Name: חקר את הפוטנציאל של תא גזע Mesenchymal גיליון על הפיתוח של קרצינומה Hepatocellular In Vivo (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: חקור את השפעת תאי גזע מזנכימליים על התפתחות קרצינומה הפטוצלולרית באמצעות טכנולוגיית גיליון תאים במודל עכברוש עירום. שיטה זו מאפשרת הערכת טיפולים אנטי-סרטניים ביעילות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצה להודות הצוות של ניתוח ניסיוני, חיות מעבדה המכללה לרפואה, אוניברסיטת המלך סעוד, שיתוף פעולה, תמיכה-במיוחד Almukhayzim חוסיין, הישאם Aloudah. המחברים גם רוצה להכיר את הצוות המדיה באוניברסיטת המלך סעוד סל ישראל אריאל להכנת חזותית את החומר-במיוחד Muath סל ר'נאם, רעות קרן אלינוי קסוטו.

הפרוטוקול מנחים את טיפול בבעלי חיים של הוועדה האתית של אוניברסיטת המלך סעוד. ניתוחים, הרדמה, תרופות אחרות בשימוש בבעלי חיים המאושרים על ידי הוועדה האתית של אוניברסיטת המלך סעוד. כל עבודה ניסויית מתבצע על ידי צוות מיומן כראוי.
1. תא גליון בנייה
<ol><li>מעיל המנות תרבות (מנות תרבות טמפרטורה מגיב 3.5 ס מ) עם סרום שור עוברית (FBS) מדולל ולהבטיח כדי לכסות את כל השטח של המנה. הערה: שלב זה הוא חשוב עבור הניתוק של הגיליון תא מאז זה תומך את הצמיחה של התאים טפט ומונע צבירת התא.</li>
	<li>דגירה הכלים במשך 24 שעות ביממה ב 37 מעלות צלזיוס באווירה humidified, המכילה 5% CO2 ו- 95% אוויר.</li>
	<li>להסיר את עודף FBS כלים מצופים ולאפשר את הכלים לייבוש בטמפרטורת החדר (RT) במשך לפחות שעה.</li>
	<li>להכין את המתלים שלושה תאים: תאים6 HepG2 עונה 1 פרק 10 עונה 1 פרק 106 HepG2 תאים עם BMMSCs, עונה 1 פרק 106 HepG2 תאים עם UCMSCs (ביחס של 4:1 גם BMMSCs וגם UCMSCs).</li>
	<li>זרע ההשעיה תאים מתאים על כל מנה עם תוויות.</li>
	<li>להשעות כל התאים במדיום תרבות DMEM, בתוספת 10% FBS ו 1% פניצילין/סטרפטומיצין.</li>
	<li>דגירה התאים ב 37 מעלות צלזיוס באווירה humidified, המכילה 5% CO2 ו- 95% אוויר.</li>
</ol>2. תא גליון התנתקות
<ol><li>ב- 100% תא הנהרות, לקחת את הכלים מתוך החממה 37 º C.</li>
	<li>דגירה המנה גיליון תא HepG2 עבור h 1-RT, בעוד המקננת על HepG2/BMMSC ומנות HepG2/UCMSC תא גיליון 30-40 דקות ב- 20 ° C באווירה humidified, המכילה 5% CO2 ו- 95% אוויר. הערה: הגיליון תא זני רק HepG2 שברירי; להקטין את הטמפרטורה עד 20 ° C גורם נזקים למבנה של הגיליון.</li>
</ol>3. ביצוע הליך כירורגי
הערה: במהלך זמן הדגירה עבור הניתוק גיליון תא, תתחילי בטיפול בבעלי חיים.
