Name: טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים Mesenteric הלימפה קופי מקוק (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 6 s
Description: למד טכניקת לפרוסקופיה מינימלית לדגימה סדרתית של צומת כבדים ולימפה מזנטרית בקופי מקוק. שיטה זו משפרת רווחת בעלי חיים ומאפשרת מחקר מתמשך של השפעות זיהום HIV על מערכת החיסון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי P51OD010425 מספר מענק NIH.

<ol><li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cells%3A+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14 (3), 141-153 (2014).</li>
<li>Jacobs, J. P., Braun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+and+genetic+gardening+of+the+intestinal+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune and genetic gardening of the intestinal microbiome.</a> FEBS Lett. 588 (22), 4102-4111 (2014).</li>
<li>Macpherson, A. J., Smith, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+lymph+nodes+at+the+center+of+immune+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Mesenteric lymph nodes at the center of immune anatomy.</a> J Exp Med. 203 (3), 497-500 (2006).</li>
<li>Vaikunthanathan, T., Safinia, N., Lombardi, G., Lechler, R. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26835593">Microbiota, immunity and the liver.</a> Immunol Lett. 171, 36-49 (2016).</li>
<li>Macpherson, A. J., Heikenwalder, M., Ganal-Vonarburg, S. C. <a target="_blank" href="http://www.cell.com/cell-host-microbe/abstract/S1931-3128(16)30442-5">The Liver at the Nexus of Host-Microbial Interactions.</a> Cell Host Microbe. 20 (5), 561-571 (2016).</li>
<li>Shuai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+immunity+in+the+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adaptive immunity in the liver.</a> Cell Mol Immunol. 13 (3), 354-368 (2016).</li>
<li>Chun, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+HIV+in+gut-associated+lymphoid+tissue+despite+long-term+antiretroviral+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Persistence of HIV in gut-associated lymphoid tissue despite long-term antiretroviral therapy.</a> J Infect Dis. 197 (5), 714-720 (2008).</li>
<li>Horiike, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+nodes+harbor+viral+reservoirs+that+cause+rebound+of+plasma+viremia+in+SIV-infected+macaques+upon+cessation+of+combined+antiretroviral+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Lymph nodes harbor viral reservoirs that cause rebound of plasma viremia in SIV-infected macaques upon cessation of combined antiretroviral therapy.</a> Virology. 423 (2), 107-118 (2012).</li>
<li>North, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+sanctuaries+during+highly+active+antiretroviral+therapy+in+a+nonhuman+primate+model+for+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Viral sanctuaries during highly active antiretroviral therapy in a nonhuman primate model for AIDS.</a> J Virol. 84 (6), 2913-2922 (2010).</li>
<li>Xu, H., Wang, X., Lackner, A. A., Veazey, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8+down-regulation+and+functional+impairment+of+SIV-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+in+lymphoid+and+mucosal+tissues+during+SIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">CD8 down-regulation and functional impairment of SIV-specific cytotoxic T lymphocytes in lymphoid and mucosal tissues during SIV infection.</a> J Leukoc Biol. 93 (6), 943-950 (2013).</li>
<li>Zhang, L., Dailey, P. J., Gettie, A., Blanchard, J., Ho, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Liver+Is+a+Major+Organ+for+Clearing+Simian+Immunodeficiency+Virus+in+Rhesus+Monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">The Liver Is a Major Organ for Clearing Simian Immunodeficiency Virus in Rhesus Monkeys.</a> Journal of Virology. 76 (10), 5271-5273 (2002).</li>
<li>Dillon, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+altered+intestinal+mucosal+microbiome+in+HIV-1+infection+is+associated+with+mucosal+and+systemic+immune+activation+and+endotoxemia%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">An altered intestinal mucosal microbiome in HIV-1 infection is associated with mucosal and systemic immune activation and endotoxemia.</a> Mucosal Immunol. 7 (4), 983-994 (2014).</li>
<li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+levels+of+bacterial+DNA+correlate+with+immune+activation+and+the+magnitude+of+immune+restoration+in+persons+with+antiretroviral-treated+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Plasma levels of bacterial DNA correlate with immune activation and the magnitude of immune restoration in persons with antiretroviral-treated HIV infection.</a> J Infect Dis. 199 (8), 1177-1185 (2009).</li>
<li>Sandler, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+levels+of+soluble+CD14+independently+predict+mortality+in+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Plasma levels of soluble CD14 independently predict mortality in HIV infection.</a> J Infect Dis. 203 (6), 780-790 (2011).</li>
<li>Klase, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysbiotic+bacteria+translocate+in+progressive+SIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dysbiotic bacteria translocate in progressive SIV infection.</a> Mucosal Immunol. 8 (5), 1009-1020 (2015).</li>
<li>Evans, T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SIV-induced+Translocation+of+Bacterial+Products+in+the+Liver+Mobilizes+Myeloid+Dendritic+and+Natural+Killer+Cells+Associated+With+Liver+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">SIV-induced Translocation of Bacterial Products in the Liver Mobilizes Myeloid Dendritic and Natural Killer Cells Associated With Liver Damage.</a> J Infect Dis. 213 (3), 361-369 (2016).</li>
<li>Fish, R., Danneman, P. J., Brown, M., Karas, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFish%2C+R+%22Anesthesia+and+Analgesia+in+Laboratory+Animals.+2+edn%22">Anesthesia and Analgesia in Laboratory Animals. 2 edn</a>. , Elsevier. (2011).</li>
<li>Flecknell, P. A. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/book/9780123693761">Laboratory Animal Anaesthesia. 3 edn</a>. , Academic Press. (2009).</li>
<li>Tranquilli, W. J., Thurnom, J. C., Grimm, K. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTranquilli%2C+WJ+%22Lumb+and+Jones%27+Veterinary+Anesthesia+and+Analgesia%22">Lumb and Jones' Veterinary Anesthesia and Analgesia</a>. , Blackwell Publishing. (2007).</li>
<li>Ford, R. B., Mazzaferro, E. M. <a target="_blank" href="https://elsevier.ca/product.jsp?isbn=9781437707984">Kirk and Bistner's Handbook of Veterinary Procedures and Emergency Treatment. 9 edn</a>. , Elsevier. (2012).</li>
<li>Fransson, B. A., Mayhew, P. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFransson%2C+BA+%22Small+Animal+Laparoscopy+and+Thoracoscopy%22">Small Animal Laparoscopy and Thoracoscopy</a>. , Wiley Blackwell. (2015).</li>
<li>Hensley-McBain, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Fecal+Microbial+Transplantation+on+Microbiome+and+Immunity+in+Simian+Immunodeficiency+Virus-Infected+Macaques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Effects of Fecal Microbial Transplantation on Microbiome and Immunity in Simian Immunodeficiency Virus-Infected Macaques.</a> J Virol. 90 (10), 4981-4989 (2016).</li>
<li>Smedley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laparoscopic+Technique+for+Serial+Collection+of+Para-Colonic%2C+Left+Colic%2C+and+Inferior+Mesenteric+Lymph+Nodes+in+Macaques%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Laparoscopic Technique for Serial Collection of Para-Colonic, Left Colic, and Inferior Mesenteric Lymph Nodes in Macaques.</a> PLoS One. 11 (6), 0157535(2016).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-chain+fatty+acids+induce+both+effector+and+regulatory+T+cells+by+suppression+of+histone+deacetylases+and+regulation+of+the+mTOR-S6K+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Short-chain fatty acids induce both effector and regulatory T cells by suppression of histone deacetylases and regulation of the mTOR-S6K pathway.</a> Mucosal Immunol. 8 (1), 80-93 (2015).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, H. W., Ulevitch, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD14%3A+cell+surface+receptor+and+differentiation+marker%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Today%22%5BJournal%5D)">CD14: cell surface receptor and differentiation marker.</a> Immunol Today. 14 (3), 121-125 (1993).</li>
<li>Brenchley, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+translocation+is+a+cause+of+systemic+immune+activation+in+chronic+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Microbial translocation is a cause of systemic immune activation in chronic HIV infection.</a> Nat Med. 12 (12), 1365-1371 (2006).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים שום אינטרסים כלכליים מתחרים.

