Name: מסנן ראפיד הכנס מבוססת מערכת 3D תרבות התמיינות תאי ערמונית ראשית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: חקור מערכת תרבית תלת-ממדית מבוססת מסנן להתמיינות תאי ערמונית ראשית. שיטה זו מאפשרת בידוד מהיר של RNA, DNA וחלבונים למחקר סרטן הערמונית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה מומן על ידי T32 (CA 9686-18) ו TL1 (TL1TR001431) פרסים מענק עבודת הפוסט דוקטורט (שעון מקומי), DOD PC140268 (CA), W81XWH-13-1-0327 (CA) TR000102-04 (CA) וכן U01 PAR-12-095 (קומאר) ו P30 CA051008-21 (ויינר). קיבעון לדוגמא, חתך מכתים בוצע היסטולוגיה במרכז לחקר הסרטן לומברדי מקיף ואת המשאב המשותף רקמות. אנו מודים ריצ&#39;רד שלגל לדיונים מועילים. התוכן הוא באחריות הבלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצגים את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי לסרטן או מכוני הבריאות הלאומיים.

1. הקמת תא 3D תרבות כנס מערכת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים 2 מוסיף תרבית תאים פוליקרבונט אוריינטציה הפוכה (צד מסנן למעלה) מטה (איור 1 א) 6 גם צלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרוח שכבה דקה של ג&#39;לטין 0.1% במים אל הצד התחתון של הכנס ולאפשר לו להתייבש (10-20 דקות) בתוך ארון בטיחות ביולוגית כדי לשמור על סטריליות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.2 פעמים נוספות עבור סכום כולל של 3 בקשות של ג&#39;לטין 0.1% על ההכנסות. הערה: ציפוי ג&#39;לטין יעזור דיפוזיה גבול בין התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאסוף את CRCs העיקרי מתנאים תרבות סטנדרטי, להוסיף 5 מ&quot;ל של PBS לשטוף את הבקבוק תרבות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinize את התאים באמצעות (1 מ&quot;ל עבור T-25 ו -2 מ&quot;ל עבור T-75) 0.25% טריפסין- EDTA במשך 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לטפוח בעדינות את הצד של הבקבוק כדי לסייע פירוק התאים. ואז להמשיך לעצור את תגובת טריפסין ולאסוף את התאים על ידי הוספת 5 מיליליטר של DMEM המלא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף<html> התאים בתוך שפופרת 15 מ&quot;ל. צנטריפוגה הצינור ב 4 ° C ו 188 XG ולספור באמצעות דלפק תא אוטומטי או hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re- להשעות 600,000 CRCs ב 250 μL מותנה תקשורת (CM) ולהוסיף את כנס התרבות בכיוון הנכון (מסנן בצד למטה) (איור 1 ב). זה נקרא החדר הפנימי. הערה: CM הוא F-מדיה מותנית תאי J2 מוקרנים ומכיל 10 מיקרומטר Y-27632 כמתואר 7 בעבר, 8, 9, 11. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 2 מ&quot;ל של CM אל החדר החיצוני של 6 את הצלחת היטב לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה (עבור h 18 לפחות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים בזהירות את CM על החדר הפנימי עם 1 מ&quot;ל או 200 μL פיפטה ולאט לאט להוסיף מדיה בידול (DM) אל החדר הפנימי עם טפטפת 1 מ&quot;ל עד מלא. היזהר שלא להפריע את שכבת התאים. </li></ol>le &quot;&gt; 2. תחזוקה של תרבויות 3D <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את התרבויות בכל יום. תאים בריאים להופיע כפי שמוצג באיור 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שנה את CM בתא החיצוני כל יום או כל יום אחר תלוי בחילוף החומרים של התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התקשורת של משנה את צבעה החדר הפנימי (צהוב), להסיר בזהירות את התקשורת על החדר מסנן פנימי עם 1 מ&quot;ל או 200 פיפטה μL. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב התקשורת בתא הצלחת היטב החיצוני 6 עם טיפ aspirating. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת פיפטה 1 מ&quot;ל, להחיל DM טריים לאט אל החדר הפנימי עד מלא. היזהר שלא לגרד או אחר לסלק את שכבת התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלף את המדיה בתא החיצוני עם 2 מ&quot;ל של CM טרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על התרבויות במשך 2 שבועות, ולאחר מכן להמשיך עיבוד עבור בידוד bimolecular הרצוי. הערה: כל שורה צלחת 6 היטב, בסך הכל שישה מוסיף (איור 1B), אמורה להתבצע לכל ניסוי לרכוש מספיק תאים עבור DNA, RNA או חלבון לניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקשורת לשאוב בתא החיצוני ולשטוף עם 2 בופר פוספט מ&quot;ל (PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים בזהירות התקשורת מהאולם הפנימי עם 1 מ&quot;ל או 200 פיפטה μL ולהוסיף 500 μL PBS. הימנע גירוד או אחר מטריד את התאים על הממברנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב PBS מן החדר החיצוני ובזהירות להסיר PBS מן החדר הפנימי עם 1 מ&quot;ל או 200 פיפטה μL. לאחר PBS הוסר, להמשיך ישירות את היישום המתאים כמפורט להלן. אל תאפשר הממברנה להתייבש. התרבות יכולה להישמר בקצרה PBS עד היישום הוא מוכן להתחיל. </li></ol> 3. עיבוד מסנני גלולת בנקאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 100 μL 0.25% טריפסין-EDTA לכל חדר פנימי דגירה במשך 5 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצרה ובזהירות להתסיס / לגרד את התאים על פני השטח קרום עם טפטפת 200 μL תוך pipetting למעלה ולמטה (להימנע puncטיורינג הממברנה). דגירה של 1 דק &#39;על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 250 μL של CM אל החדר הפנימי הראשון ו פיפטה למעלה ולמטה בעדינות כדי לשטוף את המסנן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת resuspended תאים לתא מסנן הסמוך המכיל אותם תנאי התקשורת וחזור pipetting למעלה ולמטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הליך זה עבור כל אחד מוסיף של מצב יחיד. אסוף ולהעביר התאים לצינור צנטריפוגות 1.5 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ולשטוף כל תא פנימי עם תוספת של 100-200 μL של CM לאסוף את כל תאים נותרים. הוסף הצינור צנטריפוגות 1.5 מ&quot;ל בשלב 3.