaemolyticus להדמיה פלואורסצנטית. החיידקים מהונדסים גנטית כדי לבטא חלבון מתויג פלואורופור שמתמקם באופן חד קוטבי בתאי שחיין ודו קוטבי בתאי נחיל מוארכים, מה שמאפשר את ההתמיינות החזותית שלהם. כרית אגרוז מוכנה על שקופית מיקרוסקופ, שעליה מונח קטע מושבה ומוסר כדי להשאיר תאים דבקים, אשר מכוסים לאחר מכן בכיסוי...

הכנת תאי נחיל Vibrio parahaemolyticus להדמיה

מקור: Yeung, M., et al. פיתוח מדיום אגר כרומוגני רגיש וספציפי יותר לזיהוי Vibrio parahaemolyticus ומיני ויבריו אחרים. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים שיטה מבוססת תרבות לזיהוי מיני ויבריו , ומדגיש אגר כרומוגני כחלופה מדויקת יותר לאגר תיוסולפט-ציטראט-מרה הנפוץ או אגר TCBS. אגר כרומוגני מספק בידול מעולה של זני ויבריו על ידי זיהוי פעילויות אנזימטיות ספציפיות למין.

מדיום כרומוגני חדש לזיהוי מהיר של מיני ויבריו

מקור: ברומפילד, ק. ד. ואחרים, טכניקות מעבדה המשמשות לשימור והבחנה בין ביוטיפים של ויבריו כולרה לבידוד קליני וסביבתי. J. Vis. Exp. (2017).הסרטון הזה מדגים את מבחן ווגס-פרוסקאואר (VP) להבחנה בין שלושה ביוטיפים של ויבריו כולרה: קלאסי, אל טור מסוג פראי, וגרסה של אל טור. כל תרבית מחוננת לתוך מדיום המכיל גלוקוז, מודגרת ומטופלת ב-α-נפתול ואשלגן הידרוקסיד כדי לזהות נוכחות אצטואין. צבע ורוד-אדום, המצביע על תגובת VP חיובית, נצפה רק בביוטיפ El Tor מסוג פראי, מה שמבדיל אותו מהסוגים הקלאסיים והווריאנטים.

מבחן ווגס-פרוסקאואר להבדלת ביוטיפים של ויבריו כולרה

פרוטוקול הכולל ריכוז משולב, העשרה וזיהוי קולורימטרי של נקודת קצה של פתוגנים הנישאים במזון בכמויות גדולות של מים חקלאיים מוצג כאן.  המים מסוננים באמצעות Modified Moore Swabs (MMS), מועשרים במדיה סלקטיבית או לא סלקטיבית, והזיהוי מתבצע באמצעות התקנים אנליטיים מבוססי נייר (μPAD) המשובצים במצעים קולורימטריים אינדיקטיביים חיידקיים.

מבוסס נייר Colorimetric איתור של<em&gt; חיידקי Escherichia</em&gt;,<em&gt; סלמונלה</em&gt; Spp., ו<em&gt; חיידקי ליסטריה</em&gt; מכמויות גדולות של מים לחקלאות

כתב יד זה מתאר ראוי Vibrio cholerae טכניקות תחזוקה בנוסף סדרה של מבחני ביוכימי, מנוצל קולקטיבית עבור הבחנה מהירה ואמינה בין קליני וסביבתי V. ביו-טיפוסים של כולרה במעבדה.

טכניקות מעבדה המשמשות לשמירה על ביו-טיפוסים של<em&gt; ויבריו כולרה</em&gt; בידוד קליני ואיכותי

פרוטוקול זה מאפשר מיקרוסקופית תא בודד של מובחן Vibrio parahaemolyticus שחיין ותאי swarmer . השיטה מייצרת אוכלוסייה של תאים swarmer זמין בקלות עבור ניתוח תא בודד ומכסה הכנה של תרבויות תאים, אינדוקציה של בידול swarmer, הכנת המדגם, ניתוח תמונה.

אינדוקציה של דיפרנציאציה נייד תא הדמיה אחת של<em&gt; Vibrio parahaemolyticus</em&gt; שחיין ותאי נחיל

פרוטוקול לפיתוח ביוסנסור אלקטרוכימי DNA הכוללת של אלקטרודות פחמן חלקיקי-לאחרונה, המסך המודפס מיוצב חומצה, זהב polylactic לזהות ויבריו parahaemolyticus מוצג.

התפתחות ביוסנסור אלקטרוכימי דנ א כדי לזהות חיידק והקאה

השיטה מתארת ​​את התהליך שבאמצעותו דיונון הוואי...

קולוניזציה של Euprymna scolopes קלמארי על ידי Vibrio fischeri</em

למדו להעריך את הרגישות והספציפיות של מדיום כרומוגני חדש לזיהוי Vibrio parahaemolyticus בהשוואה למדיות רגילות. שיטה זו משפרת את בטיחות המזון והניטור הסביבתי.

פיתוח בינוני אגר chromogenic רגיש וספציפי יותר לצורך זיהוי של

גלה סרטונים נוספים