<html> הנה, אנחנו מדגימים טכניקה פולשנית עבור אוסף סדרה של MLN ו ביופסיות כבדות כי הייתה שיעור הצלחה 100% בחיות אלו ואחרות לא המתוארים במחקר זה. יתר על כן, שימוש בטכניקה זו על אותו החיים ברחבי זמן לא היה קשור בשום תופעות לוואי. ואכן, לא חלו סיבוכים הנובעים משימוש בטכניקה זו בקבוצות אחרות של בעלי חיים שהיו נגועים ב- SIV, הקופי / וירוס הכשל החיסוני האנושי (שיב), או וירוס זיקה (נתונים שלא פורסמו). בדומה לכך, הניתוח הזה הוכיח את יעילותו גם אצל בעלי חיים שעברו ניתוח בטן גדול בעבר, והן חיות thrombocytopenic (נתונים שלא פורסמו). הראינו כי דגימות אלה ניתן לאסוף באמצעות אותם שני פורטים על ידי היפוך מיקום המצלמה בעת מעבר MLN בכבד הימנעות צורך חתכים נוספים. גורמים המשפיעים על האוסף של MLN דווחו בעבר 13. class = &quot;jove_content&quot;&gt; עד ארבע קולקציות של 3 MLN ו 3 ביופסיות כבדות כל בוצע לאורך זמן על בעלי חיים בודדים בלי סיבוכים, שינויים בשערי ההצלחה, או שינויים בנתונים שנאספו. בנוסף, טכניקת אוסף MLN / כבד לפרוסקופיים זה כבר משולב בהצלחה עם הליכים אחרים כגון אוסף של LNs פריפריה, ואת עליונות אנדוסקופית נמוכות ביופסיות GI, שאיבת מוח עצם, אוסף נוזל השדרתי, ו venipuncture באותו אירוע ההרדמה המאפשר הערכה מקיפה של וירולוגית ותגובות חיסוניות באופן סדרתי (נתונים שלא פורסמו). ההליך כולו בדרך כלל לוקח 30 - 45 דקות כדי להשלים מושגת באמצעות שני ~ 0.5 חתכים ס&quot;מ. אצל בעלי חיים שמנים, ייתכן שיהיה צורך לבצע חתך גדול יותר (~ 1 - 1.5 ס&quot;מ) כדי לאחזר MLN דרך ולהצריך זמן נוסף כדי להשלים. בעלי חיים עם שומן mesenteric נרחב קרובות דורשים ניסיון משמעותי דifferentiate MLN מן השומן שמסביב. MLN נמצא בדרך כלל לאורך כלי דם mesenteric ו נראה נפוצה יותר ליד נקודות סניף הכלי. היבט קריטי של הטכניקה הזו הוא שהיא דורשת MLN הנבחרת יש ניידות מספיק לפדר להיות exteriorized דרך החתך בבטן. כתוצאה מכך, הטכניקה הזו לא ניתן להשתמש כדי לאסוף MLN קרוב לשורש לפדר. בשל ההגדלה, זה לפעמים יותר קל לזהות MLN עם המצלמה, ואוחזים בסמיכות לבית MLN יכול לעזור באיתור וזיהוי הצומת לאחר שהוא exteriorized. תנוחת Trendelenburg לא תמיד תידרש לאיסוף MLN, ואם MLN ניתן לאחזר בקלות ללא שימוש בעמדת Trendelenburg זה יכול לעשות ביופסיות כבדות יותר קלה כפי שהוא ימנע את האיברים מן ההסטה cranially. לפעמים, אחרי מיקום עמדת Trendelenburg, הכבד מוסט למעלה נגד הסרעפת וחייבת<html> לטפל בעדינות חזרה למקומו לפני לאוסף ביופסיה. כמיקום היציאה לאיסוף MLN הוא שמאלה, ביופסיות כבדות בדרך כלל נלקחות מן האונות בכבד המדיאלי לרוחב שמאל שמאל כפי שהם קרובים הצינורית. MLN נאסף ביופסיות כבדות ספקו תשואות תא מספיק עבור מגוון רחב של זרם ניתוחים והראו כדאיויות גבוהות של התאים שנאספו. הנה, התאים היו מוכתמים עבור ניתוח התזרים cytometric של אוכלוסיות לויקוציטים ו לימפוציטים, ואת ההבדלים עיקריים בין שני האיברים חיסוניים חשובים האלה לובנו. לדוגמה, MLN היו מועשר עבור תאים מסוג CD4 + T לעומת הכבד, בשל החשיבות של MLN כנקודות מרכזי לאיסוף והפצת המערכת החיסונית אדפטיבית, כמו גם את החשיבות של CD4 + T לניהול דלקתיות תגובות tolerogenic אל המילייה אנטיגנים שמקורם צריכה תזונתית ומיקרואורגניזמים GI-התושבs = &quot;Xref&quot;&gt; 24. עם זאת, הכבד הועשר משמעותי עבור CD14 + לויקוציטים בהשוואת mln. CD14 מתבטא בעיקר על מונוציטים מקרופאגים ומהווה מרכיב מרכזי של מתחם קולטן עבור lipopolysaccharide חיידקים (LPS) 25. ואכן, ריכוזי פלזמה מוגברים CD14 המסיס הקשורים טרנסלוקציה חיידקי הפעלה חיסונית ב HIV ודלקות SIV פתוגניים 26. לפיכך, תדירות גבוהה יותר של CD14 + לויקוציטים בכבד תוצאה מסתברת מנטל חיידקי יותר האיבר הזה בהשוואה mln. הנה, אנחנו מדגימים טכניקה כירורגית מהירה זעירה-פולשנית, אוסף סדרה של MLN ו ביופסיות כבדות רק באמצעות שני חתכים קטנים לכניסה לפרוסקופי כי לא הובילה לשום תוצאות שליליות. דגימות אלה משמשות ערוץ שימושי להעריך Virological אימונולוגית, מפתח, ואת תהליכי מיקרוביולוגים כי לקחת PLACE ב MLN והכבד, נבדלות וייחודיות מחסינות מערכתית. באופן דומה, ביופסיות כבד הן קריטיות עבור הערכה ארוכת טווח של תופעות של HIV / SIV, טיפולים תרופתיים, חיידקים translocated, אשר לעתים קרובות לשלב כדי לגרום נזק כבד משמעותית 16. יתרה מזאת, מאחר MLN והכבד הם איברים חיסוניים חשופים חיידקים במערכת עיכול, את היכולת להעריך חסינות באיברים אלה על פני הזמן מספק פלטפורמה מצוינת להבנת התפקיד כי Microbiome משחק בשמירה על הומאוסטזיס החיסון של פונדקאי. יחדיו, הערכה של הכבד MLN הנה בעלת חשיבות רבה בהקשר של חיסון efficacies הטיפולית, אישור למאגר ויראלי SIV, וחסינות רירית בכלל. היכולת לאסוף דגימות אלה באמצעות גישה פולשנית כלומר יש פחות סיכון של דלקת הקשורים בהליך מ קיים עם טכניקות שפורסמו כרגע ופחות השפעה על פיזיולוגית החיות. ב פוture, נוכל להעריך את הפוטנציאל לשלב את אוסף MLN וכבד עם האוסף של טחול באמצעות אותם שני מקומות הנמל כדי לאפשר דגימה של עוד חלק חשוב וייחודי של מערכת החיסון כי הוכח לשחק תפקיד משמעותי מספר מודלי מחלה.