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין התאים ב 423 XG microcentrifuge בבית 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant לשטוף את התא גלולה אחת עם 1000 μL PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין שוב 423 XG microcentrifuge בבית 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב PBS ולהקפיא ב -80 ° C לשימוש מאוחר יותר. </li></ol> 4. עיבוד מסנני בידוד RNA או DNA <ol&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 200 μL של כלורופורם פנול-thiocyanate guanidinium או מגיב מיצוי דומה החדר הפנימי בקצרה להתסיס את התאים על פני השטח קרום ידי pipetting למעלה ולמטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדגירים מגיב החילוץ עבור 5 דקות בטמפרטורת החדר עם יבש החדר החיצוני. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כפי המסנן עלול לנתק מן הכנס, לשטוף את הממברנה המסנן משויך ידי pipetting פתרון החילוץ למעלה ולמטה. אסוף כמה שיותר מגיב המיצוי ככל האפשר על ידי הטיית 6 הצלחת היטב aspirating כל נוזל שיורים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פעל על פי הפרוטוקול של היצרן עבור טיהור ושחזור של DNA, RNA או חלבון. </li></ol> 5. עיבוד מסנני בידוד חלבון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את הכנס המסנן בצלחת 6 היטב על קרח. אל החדר הפנימי, להוסיף 10 μL של חיץ תמוגה חלבון בתוספת 1 פלואוריד נתרן מ&quot;מ (NaF), 1 vanadate נתרן מ&quot;מ (NAV), 100 מ&quot;מ dithiothreitol (DTT) וכן 100 μL של קוקטייל אנטי-פרוטאז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתסיס / לגרד את התאים על פני השטח קרום עם טפטפת 20 μL תוך pipetting למעלה ולמטה. למנוע יצירת בועות במאגר תמוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת צלחת 6 היטב עם מוסיף מסנן על קרח למשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור נגררים ולאחר מכן לשטוף את המשטח הממברנה עם למאגר תמוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את lysates מן 6 מוסיף ולהעביר צינור צנטריפוגות 1.5 מ&quot;ל על הקרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את הממברנה הראשון עם 10 μL נוסף של חיץ תמוגה ולהעביר את המסנן הבא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 5.6 עבור כל המוסיף, איסוף כל פתרון חיץ תמוגה שיורית ולהוסיף צינור מיליליטר 1.5 (שלב 5.5). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה המדגם על הקרח עבור 5 דקות נוספות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין במהירות המרבית (16,873 XG בצנטריפוגה בראש הטבלה) במשך 15 דקות ב 4 ° C.. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> supernatant lysate פיפטה לתוך צינור 1.5 מיליליטר טרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך אל הניתוח ריכוזי או STO חלבוןמחדש lysates ב -80 מעלות צלזיוס. </li></ol> עיבוד 6. עבור H &amp; E ו- מכתים חיסונית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 500 μL ו 1 מ&quot;ל של 10% NBF (נייטרלי שנאגרו פורמלין) לתא הפנימיים והחיצוניים ולתת דגירה לילה ב 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב NBF מהאולם החיצוני ולהוסיף 1 agarose hydroxyethyl מ&quot;ל (HEA) ג&#39;ל עיבוד כדי בצנטריפוגה מ&quot;ל 1.5. לאט להמיס את agarose במיקרוגל באמצעות צריכת חשמל נמוכה וחזר s פולסים 10-20 עד agarose הוא נמס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את HEA באמבט 37 מעלות צלזיוס חם כדי למנוע התמצקות עד מוכן לשימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את NBF מן החדר הפנימי וליישם 25 μL של חימום מותך החדר הפנימי ולאפשר agarose כדי לחזק במשך 2-5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 2 קצף היסטולוגיה רפידות רטובות NBF 10% ומקום כרית אחת קלטת הטבעה (ראה האיור 3D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש להב סכין מנתחים # 11 (בעל להב חדה מאוד, בסדר-מחודד) להבקיע את המסנן מהצד התחתון של הכנסקאמרי, חלקית משחרר אותו מאולם סוגר הפלסטיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כמות קטנה (100-200 μL) של NBF בצלחת פטרי לטבול את מסנן וחילצה חלקית (איור 3 א) NBF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם אזמל להב # 10, ללחוץ בעדינות כנגד באמצע המסנן, מבפנים של החדר להוסיף, כדי לסלק את המסנן מלא מהחבית להוסיף (איור 3). אם יש חלק כלשהו של המסנן שעדיין מחוברת חבית, לנתק אותו עם אזמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את המסנן HEA מצופה לשניים עם להב סכין המנתחים # 10 (איור 3 ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל חצי של המסנן על כרית קצף קלטת היסטולוגיה מוכן בשלב 6.4 (איור 3D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיף את הספוג השני 10% NBF הספוג לקסטה, רבדה המסננת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמד לאטום את הקלטת, מקום NBF, דגירת הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסנן תהליך לגושים פרפין עבור חתך והכתים כמושתואר לעיל 12. </li></ol>

