טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים Mesenteric הלימפה קופי מקוק

המטרה הכוללת של הליך לפרוסקופי זעיר פולשני זה היא לשפר את הערכת ההשפעות של טרנסלוקציה מיקרוביאלית ממערכת העיכול על ידי איסוף בלוטות לימפה מזנטריות וביופסיות כבד בנקודות זמן מרובות תוך שיפור רווחת בעלי החיים. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה של HIV לגבי השלכות אימונולוגיות של זיהום וטרנסלוקציה מיקרוביאלית על בלוטות הלימפה המזנטריות והכבד, והפתולוגיה של רקמות אלה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת דגימה במספר נקודות זמן במחקר עם השפעה מינימלית על החיה או על הפרמטרים המוערכים.

שיטה זו יכולה לספק דגימות קריטיות לקידום ההבנה שלנו לגבי HIV. ניתן ליישם אותו גם במודלים אחרים שבהם דלקת במערכת העיכול וטרנסלוקציה חיידקית חשובים. יבצעו את ההליך ד"ר ג'רמי סמדלי וד"ר קאסי מואטס, מנתחים וטרינריים במרכז הלאומי לחקר פרימטים בוושינגטון.

לאחר הכנת מקוק לניתוח כפי שמצוין בפרוטוקול הטקסט, כסו אותו בווילון סטרילי. לאחר מכן, בעזרת וילון מצלמה סטרילי, כסו היטב את המצלמה הדיגיטלית וחברו אותה למגדל. חבר את הסקופ הקשיח לראש המצלמה.

לאחר מכן חבר כבל אור סטרילי לטווח הקשיח וחבר אותו למקור האור. לבסוף, הרכיב צינור אינפלציה סטרילי על האינספלטור. כדי להתחיל בלפרוסקופיה, מקם להב אזמל 15 כסנטימטר עד שני סנטימטרים משמאל לטבור ובצע חתך דקירה של כ -5 מילימטר בעור המגיע לשרירי הבטן.

בעזרת היד הלא דומיננטית, הרם את דופן הבטן בצד הגולגולת של החתך. לאחר מכן בעזרת היד השנייה, הכניסו דרך החתך את קצה מחט הוורוס בזווית לכיוון ראש החיה. החזק את מחט הוורוס ליד הפיר ודחף אותה בחוזקה עד שהיא נלחצת דרך דופן הבטן וההתנגדות למחט פוחתת בחלל הבטן.

לאחר מכן חבר את הצינור של אינספלטור ה-CO2 למחט ופתח את תא העצירה כדי לשחרר את הגז לחלל הבטן. צור פנאומופריטונאום על ידי הגעה ללחץ של עד 10 עד 12 מילימטרים של כספית. כעת, כשהבטן מנופחת לחלוטין, מקם את להב האזמל 15 מעל בטן הגולגולת השמאלית, כשניים עד ארבעה סנטימטרים זנב לצלע האחרונה, ובצע חתך עור של כחמישה עד שבעה מילימטרים.

לאחר מכן, הכנס דרך החיתוך מכלול צינורית טרוקר של חמישה מילימטרים. הציגו את המכלול לעומק של סנטימטר עד שניים, וכיוון אותו לכ- 45 עד 60 מעלות באופן זנבי. לאחר מכן, בתנועה סיבובית, החלק את הצינורית קדימה והגיע לעומק של 1.5 עד שלושה סנטימטרים כדי להבריג את הצינורית לבטן.

לאחר מכן, הסר את הטרוקר. נתק את צינור האינסופלטור ממחט הוורוס ולאחר מכן, כבה את תא העצירה. חבר את הצינור לצינורית ופתח את תא העצירה כדי לשמור על פנאומופריטונאום.

לאחר שווידאת שהלחץ נשמר בהצלחה, הסר את מחט הווארוס. לאחר מכן, דרך הצינורית, הכנס את ההיקף הנוקשה לחלל הבטן. בשליטת המצלמה, העמיקו את חתך העור שנותר לאחר הסרת מחט הוורוס, חתכו את שרירי הבטן והצפק.

לבסוף, מקם את החיה עם כפות הרגליים מורמות בערך 15 עד 30 מעלות מעל הראש. כדי לאסוף ביופסיה מבלוטת הלימפה המזנטרית, הכניסו בדיקה מוצקה לחלל הבטן דרך החתך המוכן. מקם את הגשושית בין האומנטום למעי, ובתנועה עדינה דמוית גורף חשוף את המעי מהאומנטום כדי לדמיין את המזנטריה החבויה מתחת.

המשך להזיז את הגשושית מכיוון הזנב לכיוון הגולגולת כדי לדחוף את האומנטום הרחק מהשדה הניתוחי. לאחר מכן בעזרת הבדיקה, הזיזו את המעי הגס היורד לכיוון דופן הבטן. בדוק את המזנטריה עם הגשושית כדי לאתר בלוטות לימפה מזנטריות הממוקמות לאורך המעי הגס וכלי הדם המזנטריים.

לאחר זיהוי בלוטת הלימפה, החלף את הגשושית בחלל הבטן במלקחיים מחוספסים של מרילנד ותפס את המזנטריה הסמוכה לצומת. משוך את המזנטריה לכיוון החתך והסר את הסקופ מהצינורית. לאחר מכן כבה את האינספלטור והשאיר את תא העצירה של הצינורית פתוח כדי לשחרר גז מהבטן, מה שיקל על החיצוניות של המזנטריה.