העיכול (GI) בדרך היא המשטח הרירי הגדול ביותר בגוף, והוא חשוף מספר עצום של אנטיגנים שמקורם במזון, פתוגנים, וקהילות חיידקים endosymbiotic המכונה כמו Microbiome 1, 2. בלוטות לימפה Mesenteric (MLN) קו העיכול והם אתר המנהלת של תפקוד מערכת החיסון לקידום תגובות דלקתיות או tolerogenic כלפי אנטיגנים מגוונים אלה. הארגון הפיזי של MLN יוצר מערכת ממודרת שיכול לתת מענה אנטיגנים מקומי בלי לעורר 3 תגובות מערכתיות. באופן דומה, הדם מתנקז העיכול אל הכבד דרך וריד השער לפני החזרה במחזור, ובכך נחשף חיידקים ומוצרי חיידקים אשר translocated מן העיכול לתוך שכבת הרירית המיוחדת ונכנס הדם 4. הכבד מתפקד גם בתור איבר משני הלימפהיש nd מספר רב של תאי מערכת החיסון, כולל מקרופאגים מיוחדים, כדי להסיר חיידקים translocated 5, 6. לפיכך, MLN ואת הכבד הם האיברים החיסון הראשוני חשוף commensal וחיידקים פתוגניים מ העיכול, כמו גם את המילייה של אנטיגנים ממקורות אחרים, מה שהופך אותם ייחודית וחשובה מבחינה אימונולוגית. MLN אתרים קריטי להערכה של השפעות וירולוגית ו אימונולוגית של נגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) או וירוס הכשל החיסוני הקופי פתוגניים (SIV) זיהום, והם קרוב לוודאי מעורבים הפצת מוקדם של SIV בעקבות האתגר intrarectal. גוט-מזוהה רקמת הלימפה ידוע להיות אתר מרכזי של שכפול HIV מתמיד, למרות שליטה אפקטיבית של viremia ידי טיפולים אנטירטרוויראלי המודרני (ART) 7. במודלי זיהום SIV, MLN הוכח להיות מאגרים חשובים של נגיף רדום והוא רשאילהיות המאגר 8 העיקרי, 9. הכבד הוא גם חשוב זיהום lentiviral כפי שמעיד ההצטברות של תאים ספציפיים SIV CD8 + T ב הכבד של קופי במהלך הזיהום חריף SIV 10. יתר על כן, זה הוא האיבר העיקרי אחראי ניקוי הווירוס ממחזור 11. HIV וזיהומים SIV המשויכים החיידקים במערכת העיכול שינו, שיבשו שלמות האפיתל GI, והגדילה טרנסלוקציה של חיידקים ומוצרי חיידקים מהמעי אל הפריפריה במחזור 12, 13. תהליכים אלה הקשורים הפעלה חיסונית מקומית מערכתית, וגדילה לתחלואה ולתמותה ואנשים נגועים באיידס 14. בשנת זיהום SIV, חיידקים translocated נצפו ב MLN 15, ואילו הצטברות של מיקרופוןמוצרי robial בכבד הוכח לגרום לדלקת פגיעה באיבר 16. לפיכך, בהקשר של HIV ודלקות SIV, את MLN והכבד יכול להיות אינפורמטיבי מאוד להבנת תהליכים דלקתיים מונע על ידי חיידקים במערכת העיכול-תושב. כאן, אנו מציגים טכניקה לפרוסקופית זעיר-פולשנית, דגימה סדרתי של MLN והכבד אצל פרימטים לא אנושיים (NHPs). אנו להפגין ביצועים מוצלחים של טכניקה זו על שני קופי רזוס נקבה בריא (RMS), דגימת כל חיה פעמים, עם 160 ימים בין כל ניתוח. אנחנו הולכים על מנת להשתמש בדגימות הללו כדי להעריך ולהשוות אוכלוסיות לויקוציטים ו הלימפוציטים מפתח בתוך כל איבר באמצעות cytometry זרימה, ולהפגין נתונים עקביים ומתמשך בין שתי נקודות הזמן.