<ol><li>Gao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+cultures+derived+from+patients+with+advanced+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid cultures derived from patients with advanced prostate cancer.</a> Cell. 159 (1), 176-187 (2014).</li>
<li>Chapman, S., Liu, X., Meyers, C., Schlegel, R., McBride, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+keratinocytes+are+efficiently+immortalized+by+a+Rho+kinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Human keratinocytes are efficiently immortalized by a Rho kinase inhibitor.</a> J Clin Invest. 120 (7), 2619-2626 (2010).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROCK+inhibitor+and+feeder+cells+induce+the+conditional+reprogramming+of+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">ROCK inhibitor and feeder cells induce the conditional reprogramming of epithelial cells.</a> Am J Pathol. 180 (2), 599-607 (2012).</li>
<li>Yuan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+reprogrammed+cells+to+identify+therapy+for+respiratory+papillomatosis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Use of reprogrammed cells to identify therapy for respiratory papillomatosis.</a> N Engl J Med. 367 (13), 1220-1227 (2012).</li>
<li>Signoretti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p63+is+a+prostate+basal+cell+marker+and+is+required+for+prostate+development%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">p63 is a prostate basal cell marker and is required for prostate development.</a> Am J Pathol. 157 (6), 1769-1775 (2000).</li>
<li>Lang, S. H., Frame, F. M., Collins, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prostate cancer stem cells.</a> J Pathol. 217 (2), 299-306 (2009).</li>
<li>Ringer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+induction+of+the+p53+tumor+suppressor+protein+bridges+the+apoptotic+and+autophagic+signaling+pathways+to+regulate+cell+death+in+prostate+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">The induction of the p53 tumor suppressor protein bridges the apoptotic and autophagic signaling pathways to regulate cell death in prostate cancer cells.</a> Oncotarget. 5 (21), 10678-10691 (2014).</li>
<li>Pollock, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strigolactone+analogues+induce+apoptosis+through+activation+of+p38+and+the+stress+response+pathway+in+cancer+cell+lines+and+in+conditionally+reprogrammed+primary+prostate+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Strigolactone analogues induce apoptosis through activation of p38 and the stress response pathway in cancer cell lines and in conditionally reprogrammed primary prostate cancer cells.</a> Oncotarget. 5 (6), 1683-1698 (2014).</li>
<li>Crogliom, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26910887">Analogs of the Novel Phytohormone, Strigolactone, Trigger Apoptosis and Synergy with PARP1 Inhibitors by Inducing DNA Damage and Inhibiting DNA Repair.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Saeed, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+Drug+Testing+of+Patient-derived+Conditionally+Reprogrammed+Cells+from+Castration-resistant+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol%22%5BJournal%5D)">Comprehensive Drug Testing of Patient-derived Conditionally Reprogrammed Cells from Castration-resistant Prostate Cancer.</a> Eur Urol. , (2016).</li>
<li>Palechor-Ceron, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation+induces+diffusible+feeder+cell+factor%28s%29+that+cooperate+with+ROCK+inhibitor+to+conditionally+reprogram+and+immortalize+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Radiation induces diffusible feeder cell factor(s) that cooperate with ROCK inhibitor to conditionally reprogram and immortalize epithelial cells.</a> Am J Pathol. 183 (6), 1862-1870 (2013).</li>
<li>Coffey, A., Johnson, M. D., Berry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SpOT+the+Correct+Tissue+Every+Time+in+Multi-tissue+Blocks%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">SpOT the Correct Tissue Every Time in Multi-tissue Blocks.</a> J Vis Exp. (99), e52868(2015).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models%3A+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discov. 4 (9), 998-1013 (2014).</li>
<li>Drost, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+culture+systems+for+prostate+epithelial+and+cancer+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue.</a> Nat Protoc. 11 (2), 347-358 (2016).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

שורות תאים ראשיות הן פלטפורמה חשובה המתפתחת במהירות לחקר הסרטן. מערכת תרבות 3D תרבות מבוססת כנס תומכת הבידול של CRCs ערמונית העיקרי בתוך פרק זמן של שבועות. השיטה המסננת CRC מייצגת שיטת תפוקה חדשה, בינונית למחקר ערמונית. מודלי העכבר PDX קיימים הם זמן רב ויקר מאוד, ורבי דגימות PDX לא ניתן לגדל בתרבית, הגבלת ניסויים ביוזמת חוקר והתועלת שלהם. בנוסף, בעוד ששיעורי ההצלחה של הקמת PDX להשתנות 13 מאוד, השיטה CRC יש שיעור גבוה של הצלחה בהקמת שורות תאים <sup class="xr...