לאחר מכן משוך את המזנטריה דרך החתך. אחוז במזנטריה החיצונית בעזרת מלקחיים כדי להבטיח גישה דרך החתך. משש או התבונן במזנטריה כדי לזהות את בלוטת הלימפה שאמורה להופיע כגוש מוצק יותר או כאזור אפור יותר.

לאחר מכן, בעזרת המוסטטים מעוקלים, צרו פתח של שלושה עד חמישה מילימטרים במזנטריה הסמוכה לצומת, ונתחו בבוטות כל חיבור לרקמה. במידת הצורך, קשרו את כלי הדם עם תפר מונופילמנט 4-0 שאינו נספג, ובעזרת האזמל חתכו את בלוטת הלימפה. לאחר מכן, הנח את הביופסיה במדיום RPMI 1640 על קרח.

לבסוף, שחררו את המזנטריה ונפחו את הבטן פעם נוספת כדי לאפשר משיכת הרקמה לאחור לחלל הבטן. החזר את השולחן למצב אופקי. כדי לאסוף ביופסיית כבד, הכנס צינורית מושחלת לחלל הבטן דרך החתך המשמש לאיסוף בלוטות הלימפה.

לאחר מכן בעזרת הצינורית, החלק בטווח הנוקשה המכוון לכיוון חלל הבטן הגולגולתי כדי לדמיין את הכבד. בשליטת המצלמה, הכניסו מלקחיים ביופסיה דרך הצינורית ששימשה בעבר לניפוח חלל הבטן. מקם את המלקחיים מתחת לשולי אונת הכבד המיועדים כך שהלסתות שלהם פונות לרקמה, ופתח את המלקחיים ומאפשר לשוליים ליפול לתוך הלסתות.

לאחר התאמת מיקומם, סגור את המלקחיים ושמור על הלחץ למשך כ-20 עד 30 שניות. לאחר מכן הסר את הדגימה על ידי משיכת המלקחיים בעדינות דרך הצינורית. הנח את הביופסיה במדיום RPMI על קרח.

לבסוף, וודאו שלא נצפה דימום באתר הביופסיה, וסגרו את החתכים. מוצגים כאן תפוקות תאיות המתקבלות מבלוטות לימפה מזנטריות וביופסיות כבד שנאספו משתי נקבות בריאות בשתי נקודות זמן שונות. כצפוי, ביופסיות בלוטות הלימפה הניבו מספר גבוה משמעותית של תאים מבודדים בהשוואה לביופסיות הכבד.

ללא קשר לרקמת המקור, למעלה מ-85% מהתאים המבודדים היו ברי קיימא. לאחר מכן נותחו דגימות התאים המבודדות עבור אוכלוסיות CD45+לויקוציטים ו-CD45+CD3+לימפוציטים. לבלוטות הלימפה המזנטריות היו שכיחויות גבוהות יותר של CD45+לויקוציטים ו-CD3+לימפוציטים בהשוואה לתאים שמקורם בכבד.

אפיון מפורט של האוכלוסיות המבודדות הראה כי בלוטות הלימפה המזנטריות הכילו פרופורציות גבוהות משמעותית של תאי CD3+T ותאי CD4+T, כמו גם מספר גבוה של תאי CD8+T. לעומת זאת, הכבד הועשר משמעותית ב-CD14+לויקוציטים. שני האיברים הראו שפע דומה של תאי CD20+B.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 30 עד 40 דקות. בעלי חיים בדרך כלל מתאוששים מהרדמה, פעילים ואוכלים תוך כמה שעות, והחתכים כל כך קטנים שקשה לראות את צד הכלוב. כאשר מנסים הליך זה, חשוב לשמור על בעלי חיים במצב גוף שיקל על ההצלחה.

שומן מזנטרי משמעותי יכול להוות מכשול מאתגר מכיוון שהוא מטשטש צמתים ומגביר את הטיגון והדימום. לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון פלבוטומיה, ביופסיה של בלוטות הלימפה ההיקפיות, אנדוסקופיה של מערכת העיכול העליונה והתחתונה וביופסיה של פי הטבעת על מנת להעריך את התגובות החיסוניות המערכתיות והריריות, מצב החיידקים ומחסומי האפיתל, כמו גם עומסים ויראליים. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים במעבדה שלנו לחקור אוכלוסיות מיקרוביאליות בדלקת לאורך ברקמות מקוק שבעבר היו זמינות רק על ידי נקרופסיה.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול ב-HIV, שכן טרנסלוקציה מיקרוביאלית היא גורם עיקרי לדלקת המניעה פתוגנזה של HIV. הערכה זו באופן סדרתי יכולה לספק מטרות פוטנציאליות ולאפשר הערכה של התערבויות טיפוליות. אל תשכח שעבודה עם קופי מקוק נגועים בווירוס עלולה להיות מסוכנת ביותר.

אמצעי זהירות כגון הכשרה מתאימה לסיכונים ביולוגיים כולל וירוס הרפס מקוק 1, ציוד מגן אישי מתאים, ערכות נשיכה ושריטות ומעקב רפואי מתאים, צריכים להיות זמינים.