<table><tbody><tr><td>דמעות מלאכותיות חומר סיכה משחת עיניים</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>97-890-8152</td><td></td></tr><tr><td>טיפול מועדף כלורהקסידין 2% פילינג</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-842-6153</td><td></td></tr><tr><td>וודקו אלכוהול, איזופרופיל 70%</td> <td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-869-6434</td><td></td></tr><tr><td>ודקו וטדין סקראב</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-869-6772</td><td></td></tr><tr><td>הוספירה Lactated Ringer's 250 מ"ל</td><td>פטרסון וטרינרי</td><td>07-800-9325</td><td></td></tr><tr><td>וילון כירורגי לפרוטומיה למתבגרים</td><td>Medline</td><td>DYNJP3004</td><td></td></tr><tr><td>גישה 40 ליטר Insufflator</td><td>Dyonics</td><td>7205832</td><td></td></tr><tr><td>300XL קסנון מקור אור</td><td>Dyonics</td><td>7206084</td><td></td></tr><tr><td>460P 3 &ndash; מצלמה דיגיטלית CCD עם ראש</td><td>Dyonics</td><td>72200086</td><td></td></tr><tr><td>וילון מצלמה אוניברסלי, 7 אינץ' x 96 אינץ'</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>ESS-6920</td><td></td></tr><tr><td>מדריך אור אוניברסלי,</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td> 7.5 רגל <td>ארה"ב. OU225</td><td></td></tr><tr><td>Insufflazor Tubing</td><td>Endoscopy שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>TM-102</td><td></td></tr><tr><td>היקף קשיח רב תכליתי, 2.7 מ"מ x 187.5 מ"מ,</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td> 0 מעלות <td>B30-0007-00</td><td></td></tr><tr><td>בחינה ונדן מגן עבור היקף 2.7 מ"מ x 187.5 מ"מ עם פקק אחד קבוע</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>B10-0025-00</td><td></td></tr><tr><td>היקף קשיח, 5 מ"מ x 300 מ"מ</td><td>שירותי</td> <td>תמיכה באנדוסקופיהB30-0071-00</td><td></td></tr><tr><td>מחט ורס, 2 מ"מ x 80 מ"מ&nbsp;</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>8302.08</td><td></td></tr><tr><td>בדיקה מוצקה עם סימונים, 5 מ"מ x 320 מ"מ</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>8383.661</td><td></td></tr><tr><td>מרילנד אחיזה וניתוח מלקחיים עם ידית מחגר כפולה, 3.5 מ"מ x 240 מ"מ&nbsp; &nbsp;</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>8390.2054</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים ביופסיה, 3.5 מ"מ x 310 מ"מ</td><td>R. Wolf</td><td>8391.4063</td><td></td></tr><tr><td>צינורית הברגה מפלסטיק עם יציאת Insufflator, 3.5 מ"מ x 60 מ"מ</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>8903.072</td><td></td></tr><tr><td>צינורית הברגה מפלסטיק עם יציאת Insufflator, 5.5 מ"מ x 60 מ"מ</td><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>8919.333</td><td></td></tr><tr><td>אנדוסקופיה טרוקר עם קצה קהה</td><td> שירותי תמיכה</td><td>8903.101</td><td></td></tr><tr><td>שירותי תמיכה באנדוסקופיה</td><td>טרוקר עם קצה פירמידלי</td><td>8903.121</td><td></td></tr><tr><td>CO2</td><td>Airgas</td><td>CD USPE</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH30027FS</td><td>עם L-גלוטמין</td></tr><tr><td>RNAlater פתרון ייצוב</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TM דרגת מחקר</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>5401119001</td><td>תמיסת קולגנס זמינה מסחרית</td></tr><tr><td>Dnase I מלבלב בקר</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>70 ומיקרו; מסנני תאים</td><td>m מורגנוויל סיינטיפיק</td><td>CSS0200</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל מזרק</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינורות צנטריפוגה חרוטיים</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>SH3007003</td><td></td></tr><tr><td>5 מ"ל צינורות פוליסטירן עגולים תחתונים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-959A</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>SH3025601</td><td></td></tr><tr><td>LIVE / DEAD Aqua ערכת כתמי תאים מתים הניתנת לתיקון</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>L34957</td><td>אמין כתם תאים מתים</td></tr><tr><td>CD45-PerCP (שיבוט D058-1283)</td> <td>BD Biosciences</td><td>558411</td><td></td></tr><tr><td>PE-CF594 עכבר אנטי-Hu CD3 (שיבוט SP34-2)</td> <td>BD Biosciences</td><td>562406</td><td></td></tr><tr><td>BV605 עכבר אנטי-Hu CD4 (שיבוט OKT4)</td> <td>Biolegend</td><td>317438</td><td></td></tr><tr><td>APC-H7 עכבר אנטי-Hu CD8 (שיבוט SK1)</td><td>BD Biosciences</td><td>560179</td><td></td></tr><tr><td>PE-CY5 עכבר אנטי-Hu CD20 (שיבוט 2H7)</td><td>BD Biosciences</td><td>555624</td><td></td></tr><tr><td>BV786 עכבר Anti-Hu CD14 (שיבוט M5E2)</td><td>BD Biosciences</td><td>563698</td><td></td></tr><tr><td>16% PARAFORMALDEHYDE AQ SOLUTN</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-980-487</td><td></td></tr><tr><td>LSR II Flow Cytometer</td><td>BD</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים mesenteric הלימפה קופי מקוק