זיהוי והשימוש של טיפולים בסרטן שמותאם אנשים הם יעד מרכזי בחקר הסרטן. לאחרונה, גישות חדשות פותחו המאפשרות ביתר קל בהקמה בתרביות תאים ראשוניות, פוטנציאל לספק דרכים של שניהם זיהוי ובדיקת טיפולים אישית. לדוגמא, הערמונית מבוססת R-spondin גישת organoid 1 מאפשרת תלת ממדי (3D) culturing של תאי סרטן הערמונית נורמלים גרורתי בתוך תאי מטריקס מסחריים (למשל, Matrigel), בעוד Reprogramming המותנה של תאים (CRC) שיטה 2 שפותח בג&#39;ורג&#39;טאון, 3 מנצל תנאי תרבות 2D סטנדרטיים יותר. באופן ספציפי, השילוב של מעכבי קינאז Rho (Y-27632) ותאי מזין פיברובלסטים murine J2 מוקרן להוביל culturing בלתי מוגדר של CRCs keratinocyte 2. המתודולוגיה CRC היאמאוד חזק, עם שורות תאים ראשוניות הוקמו בהצלחה ומתוחזק ללא הגבלה זמן מהערמונית ורקמות אפיתל רגילות וממאירים רבים אחרות 3. חשוב לציין, טכנולוגית CRC שלנו מוותר עבור זיהוי המהיר של הבסיס אטיולוגי עבור papillomatosis נשימתיים חוזר אצל חולה אשר נכשל מספר הטיפולים התרופתיים קודמים. בנוסף, באמצעות CRCs נורמלי הנגזרות הגידול, זיהוי מוצלח של ה- FDA אישר תרופה, vorinostat, נעשתה תוך שבועיים מיום ביופסיה רקמות הראשונית. החולה הונח על vorinostat, וכתוצאה מכך הטיפול המוצלח של המחלה שלהם 4. בלוטת הערמונית הנורמלית מורכבת הלומינל, הבזליים ותאי נוירואנדוקריניים הנדירים 5. תאי לומינל מהווים את שכבת האפיתל העמודים של הבלוטה ולהביע לקולטן האנדרוגן (AR), כמו גם סמנים לומינל אחרים כגון cytokeratins 8 ו -18 ופרוהמדינה אנטיגן ספציפי (PSA) 6. לעומת זאת, תאי הבזליים הם נקודות מתחת לשכבת לומינל ולהביע cytokeratin 5 ו p63, אבל רמות נמוכות של AR 5. אנחנו 7, 8, 9 ואחרים 10 השתמשו בהצלחה CRCs הערמונית בחקירות רגישות לתרופה מכניסטית פרה-קליניים. עם זאת, כאשר גדל בתנאים בתרבית רקמה 2D רגיל, תאים אלה אינם לגמרי לעסוק AR איתות 10. חשוב לציין, כאשר הניח תחת הקפסולה הכליות של עכברי immunodeficient, את CRCs שהעלה אדריכלות בלוטות נורמלית ערמונית ותפקוד מציין CRCs הערמונית לשמור שושלת מחויבותם כאשר הניח סביבת מתירנית. ההתפתחות של מסנן מערכת תרבית תאים להכניס המבוססת המתואר כאן מאפשרת המהירים (2 שבועות) במבחנת בידול של CRCs ערמונית כמו ב שמעידy הביטוי המוגבר של גני מטרת AR ו AR וכן הירידה ברמות של p63. המחדיר המסנן הנמצא מכיל ממברנות פוליקרבונט (גודל נקבובי, 0.4 מיקרומטר) שיכול לתמוך culturing של בתאי יונקים. המערכת, שפותחה על, עושה שימוש CRCs ערמונית נורמלי וממאירים, 6 מנות תרבות היטב המחדירה המסנן. תרבית תאי תקשורת מותנית תאי J2 11 מושם בתקשורת ההבחנה קאמרית ערמונית התחתונה בתא העליון. הטכניקות המתוארות במסמך זה לתמוך התמיינות תאים luminal הערמונית בתוך פרק זמן 2 בשבוע, עולה בקנה אחד עם המטרות של רפואה אישית. זה היה גם הכרחי כדי לפתח מתודולוגיות המאפשרים פרופיל מולקולרי, גנטי ותאי המקיף של התרבויות. גישות לבידוד DNA, RNA וחלבון מתאי שוחרר מפני השטח המסנן פותחו יעיל לעיבוד מדגם חוזר מדויקת. פינהlly, המתודולוגיה הנדרשת להסרת המסנן כדי לאפשר הטמעה, חתך עבור H &amp; E, immunohistochemical מכתים immunofluorescent, מתואר באופן מלא.