<ol><li>
הוראות הכנה של אזור הניתוח
	<ol>
<li>לנהל את כל הניתוחים באזור נפרד סטרילי בתוך המעבדה, כגון ברדס, זרימה שכבתית ארון או חדר ניתוח אספטי. להבטיח כי כל המשטחים של אזור הניתוח שאינו נקבובי, אטום, עמידה sanitizable.</li>
		<li>ללבוש ציוד מגן מתאים, כולל חלוק, כפפות, מסכות של כיסויי הראש ואת הנעל.</li>
		<li>שימוש כירורגית כלי זה הם סטיריליים ונקייה (via autoclaving; גזע רווי בלחצים גבוהים) בתחילתו של הניתוח.</li>
		<li>לשנות כפפות בין חולדות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הכנה של החיה לניתוח
	<ol>
<li>השתמש חולדות עירום 8 ל 12-בת.</li>
		<li>צור בזריקות הרדמה על חולדות.<ol>
<li>כדי להכין את הפתרון הרדמה, חריגות קטמין-השירותים הווטרינריים, לערבב 2 מ"ל של קטמין, 1 מ"ל של חריגות השירותים הווטרינריים (על ריכוז של 20 מ"ג/מ"ל) ו- 1 מ ל תמיסת סטרילית הפיזיולוגיות (למשל, 0.9% נתרן כלורי) בבקבוקון אוסף סרום 10-mL סטרילי, לנער היטב לפני השתמש.</li>
			<li>כדי להחיל הרדמה, להזריק 0.2 מ"ל של הפתרון קטמין-חריגות השירותים הווטרינריים לכל 100 גרם של משקל הגוף של העכברוש intraperitoneally. הערה: המינון הכולל של הפתרון הוא 100 מ ג/ק ג של קטמין ו- 10 מ"ג/ק"ג של חריגות השירותים הווטרינריים.</li>
		</ol>
</li>
		<li>הסר העפר גלוי/פסולת באתר כירורגית.</li>
		<li>בדוק את עומק הרדמה על ידי בוחן את רפלקס הנסיגה פדלים (צביטה כרית כף הרגל בשתי הרגליים האחוריות). הערה: אם בלחץ כרית כף הרגל גורם לתגובה, חזור במינון של 0.05 גרם/100 גרם (כ כל 30 דקות) ולאחר מכן בדוק את עומק הרדמה.</li>
		<li>לחטא באזור הניתוח עם שיפשופים בשני שלבים מאת povidone-יוד/אלכוהול איזופרופיל.</li>
		<li>מכסים את העכברוש עם תלוי סטרילי כדי למנוע זיהום של החתך.</li>
		<li>להחדיר את החולדות subcutaneously הבופרנורפין (0.01 - 0.05 מ"ג/ק"ג)8 לפני קבלת את החתך.</li>
		<li>באמצעות אזמל סטרילי, להפוך 7 - ל ס מ-10 לחתוך בין פריטי מעטפת השרירים שמתחת כדי לחשוף את הכבד.<ol>
<li>הפרד את שריר הבטן מן העור עם הקצה האחורי השטוח של האזמל.</li>
			<li>בזהירות לדקור לינאה אלבה באמצעות אזמל ולהרחיב גזירה במספריים חדים.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. השתלת גיליון תא
הערה: השתלת גיליון תא מתבצע על הכבד.