Laparoscopic Technique for Serial Collection of Liver and Mesenteric Lymph Nodes in Macaques

בלוטות הלימפה mesenteric (MLN) ואת הכבד חשופים לחיידקים ומוצרים חיידקים ממערכת העיכול (GI), מה שהופך אותם ייחודית אימונולוגית. מערכת העיכול ואת MLN הקשורים הן באתרי התרבות הנגיף בשלב מוקדם וירוס הכשל החיסוני האנושי (HIV) זיהום ואת MLN אתרים המאגר חשוב להניח כי הנמל תאים נגועים רדום גם לאחר טיפול תרופתי ממושך (ART). הכבד הוכח לשחק תפקיד משמעותי תגובה חיסונית lentiviruses ומופיע לשחק תפקיד משמעותי אישור של וירוס ממחזור. הפרימאטים הלא-אנושיים (NHP) מודלים ל- HIV תסמונת הכשל החיסוני הנרכש (איידס) מחקה היבטים אלה של הידבקות ב- HIV ודגימה האורך סדרתי של האתרים העיקריים של שכפול נגיפי ואת התגובה החיסונית קשורה במודל זה יעזור להבהיר אירועים קריטיים זיהום, בפתוגנזה , ואת ההשפעה של אסטרטגיות התערבות שונות על אירועים אלה. currאף אוזן גרון שפורסם טכניקות לדגום בכבד MLN יחד לערב ניתוח גדול ו / או necropsy, אשר מגביל את היכולת לחקור אתרים חשובים אלה באופן סדרתי באותה חיה. תיארנו בעבר בטכניקה לפרוסקופית לאיסוף mln. כאן, אנו מתארים טכניקה לפרוסקופית זעירה-פולשנית, דגימה אורכת סדרה של כבד MLN דרך אותו בשני מיקומי יציאת נדרש לאיסוף mln. השימוש באותו שתי יציאות ממזער את ההשפעה על החיות כמו שום חתכים נוספים נדרשים. טכניקה זו יכולה לשמש עם תדר דגימה גדל לעומת ניתוח בטן גדול ומפחיתה הפוטנציאל לסיבוכים כירורגיים הקשורים לתגובות דלקתיות מקומיות מערכתיות שעלולות לסבך פרשנות של תוצאות. יש הליך זה פוטנציאל להקל מחקרים שכללו דגמים NHP תוך שיפור רווחת בעלי החיים.

שיטות מפורטות עיבוד של MLN שנאסף בגישה לפרוסקופית, כמו גם תשואות הסלולר, ותדרים לויקוציטים איברים אלה דווחו בעבר 13. איור 1 מציג נתוני תשואות כדאי הסלולר השוואת MLN ו ביופסיות כבדות נאספים בשתי נקודות זמן בנפרד 160 ימים משני מנהלים אזוריים נקבה בריאות באמצעות טכניקה לפרוסקופית זה. מצאנו כי התשואה הסלולר מן MLN היה גבוה משמעותית מן הכבד (P = 0.0021), עם ממוצע של 33.5 x 10 6 ו 6.74 x 10 6 תאים שהושג, בהתאמה. מכתים וניתוח תא המלח ידי cytometry הזרימה עולה כי&gt; 90% של תאים מבודדים איברים הן היו קיימא. באמצעות זרימת cytometry, אנו הערכנו ומשווים את השפע לויקוציטים הלימפוציטים MLN והכבד. ערכת gating נציג עבור הכבד מוצגת <strong&gt; איור 2, שבו אנו מגודרים ראשונים על תאים בודדים להוציא אגרגטים, ואחריו מבחר של תאי קיימא רק, אז בחירה של CD45 + תאים, ולבסוף CD3 + תאים. מתוך אוכלוסיית CD3 +, בדקנו שכיחותם של CD4 + ו- CD8 + T תאים, בעוד אנו הערכנו שכיחותם של CD14 + ו- CD20 + תאים מן האוכלוסיות CD3-. תזרים נציג cytometry חלק מראה CD45 + ו CD3 + אוכלוסיות מן MLN וכבד הוא בחיות בבית היום 0 ויום 160 מוצג באיור 3, בעוד איור 4 מציג שכיחותם לויקוציטים ו הלימפוציטים עבור שתי הדגימות של שתי החיות. MLN הראה משמעותי שכיחותם גבוהה של CD45 + תאים מאשר בכבד (בממוצע 76.9% ו 7.66% של תאי קיימא, בהתאמה, P = 0.0002). באופן לא מפתיע, MLN הראה פרופורציות גבוהות משמעותי של תאי CD3 + T (P0; 0.0001) ו- CD4 + T תאים (P = 0.0004). מנגד, הכבד הועשר משמעותית עבור CD14 + לויקוציטים בהשוואה MLN (P = 0.0036). MLN הראה ממוצע גבוה של תאי CD8 + T, אבל זה לא היה משמעותי. באופן מפתיע, עבור שתי החיות האלה הן האיברים הפגינו שכיחותם דומה של תאי CD20 + B. התשואות ואת שכיחותם הסלולר של תת לויקוציטים ו הלימפוציטים שונה MLN במחקר זה אשר שדווחו בעבר ערכים 23. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig1.jpg" /> איור 1. תשואה סלולר סה&quot;כ (למעלה) ואת כדאיות התא (למטה) מן סדרתי MLN נאסף כבד ביופסיות. MLN הראה משמעותי בתשואות תא גבוהות מזה של הכבד. עם זאת, שני סוגי מדגם סיפק תאים בשפע ניתוחים במורד הזרם. כדאיויות תא, הנמדדות על ידי הזרימה cytometrically באמצעות כתם אמין תא מת fixable, הראה כי סוגים מדגמים הוא בדרך כלל הניבו&gt; כדאיויות תא 90% לאחר ניתוק רקמה. ברי שגיאה מייצגים סטיית התקן בין דגימות. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig2.jpg" /> איור 2. נציגי cytometry זרימת אסטרטגית Gating. ראשית, תאים מצטברים נכללו, ואחריו מבחר של תאי קיימא רק לאחר מכתים באמצעות כתם אמין תא מת fixable. הבא, לויקוציטים CD45 + נבחרו, ואחריו מבחר של תאי CD3 + T. מתוך האוכלוסייה CD3 +, CD4 + ו- CD8 + T תאים נותחו. מתוך CD3 - אוכלוסייה, CD14 + ו- CD20 + תאים נותחו. תי<html> אסטרטגית gating ים גם שמשה עבור mln. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig3.jpg" /> איור 3. מגרשים cytometry זרימה מן MLN והכבד של שתי חיות Longitudinally. MLN ודגימות כבדות נאספו בנפרד 160 ימים הם חיות. (א). MLN CD45 + תאים (לויקוציטים); (B) הכבד CD45 + תאים (לויקוציטים); (ג) MLN + CD3 + תאים (תאי T); (ד) כבד CD3 + תאים (תאי T). הן אצל בעלי החיים, את MLN הראה פרופורציות גבוהות של CD45 + ו CD3 + תאים לעומת הכבד. מעבר זמן, התדרים של אוכלוסיות אלה היו דומים בשתי החיות.s / ftp_upload / 55,617 / 55617fig3large.jpg&quot; target = &#39;_ blank&#39;&gt; אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/55617/55617fig4.jpg" /> איור 4. תדרים של CD45 + תאים (משמאל) ליקוציט שונה לימפוציטים subpopulations (מימין) מול 23 דגימה בודדת. MLNs מוצג תדר גדול המשמעותי של CD45 +, CD3 +, ו CD4 + תאים, בעוד הכבד הראה תדרים גדולים יותר באופן משמעותי של לויקוציטים CD14 +, הוכיח את הפונקציות הייחודיות של כל איבר. ברי שגיאה מייצגים סטיית התקן בין דגימות. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55617/55617fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