<table><tbody><tr><td>Corning Costar Snapwell Culture מוסיף</td><td>קורנינג</td><td>3801</td><td></td></tr><tr><td>מילי-תא תרבית תאים מוסיף</td><td>Millipore</td><td>PIHP01250</td><td></td></tr><tr><td>Multiwell 6 בארות</td><td>פלקון</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>ג'לטין 0.1% במים</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7903</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי Saftey Scapel 10 להב</td><td>אינטגרה Miltex</td><td>4-510</td><td></td></tr><tr><td>אזמל סטנדרטי סטרילי 11 להב</td><td>אינטגרה Miltex</td><td>4411</td><td></td></tr><tr><td>RIPA מאגר ליזה ומיצוי</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>89900</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פלואוריד</td><td>Fishcer Scientific</td><td>S299-100</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ואנדאט</td><td>Fishcer Scientific</td><td>13721-39-6</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3483123</td><td></td></tr><tr><td>קוקטייל מעכב פרוטאז (AEBSF, אפרוטינין, בסטטין, E-64, לופפטין ופפסטין A)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>0.25% טריפסין-EDTA (1x)</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td></td></tr><tr><td>גלוטמין</td><td>תרמופישר</td><td>Scientific 25030081& נ.ב.פ;</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין סטרפטומיצין</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>F-12 Nutrient Mix Media</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>11765054</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 מעכב סלע דיהידרוכלוריד</td><td>Enzo</td><td>ALX-270-333-M025</td><td></td></tr><tr><td>הידרוקורטיזון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>PHG0315</td><td></td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>12585-014</td><td></td></tr><tr><td>רעלן כולרה</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C3012</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>15710-064</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP264550</td><td></td></tr><tr><td>טריזול ריאגנט</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>היסטוג'ל לעיבוד דגימה ( הידרוקסיאתיל אגרוז (HEA))Thermo</td> <td>Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td></td></tr><tr><td>חבישה לא דביקה</td><td>Telfa</td><td>KDL2132Z</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים</td><td>סיגמא</td><td>SIAL0167</td><td></td></tr><tr><td>HISTOSETTE II עיבוד רקמות / הטבעה קלטות</td><td>קריסטלגן</td><td>CG-M492</td><td></td></tr></tbody></table>

מסנן ראפיד הכנס מבוססת מערכת 3d תרבות התמיינות תאי ערמונית ראשית

A Rapid Filter Insert-based 3D Culture System for Primary Prostate Cell Differentiation

תאים לתכנות מחדש מותנה (CRCs) לספק שיטת קיימא עבור תרבית תאים ראשונית ואת היכולת לפתח &quot;biobanks חיים&quot; הנרחב של שורות תאים שמקורם בחולה. עבור סוגים רבים של תאי אפיתל, שונות תלת ממדים (3D) גישות התרבות תואר התומכים מדינת בדיל השתפרה. בעוד CRCs לשמור מחויבות השושלת שלהם לרקמה שממנו הם מבודדים, הם לא מצליחים לבטא רבים של סמנים בידול הקשורים רקמות ממוצא כאשר גדל תחת נורמלי שני התנאים תרבות מימדי (2D). כדי לשפר את היישום של CRCs נגזרות החולות למחקר סרטן הערמונית, פורמט תרבות 3D הוגדר המאפשר בידול תא מהיר (2 שבועות סה&quot;כ) לומינל בשני נורמלי גידולים שמקורם בתאי האפיתל ערמונית. בזאת, פורמט מבוסס כנס מסנן מתואר עבור culturing וההבחנה של שני CRCs ערמונית הנורמלי וממאירים. דהתיאור זנב של ההליכים הנדרשים לצורך איסוף תאים ועיבוד מכתים immunohistochemical ו immunofluorescent מסופקים. קולקטיבי בפורמט תרבות 3D תאר, בשילוב עם קווי CRC העיקריים, מספק בינוני חשוב גבוהה מערכת מודל תפוקה למחקר ערמונית מבוססת biospecimen.

את כנס תרבית תאי המערכת המבוססת היא הליך יחסי פשוט ומהיר להפקת תרבויות 3D של CRCs הערמונית שתומך התמיינות תאי luminal. סכמטי של המערכת מוצג (איור 1 א) המדגיש את היישום של ציפוי ג&#39;לטין על פני השטח התחתונים של להכניס המסנן. המחדיר הפוך רק עבור היישום של ג&#39;לטין. באיור 1B המסננים בכיוון המתאים עבור culturing. באמצעות תותב תא שקוף, תמונה מייצגת של תרבות CRC ערמונית 3D בריאה מוצגת (10X) (איור 2)....

כאן, אנו מציגים שיטה להקמת מערכת מהירה במבחנה התומכת בתרבות תלת מימדית ובהתמיינות לומינלית לאחר מכן של תאי אפיתל ראשוניים של הערמונית.

מסנן ראפיד הכנס מבוססת מערכת 3D תרבות התמיינות תאי ערמונית ראשית

Conditionally reprogrammed cells (CRCs) provide a sustainable method for primary cell culture and the ability to develop extensive &#34;living ...

המטרה הכללית של מערכת תרבית תלת-ממדית זו, המבוססת על מקטע מסנן עבור תאי מקור ראשוניים המופקים ממטופלים, היא לבסס מערכת מודל in vitro רלוונטית יותר מבחינה ביולוגית למחקר של סרטן הערמונית. באמצעות שימוש בתאי אדם ראשוניים, שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בביולוגיה התפתחותית של הערמונית וכן בסרטן הערמונית. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מהווה מתודולוגיית in vitro מהירה יחסית להקמה של תאי ערמונית ראשוניים מובחנים, המאפשרת גם בידוד מהיר של ביו-מולקולות כגון RNA, DNA וחלבון.הדגמה חזותית של שיטות אלו היא קריטית, שכן עיבוד התאים על גבי ה-filter insert לצורך היסטולוגיה או לאיסוף RNA וחלבונים הוא עדין ורגיש לזמן. כדי לסייע בהגבלת הדיפוזיה בין התאים בתוך קבסינת בטיחות ביולוגית, מרחו שכבה דקה של 0.1% gelatin בצדו התחתון של ה-inserts והניחו להם להתייבש. חזרו על הליך זה פעמיים נוספות.לאחר מכן, העבירו את התאים לתא הפנימי של ההכנסות (inserts) המצופות בג'לטין וגודלו אותם למשך עד שבועיים. לאחר שבועיים, העבירו את ההכנסות עם הפילטרים המגודלים ישירות לאחת מהבדיקות הבאות המתאימות המפורטות בהמשך. כדי להתחיל בהליך זה, שאבו את ה-PBS מהתא החיצוני והסירו בזהירות את ה-PBS מהתא הפנימי.ניתן לשמור את הרכיבים המעובדים לזמן קצר ב-PBS עד שהיישום יהיה מוכן להתחלה, אך אין לאפשר לממברנה להתייבש. לאחר מכן, יש להוסיף 100 µL של 0.25% Trypsin EDTA לכל תא פנימי. לאחר מכן, יש לדגור אותם למשך חמש דקות ב-37 °C.לאחר מכן, גרדו קצרה ובזהירות את התאים מפני השטח של הממברנה באמצעות פ pipette של 200 µL תוך כדי שאיבה והזרקה חוזרת. לאחר מכן, דגרו אותם למשך דקה אחת ב-37 °C. לאחר דקה אחת, הוסיפו 250 µL של מצע גידול מותנה (conditioned media) לתא הפנימי הראשון ובצעו שאיבה והזרקה חוזרת בעדינות כדי לשטוף את המסנן.לאחר העברה זו, העבירו את התאים שהושחאו לתא הסינון הסמוך המכיל את אותם תנאי מדיום וחזרו על פעולת השאיבה והפליטה (pipetting up and down). חזרו על הליך זה עבור כל אחד מהאינסרטים (inserts) של תנאי ניסוי בודד. לאחר מכן, אספו את התאים והעבירו אותם לשפופרת צנטריפוגה של 1.5 milliliter.שטפו כל תא פנימי עם 100 עד 200 µL נוספים של מצע מותנה (conditioned media) כדי לאסוף את התאים שנותרו, והוסיפו אותם לשפופרת צנטריפוגה של 1.5 mL. לאחר מכן, סובבו את התאים במיקרוצנטריפוגה בטמפרטורה של 4 °C למשך חמש דקות. לאחר מכן, שאבו את העלייה (supernatant) ושטפו את משקע התאים פעם אחת עם 1,000 µL של PBS.סבבו את התאים שוב במיקרוצנטריפוגה בטמפרטורה של 4 °C למשך חמש דקות. לאחר חמש דקות, שאבו את ה-PBS והקפיאו את הדגימה בטמפרטורה של 80- °C לשימוש עתידי. בהליך זה, הוסיפו 200 µL של guanidinium thiocyanate phenol chloroform או ריאגנט מיצוי דומה לתא הפנימי, וערבבו קצרות את התאים שעל פני השטח של הממברנה באמצעות פיפוט למעלה ולמטה.לאחר מכן, דגרו את התאים בריאגנט המיצוי למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר והשאירו את התא החיצונייבשה. לאחר מכן, שטפו את ממברנת המסנן על ידי שאיבה והזרקה (pipetting) של תמיסת המיצוי. אספו כמה שיותר מריאגנט המיצוי על ידי הטיית פלטת שש הבארות ושאיבת כל שארית נוזל.שימו לב כי המסנן עלול להתנתק מהתושב. שטפו את ממברנת המסנן במידה והיא התנתקה. לאחר מכן, אספו כמה שיותר מסוכן המיצוי ופעלו לפי הפרוטוקול של היצרן לטיהור והשבה של DNA, RNA או חלבון.יש לנהוג בזהירות בעת שטיפת התאים והמסנן ב-guanidinium thiocyanate, שכן ערבוב מוגבר עלול להוביל לאיכות RNA נמוכה. כדי לבודד חלבון מההכנסה של המסנן, יש להניח את ההכנסה של המסנן בתוך פלטת שש הבארות על קרח. לאחר מכן, יש להוסיף 10 µL של בופר ליזיס לחלבון לתא הפנימי.ערבבו וגרדו את התאים מפני השטח של הממברנה באמצעות פיפט של 20 microliter, תוך ביצוע פעולות שאיבה ודחיפה (pipetting up and down), והימנעו מיצירת בועות בבופר הליזה (lysis buffer). לאחר מכן, הדגרירו את פלטת ששת הבארים עם התוספות של המסננים על קרח למשך עשר דקות. חזרו על פעולת הגרידה ולאחר מכן שטפו את פני השטח של הממברנה עם בופר הליזה.