כאן, אנו מתארים טכניקה לפרוסקופית זעיר-פולשנית, דגימה סדרתי של הכבד וקשרי הלימפה mesenteric (MLN) ב קופי המאפשר תדר הדגימה גדל, ומפחית פוטנציאל לסיבוכים כירורגיים בהשוואה ביצוע פיום.

טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים Mesenteric הלימפה קופי מקוק

The mesenteric lymph nodes (MLN) and the liver are exposed to microbes and microbial products from the gastrointestinal (GI) tract, making them ...

המטרה הכללית של הליך לפרוסקופי זעיר-פולשני זה היא לשפר את הערכת ההשפעות של translocation מיקרוביאלי ממסכת מערכת העיכול על ידי איסוף קשרי לימפה מזנטריים וביופסיות של כבד במספר נקודות זמן, תוך שיפור רווחת בעלי החיים. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום הביולוגיה של HIV בנוגע להשלכות אימונולוגיות של זיהום ושל translocation מיקרוביאלי על קשרי הלימפה המזנטריים ועל הכבד, ועל הפתולוגיה של רקמות אלו. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת דגימה במספר נקודות זמן במהלך מחקר, עם השפעה מינימלית על בעל החיים או על הפרמטרים הנבדקים.שיטה זו יכולה לספק דגימות קריטיות להעמקת הבנתנו לגבי HIV. ניתן להשתמש בה גם במודלים אחרים שבהם דלקת במערכת העיכול (GI inflammation) ותעתוק מיקרוביאלי (microbial translocation) הם גורמים חשובים. את הפרוצדורה יבצעו ד"ר Jeremy Smedley וד"ר Cassie Moats, מנתחים וטרינריים במרכז הלאומי למחקר פרימטים בוואשิงטון (Washington National Primate Research Center).לאחר הכנת המקאק לניתוח כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט, כסו אותו בסדין סטרילי מחורר. לאחר מכן, בעזרת כיסוי מצלמה סטרילי, כסו היטב את המצלמה הדיגיטלית וחברו אותה למגדל. חברו את האנדוסקופ הקשיח לראש המצלמה.לאחר מכן, חברו כבל תאורה סטרילי לסקופ הקשיח וחברו אותו למקור האור. לבסוף, הרכיבו צינור ניפוח סטרילי על מכשיר הניפוח (insufflator). כדי להתחיל בלפרוסקופיה, מקמו להב סכין 15 בערך מילימטר אחד עד שניים משמאל לטבור, ובצעו חתך דקיר (stab incision) של כ-5 מילימטר בעור, המגיע עד לשרירי הבטן.ביד הבלתי דומיננטית, הרימו את דופן הבטן בצד הקרניאלי של החתך. לאחר מכן, באמצעות היד השנייה, הכניסו דרך החתך את קצה מחט וורס (varus needle) בזווית לכיוון ראש החיה. החזיקו את מחט הוורס בגוף המחט ודחפו אותה בחוזקה עד שתישמע נקישה בעקבות מעבר דופן הבטן וההתנגדות למחט תפסיד בתוך חלל הבטן.לאחר מכן, חברו את צינור מכשיר ה-CO2 insufflator למחט ופתחו את הברז כדי לשחרר את הגז אל חלל הבטן. צרו pneumoperitoneum על ידי הגעה ללחץ של 10 עד 12 millimeters of mercury. כעת, כאשר הבטן מנופחת לחלוטין, מקמו את להב הסכין מספר 15 מעל הבטן הקרניאלית השמאלית, כ-2 עד 4 סנטימטרים קודאלית לצלע האחרונה, ובצעו חתך עורי של כ-5 עד 7 מילימטרים.בשלב הבא, הכניסו דרך החתך מכלול קנולה של טרוקר בקוטר חמישה מילימטרים. הכניסו את המכלול לעומק של one to two centimeters, תוך כיוונו בזווית של כ-45 עד 60 מעלות לכיוון caudomedially. לאחר מכן, בתנועה סיבובית, החליקו את הקנולה קדימה עד לעומק של 1.5 עד three centimeters כדי להבריג את הקנולה אל תוך הבטן.לאחר מכן, הוצא את הטרוקר. נתק את צינור המנשף (insufflator) מהמחט של ה-varus, ולאחר מכן סגור את הברז. חבר את הצינור לקנולה ופתח את הברז כדי לשמור על הפניומופריטונאום (pneumoperitoneum).לאחר שווידאו כי הלחץ נשמר בהצלחה, הוציאו את מחט הוורוס. לאחר מכן, דרך הקנולה, הכניסו את הסקופ הקשיח אל חלל הבטן. תחת בקרה של המצלמה, הגדילו את חיתוך העור שנותר לאחר הוצאת מחט הוורוס, תוך חיתוך דרך שרירי הבטן והפריטונאום.לבסוף, מקם את בעל החיים כך שהרגליים מורמות בזווית של כ-15 עד 30 מעלות מעל הראש. כדי לאסוף ביופסיה מקשרי הלימפה המזנטריים (mesenteric lymph node), הכנס Probe מוצק לחלל הבטן דרך החתך שהוכן. מקם את ה-Probe בין האומנטום (omentum) לבין המעי, ובבתנועה עדינה דמוית מיתת, הפר את המעי מהאומנטום כדי לחשוף את המזנטריום (mesentery) המוסתר מתחתיו.המשיכו להזיז את הפרוב מהכיוון הזנבי (caudal) לכיוון הגבתי (cranial) כדי לדחוק את האומנטום הרחק משדה הניתוח. לאחר מכן, בעזרת הפרוב, הזיזו את המעי הגס היורד לכיוון דופן הבטן. בחנו את המזנטרה בעזרת הפרוב כדי לאתר קשרי לימפה מזנטרליים הממוקמים לאורך המעי הגס והכלי הדם המזנטרליים.