אספו את הליזאטים (lysates) מששת התבתים (inserts) והעבירו אותם לשפופרת צנטריפוגה של 1.5 milliliter על קרח. לאחר מכן, שטפו את הממברנה הראשונה עם 10 microliters נוספים של בופר ליזיס (lysis buffer) והעבירו אותה למסנן הבא. חזרו על הליך זה עבור כל התבתים של תנאי ניסוי נתון, אספו כל תמיסת בופר ליזיס שנותרה והוסיפו אותה לשפופרת ה-1.5 milliliter.דגרו את הדגימה על קרח למשך חמש דקות נוספות. לאחר מכן, סובבו אותה במהירות מקסימלית למשך 15 דקות בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס. בסיום הפעולה, העבירו בפיפט את הליזאט לשפופרת 1.5 מילימטר נקייה.לאחר מכן, המשיכו לניתוח ריכוז החלבון או שמרו את הליזאטים בטמפרטורה של 80- °C. בהליך זה, הוסיפו 500 µL ו-1 mL של 10% NBF לתא הפנימי והחיצוני בהתאמה. דגרו אותם למשך לילה בטמפרטורה של 4 °C.ביום למחרת, שאבו NBF מהתא החיצוני והוסיפו מיליליטר אחד של ג'ל עיבוד HEA לשפופרת צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר. המיסו לאט את האגרוז במיקרוגל תוך שימוש בהספק נמוך ובפולסים חוזרים של 10 שניות עד שהאגרוז נמס. שמרו את ה-HEA באמבט חימום של 37 degrees Celsius כדי למנוע התגבשות עד למועד השימוש.בשלב הבא, הסר את ה-NBF מהתא הפנימי. מרח 25 µL של HEA מומס אל התא הפנימי והמתן עד שהאגרוז יתמצק במשך שתי עד חמש דקות. לאחר מכן, הרטב שתי רפידות ספוג להיסטולוגיה ב-10% NBF והנח רפידה אחת בקסטת הטמעה.שמירה על שלמות שכבות התאים על גבי התסנן באמצעות HistoGel היא שלב קריטי לשימור שכבת תאים שלמה לצורך חיתוך היסטולוגי. לאחר מכן, השתמש בסכין מנתח עם להב מספר 11 כדי לחרוץ את התסנן מהצד התחתון של תא התסנן הפלסטי, כך שישתחרר באופן חלקי. העבר 100-200 µL של NBF לצחנת פטרי וטבול את התסנן שהשתחרר חלקית ב-NBF.באמצעות סכין מנתחים עם להב מספר 10, לחצו בעדינות על מרכז המסנן מהחלק הפנימי של תא ההכנסה (insert chamber) כדי לשחרר לחלוטין את המסנן מגליל ההכנסה. אם חלק מהמסנן עדיין מחובר לגליל, חתכו אותו באמצעות הסכין. לאחר מכן, חתכו את המסנן המצופה ב-HEA לחצי.הניחו כל חצי של המסנן על רפידת הספוג בתוך קסטת ההיסטולוגיה שהוכנה. לאחר מכן, הוסיפו לקסטה את הספוג השני הספוג ב-10%NBF, כך שהמסנן יהיה כלוא ביניהם. לסיום, סגרו את הקסטה בנקישה.הנח את הדגימה ב-NBF והדגר אותה למשך הלילה. תמונה זו במיקרוסקופ שדה בהיר מראה שכבות תאים רב-שכבתיות על גבי הממברנה הנקבובית. מוצגות התמונות הפלואורסצנטיות הבודדות עבור הגרעינים, P63 והקולטן לאנדרוגן, כמו גם מיזוג של שלושת הסמנים הפלואורסצנטיים.לבסוף מוצגת תמונת מיזוג (overlay) של שדה בהיר ואימונופלואורסצנציה, המבססת את מיקומו של האות הפלואורסצנטי ביחס לתאים ולמסנן. כאן מוצגת תמונת חתך של תוסף המסנן שלנו, בהשוואה לשכבות האפיתל התעלתי של ערמונית שלמה. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו תוך שבועיים, כאשר בידוד סופי של התאים ותוסף המסנן או של הביומולקולה הרצויה אורך פחות מ-30 דקות אם הוא מבוצע כראוי.בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור תמיד לנקוט משנה זהירות בעבודה עם התבתי המסננת (filter inserts), כדי למנוע נזק לשכבת התאים או למסנן שמתחתיה. לאחר ביצוע הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון Western blots, מערכי RNA microarray ואנליזות פרוטאומיות, על מנת לענות על שאלות נוספות הנוגעות לאנליזה של מסלולים ביולוגיים ותאי סרטן. טכניקה זו תסייע לסלול את הדרך עבור חוקרים בתחום סרטן הערמונית לחקור טוב יותר את הביולוגיה של הערמונית ואת הבסיס לסרטן הערמונית באמצעות תאי ערמונית ראשוניים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכישו הבנה מעמיקה לגבי האופן שבו יש להקים כראוי ולשחזר תאי פרוסטטה ראשוניים מתרבית ממערכת תרבית תלת-ממדית זו.