לאחר זיהוי קשרי הלימפה, החליפו את הפרובה בחלל הבטן בפינצטת Maryland עם גלגל שיניים (ratcheted forceps) ותפסו את הגרידסום (mesentery) הסמוך לקשר. משכו את הגרידסום לכיוון החתך והוציאו את האנדוסקופ מהקנולה. לאחר מכן, כבו את מכשיר הניפוח (insufflator) והשאירו את ברז הקנולה פתוח לשחרור הגז מהבטן, דבר שיקל על הוצאת הגרידסום אל מחוץ לגוף.לאחר מכן, משכו את קרום הבטן (mesentery) דרך החתך. אחזו את קרום הבטן שהוצא החוצה באמצעות פינצטה כדי להבטיח גישה דרך החתך. גששו או בחנו את קרום הבטן כדי לזהות את קשריף הלימפה, שצריך להופיע כבליטה קשיחה יותר או כאזור אפרפר.בשלב הבא, בעזרת תפסני המוסטט מעוקלבים, צרו פתח של שלושה עד חמישה מילימטרים במזנטריום הסמוך לקשרית, ובצעו דיסקציה קהה של כל ההיקשרויות לרקמה. במידת הצורך, קשרו את כלי הדם באמצעות תפר מונופילמנטי לא-ספיג במידה 4-0, ובבעזרת הסקאלפל, בצעו דיסקציה של קשרית הלימפה. לאחר מכן, העבירו את הביופסיה למצע RPMI 1640 על קרח.לבסוף, שחררו את הקרום (mesentery) ונפחו שוב את הבטן כדי לאפשר את החזרת הרקמה אל חלל הבטן. החזירו את השולחן למצב אופקי. כדי לבצע ביופסיה של הכבד, הכניסו קנולה בעלת הברגה אל חלל הבטן דרך החתך ששימש לאיסוף קשרי הלימפה.לאחר מכן, באמצעות הקנולה, החלק פנימה את הסקופ הקשיח לכיוון חלל הבטן הקרניאלי כדי להדגים את הכבד. תחת בקרת המצלמה, הכנס מלקחי ביופסיה דרך הקנולה ששימשה קודם לכן לנפנוף של חלל הבטן. מקם את המלקחים מתחת לשולי האונה המיועדת של הכבד כך שלסנאיהם יפנו אל הרקמה, ופתח את המלקחים כדי לאפשר לשולי הרקמה ליפול אל תוך הסנאים.לאחר כיוון מיקומן, סגרו את הפינצטה והפעילו לחץ למשך כ-20 עד 30 שניות. לאחר מכן, הוציאו את הדגימה על ידי משיכה עדינה של הפינצטה דרך הקנולה. העבירו את הביופסיה למצע RPMI על קרח.לבסוף, ודאו שלא נצפה דימום באתר הביופסיה, וסגרו את החתכים. מוצגים כאן תנובאי תאים שהתקבלו מביופסיה של קשרי לימפה מזנטריים ומביופסיית כבד שנאספו משתי נקבות בריאות של מקאקים בשתי נקודות זמן שונות. כצפוי, ביופסיית קשרי הלימפה הניבה מספר גבוה משמעותית של תאים מבודדים בהשוואה לביופסיית הכבד.בלאגש למקור הרקמה, מעל 85% מהתאים המבודדים היו חיוניים. לאחר מכן, דגימות התאים המבודדים נותחו כדי לבחון אוכלוסיות של לוקוציטים CD45+ ולימפוציטים CD45+CD3+. בקשרי לבלוטות הלימפה המזנטריאליות, נמצאה שכיחות גבוהה יותר של לוקוציטים CD45+ ולימפוציטים CD3+ בהשוואה לתאים שהופקו מהכבד.אפיון מפורט של האוכלוסיות המבודדות הראה כי קשרי הלימפה המזנטריים הכילו פרופורציות גבוהות משמעותית של תאי CD3+T ותאי CD4+T, וכן מספר מוגבר של תאי CD8+T. לעומת זאת, הכבד היה עשיר באופן משמעותי בלוקוציטים מסוג CD14+. בשני האיברים נצפתה שכיחות דומה של תאי CD20+B.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן לבצע אותה ב-30 עד 40 דקות. בעלי החיים בדרך כלל מתעוררים מההרדמה, הופכים לפעילים ואוכלים בתוך מספר שעות, והחתכים כה קטנים עד שקשה להבחין בהם בבדיקה במכלול. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לשמור על בעלי החיים במצב גופני שיסייע להצלחת הפעולה.שומן מזוסטרום משמעותי עלול להוות מכשול מאתגר, שכן הוא מסתיר קשרי לימפה ומגביר את הנטייה לפריצויות ולדימומים. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון פלבוטומיה, ביופסיה של קשרי לימפה פריפריים, אנדוסקופיה של דרכי העיכול העליונות והתחתונות וביופסיה רקטלית, וזאת במטרה להעריך תגובות חיסוניות סיסטמיות ורירואיות, מצב מיקרובים ומחסומים אפיתליאליים, וכן עומסים ויראליים. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים במעבדתנו לבחון באופן לונגיטודי אוכלוסיות מיקרוביאליות בדלקת ברקמות של מקאקים, שהיו זמינות בעבר רק באמצעות נKרופסיה.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול ב-HIV, שכן תעברות מיקרוביאלית היא גורם מרכזי לדלקת המניעה את הפתוגנזה של HIV. הערכה של תהליך זה באופן סדרתי עשויה לספק מטרות פוטנציאליות ולאפשר הערכה של התערבויות טיפוליות. זכרו כי עבודה עם קופים מסוג macaques נגועים בכל נגיף עשויה להיות מסוכנת ביותר.יש להבטיח נקיטת אמצעי זהירות, כגון הכשרה מתאימה למפגעים ביולוגים הכוללת macaques herpesvirus 1, ציוד מגן אישי מתאים, ערכות טיפול לנשיכות ושריטות ומעקב רפואי הולם.