a-rapid-filter-insert-based-3d-culture-system-for-primary-prostate

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בסרטון זה, אנו מדגימים את הטיפוח של תאי אפיתל ערמונית עכבר מבודדים באמצעות טכניקת תרבית מבוססת טבעת ג'ל מטריצה. גישה זו יכולה לספק מידע משלים על יכולת ההתמיינות של תאי אפיתל הערמונית ליצור מבנים בלוטיים תלת-ממדיים בתגובה למניפולציה גנטית או פרמקולוגית.

בדיקת אורגנואיד ערמונית: טכניקת תרבית Ex Vivo מבוססת טבעת ג'ל מטריקס לחקר יכולת ההתמיינות של תאי אפיתל הערמונית

התאמנו תוספת ממברנה מיקרו-נקבובית חדירה כדי לחקות את המיקרו-סביבה של הגידול (TME). המודל מורכב מתרבית תאים מעורבת, מאפשר יצירה פשוטה של אוכלוסיות תאים בודדות מועשרות מאוד ללא שימוש בתיוג פלואורסצנטי או מיון תאים, ומאפשר לחקור תקשורת בין-תאית בתוך ה-TME בתנאים רגילים או בתנאי עקה.

חקיין של microenvironment הגידול: שיטה פשוטה ליצירת אוכלוסיות תאים מועשרות חוקרים אינטר תקשורת

פרוטוקול זה מתאר כיצד לייצר תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE) מתאי גזע pluripotent. השיטה משתמשת בשילוב של גורמי גדילה מולקולות קטנות כדי לכוון את הבידול בתאי גזע לתוך RPE ילדותי בעוד 14 ימים ו- RPE בוגרת, פונקציונלי לאחר שלושה חודשים.

הבידול מהירה, מכוונת של תאים אפיתל הפיגמנט ברשתית מתאי גזע Pluripotent האנושי עובריים או מושרה

עכברים מהונדסים גנטית הם מודלים שימושי עבור חוקר סרטן הערמונית מנגנונים. כאן אנו מציגים פרוטוקול לזהות, לנתח אונות הערמונית ממערכת השתן העכבר, להבדיל אותם בהתבסס על היסטולוגיה, לבודד ושל תרבות את תאי הערמונית הראשית in vitro לקשרי כמו spheroids עבור ניתוחים במורד הזרם.

זיהוי ואפיון היסטולוגית, דיסקציה של האונות הערמונית עכבר במודלים תרבות חוץ גופית ספרואיד תלת-ממד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מדריך טיפול אנושי תא צורב הערמונית הראשי ולאחר מכן מציע נקודות קצה כדי להעריך פנוטיפ. זריעה, תרבות תחזוקה, התאוששות מטריקס ג'ל, כימות מורפולוגיות, הטבעה, חלוקתה, חלוקתה FFPE, כולה-הר מכתים, ויישום של מבחני מסחרי מתוארים.

הטיפול והערכה של התרבות האנושית תא צורב הערמונית ראשי

הערמונית העכבר אורגנואידים לייצג הקשר מבטיח להעריך מנגנונים המסדירים בידול. המאמר מתאר גישה משופרת להקמת אורגנואידים הערמונית, ומציג שיטות (1) לאסוף חלבון ליפוסט מאורגנואידים, ו (2) לתקן וכתמי מיקרונואידים עבור מיקרוסקופ ההרכבה המלא.

הערכת יכולת בידול של העכבר תאים אפיתל הערמונית באמצעות תרבות אורגאיד

מוצג כאן הוא פרוטוקול כדי ללמוד תגובות תרופתי ב אפיתל הערמונית אורגנואידים. אורגנואידים דומה מאוד בביולוגיה vivo וגנטיקה של החולה המטופל, מה שהופך אותם מערכות מודל אטרקטיבי. אורגנואידים הערמונית ניתן להקים מתוך prostates מודלים העכבר מהונדסים גנטית, רקמת האדם שפיר, וסרטן הערמונית מתקדם.

הערמונית תרבויות אורגאיד כמו כלים לתרגם גנוטיפים ופרופילים מוטים לתגובות תרופתי

שימוש בתאי אפיתל הערמונית העיקרי האנושי, אנו מדווחים על שיטה ביוארינקר הרומן החופשי של אפיון פונקציונלי של תאים גזע דמוי על ידי שמירת תווית מבוסס ספרואיד מבוססי. פרוטוקול צעד אחר צעד מתואר עבור BrdU, CFSE, או הרחוק האדום תיוג תא 2D; היווצרות ספרואיד תלת מימדי; זיהוי תאים מתמך בתוויות באמצעות כימיה חיסונית מדומה; ובידוד על ידי FACS.

בידוד של תאים כמו גזע מתרבויות תלת ממדיות ספרואיד

פרוטוקול זה מתאר שיטה להקמת מחסום דם-מוח אנושי (BBB) במודל מבחנה . תאי האנדותל והפריציטים נזרעים בכל צד של מסנן הכנסה (תא דם), ואסטרוציטים נזרעים בבאר התחתונה (תא המוח). המודל שאפיין שימש לניסויים בהובלת ננו-חלקיקים.

מערכת תאי תרבית משולשת המדגימה את מחסום הדם-מוח האנושי

במאמר זה, עלון מודפס תלת-ממדי שעוצב לאחרונה מוצג כמודל של תרבית משותפת ומאומת באמצעות המחקר של התקשורת הבין-תאית הפרקרינית בין תאי אנדותל וקרטינוציטים.

עלון חדשני המודפס בתלת-ממד ונועד לאפשר תרביות תאים דו-ממדיות ותלת-ממדיות פשוטות

פרוטוקול זה מספק הליך מקיף לבידוד, הרחבה והנצחה של פיברובלסטים מכריתת ערמונית רדיקלית. יתר על כן, הוא מתאר מבחנים שפותחו כדי להעריך את ההשפעות התפקודיות של דיבור צולב בין תאי פיברובלסטים-גידול, תוך ניצול הן של טיפול במדיום מותנה והן של תרבית משותפת.

בידוד, תרבית ואפיון של פיברובלסטים הקשורים לסרטן הערמונית

חקור מערכת תרבית תלת-ממדית מבוססת מסנן להתמיינות תאי ערמונית ראשית. שיטה זו מאפשרת בידוד מהיר של RNA, DNA וחלבונים למחקר סרטן הערמונית.

מסנן ראפיד הכנס מבוססת מערכת 3D תרבות התמיינות תאי ערמונית ראשית

גלה סרטונים נוספים