laparoscopic-technique-for-serial-collection-liver-mesenteric-lymph

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

כדי לעקוב אחר ההתקדמות של תגובה חיסונית לאורך זמן בתוך העכבר זאת, בלוטות הלימפה ניתן להסיר ברצף על ידי ניתוח. כאן, אנו מתארים כיצד טכניקה זו ניתן לבצע.

צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד הכירורגי של בלוטת הלימפה המתנקזת מפשעתית מדגם עכבר. חתך באזור הבטן מספק גישה לבלוטת הלימפה המפשעה, אשר נקטף בניתוח. בלוטת הלימפה השקופה שנקטפה יכולה לשמש למחקרים אימונולוגיים.

קצירת בלוטת לימפה מנקזת מפשעתית ממודל מורין

סרטון זה מדגים טכניקה לצינור צינור הלימפה המזנטרי בחולדות. שיטה זו מאפשרת גישה ישירה לכל נפח הרכיבים הקיימים בנוזל הלימפה.

קנולציה של צינור לימפה מזנטרי במודל חולדה לקצירת נוזל לימפה

כאן אנו מתארים טכניקה לקנולציה של צינור הלימפה המזנטרי בחולדות המאפשרת כימות של הובלת שומנים ותרופות דרך מערכת הלימפה לאחר מתן המעי. ניתן להתאים את הטכניקה להערכת ריכוזי לימפה מזנטרית ו/או הובלה של נוזלים, תאי חיסון, פפטידים, חלבונים ומולקולות ליפופיליות.

לימפה Duct cannulated עכברוש דגם mesenteric: בקשה להערכה של המעיים הלימפה תרופות תחבורה

אנו מציגים הליך כירורגי לצנתור תא המטען של הלימפה במעי בחזירים יילודים כדי לאסוף כמויות גדולות של רכיבי חילוף חומרים של שומנים מלימפה זורמת.

צנתור לטווח ארוך של טרונק לימפה במעי וגביית הלימפה חזירים ילודים

לויקוציטים שוליים-כבדיים מציגים מאפיינים ייחודיים ותפקודים אימונולוגיים מובהקים בהשוואה לאוכלוסיות לויקוציטים אחרות. כאן אנו מתארים שיטה לקטיף סלקטיבי של אוכלוסיית תאי הכבד הספציפית הזו, באמצעות זלוף מאולץ של הכבד של חולדות או עכברים. לויקוציטים שוליים בכבד נראים קריטיים בקביעת הרגישות למחלות וגרורות הקשורות לכבד.

קציר סלקטיבי של לויקוציטים Marginating-כבדית

השימוש בשחזור תלת מימד וסימולציות וירטואליות בתכנון טרום ניתוחי לכריתת כבד מייצג התקדמות משמעותית באונקולוגיה כירורגית. טכניקת 3D-LAST (גישת מיקום תלת מימדית עם חוט המשי) של הצוות שלנו מאפשרת הסרת גידול בטוחה, יעילה ומדויקת עם ניווט מעשי תוך ניתוחי ומבטיחה אימוץ רפואי רחב.

גישת מיקום תלת מימדית עם כריתת סגמנט לפרוסקופית מונחית חוט משי לגידול בכבד

פרוטוקול זה מתאר הליך הישרדות עבור לימפאדנקטומיה מזנטרית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב, בכל אחת מארבע תחנות לאורך שרשרת בלוטות הלימפה המזנטריות. הליך זה ניתן להתאמה כדי לאפשר הפרעה סלקטיבית בתקשורת הלימפה עם המעי הגס הדיסטלי, המעי הגס הפרוקסימלי ו/או המעי הדק.

כריתת לימפאדנקטומיה מזנטרית של עכברים לשיבוש סלקטיבי בתקשורת לימפה עם מערכת העיכול הספציפית לאזור

פרוטוקול ניסויי זה מתאר מודל עכברוש מחובר לצינור לימפה כבד, המאפשר הערכה ישירה וכמותית של ניקוז לימפה וכלי דם בכבד. המודל מאפשר דגימה סימולטנית של לימפה כבדית ודם מערכתית כדי לחקור העברת כבד, מטבוליזם ואיתות חיסוני, ותומך במחקרים של פרמקוקינטיקה של תרופות וביולוגיה ספציפית לכבד.

מודל עכברים מקיף להערכת מסלולי העברת כבד באמצעות דגימת לימפה וכלי דם בו-זמנית

שתלי שוליים, כגון כבד שומני, שתלי מתורמים מבוגרים, או כבדים הוחזרו לאחר מוות לבבי (DCD) לסבול אחסון קונבנציונלי, קר סטטי רק בצורה גרועה. פיתחנו מודל חדשני של vivo לשעבר זלוף כבד subnormothermic לשימור, הערכה, ותיקון של שתלי כבד שוליים לפני ההשתלה.

טכניקה של Subnormothermic<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הכבד זלוף לאחסון, ההערכה, ותיקון שתלי כבד שולי

למד טכניקת לפרוסקופיה מינימלית לדגימה סדרתית של צומת כבדים ולימפה מזנטרית בקופי מקוק. שיטה זו משפרת רווחת בעלי חיים ומאפשרת מחקר מתמשך של השפעות זיהום HIV על מערכת החיסון.

טכניקה לפרוסקופית עבור אוסף סידורי של צומת כבדים Mesenteric הלימפה קופי מקוק

גלה סרטונים נוספים