<ol><li>לאסוף את הגיליון תא המנה תרבות.<ol>
<li>טפח בעדינות את המנה תרבות מעל הספסל כדי לנתק את הסדין מפני-השטח.</li>
		<li>הפרד את הגיליון תא ממשטח של המנה על ידי גירוד קצה הסדין במעגל חצי באמצעות טיפ פיפטה סטרילי.</li>
		<li>הסר בעדינות את המדיום כולו מתוך קערה תרבות.</li>
		<li>להבטיח הגיליון שלם ללא נזק; אחרת, זה לא יכול להיות בשימוש (איור 1). הערה: ניתן להבחין הסדינים שנוצר ישירות באמצעות העין.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להכין את קרום סטרילי (נייר סינון) כדי לקצור את הגיליון תא מתוך קערה.<ol>
<li>ראשית, משרים את הקרום עם תמיסת מלח. לאחר מכן, הסר את תמיסת המלח עודף עם כרית כותנה סטרילי.</li>
		<li>הצב קרום רטובה מעל הסדין התא, תוך הימנעות רוחביים בועות אוויר בין הקרום ואת הסדין תא.</li>
		<li>הוסף מספר טיפות של תמיסת מלח מעל הקרום ואת הסדין תא כדי לאסוף אותם יותר קל. הערה: כדי למנוע את שבירת הגיליון תא, לא להשתמש תמיסת מלח קר והרם את הקרום ואת הסדין תא עם מלקחיים.</li>
		<li>השאר הקרום לכמה שניות להבטיח כי הגיליון תא מחובר כראוי למוח ולאחר מכן לאסוף אותו.</li>
	</ol>
</li>
	<li>היכונו הכבד השתלת גיליון תא.<ol>
<li>ודא כי השטח הכבד הוא יבש על ידי בעדינות טפיחות עם כרית כותנה סטרילי.</li>
		<li>בעזרת מלקחיים סטרילי, הצב את הקרום עם הסדין תא מעל אונת הכבד של החולדה יחיד.</li>
		<li>הוסף מספר טיפות של תמיסת מלח סטרילית ולהחיל לחץ עדין על קרום כדי לנתק את הגיליון תא ממנו.</li>
		<li>המתן 5 דקות לפני הסרת בזהירות את הקרום. הערה: פעולה זו מתבצעת על מנת להבטיח שהגיליון תא מחובר כראוי אל הכבד.</li>
		<li>לבסוף סוגרים את השרירים המשמשים כבסיס, העור החתכים בתפרים ניילון 5-0.</li>
		<li>לחטא את האזור ניתוח עם povidone יוד. הערה: איור 2 מציג תרשים של ההליך השתלת תאי גליון על הכבד של עכברוש עירום.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. לאחר הניתוח טיפול
<ol><li>מיד לאחר הניתוח, בית העכברוש בנפרד כדי להימנע קניבליזם או חנק, ולנטר אותה באופן קבוע (לפחות כל 15 דקות) עד שזה המודעים והבלתי מודעים, מהיותו באופן מלא.</li>
	<li>לאחר מכן, להעריך את החולדות מדי יום עבור 5-14 d, לפחות 5 d וכאב לאחר הניתוח, כדי להבטיח שלא יהיו שום סיבוכים. במהלך המבדק יומי, ודא מהפעולות הבאות.<ol>
<li>הפצע סגור, התפרים שלמים, בלי להיות הדוקה יתר על המידה.</li>
		<li>ישנם סימנים של זיהום באזור הניתוח, כגון חום, עודף הפרשות נפיחות או מוגלתי.</li>
		<li>ישנם סימנים הקשורים לכאב, כגון ירידה בצריכת מזון ומים, ירידה במשקל, התייבשות, העור להקים אוהל או נשימה מהירה, פתח את הפה. כדי לשלוט מתון עד חמור כאב לאחר הניתוח, אם בכלל, להזריק החולדות subcutaneously הבופרנורפין (0.01 - 0.05 מ"ג/ק"ג) כל 6-8 h9 מינימום של 48-72 h במשככי.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. ניתוח של האזור המושתלים
<ol><li>חודש אחד לאחר ההשתלה, scarifice החולדה ולאסוף את האזור המושתלים היסטולוגית וניתוח immunohistochemical.</li>
</ol>

<ol><li>Marra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+targets+and+oxidative+stress+biomarkers+in+hepatocellular+carcinoma%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Molecular targets and oxidative stress biomarkers in hepatocellular carcinoma: an overview.</a> Journal of Translational Medicine. 9, 171(2011).</li>
<li>Yamada, K. M., Cukierman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+tissue+morphogenesis+and+cancer+in+3D%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D.</a> Cell. 130 (4), 601-610 (2007).</li>
<li>Kushida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decrease+in+culture+temperature+releases+monolayer+endothelial+cell+sheets+together+with+deposited+fibronectin+matrix+from+temperature-responsive+culture+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">Decrease in culture temperature releases monolayer endothelial cell sheets together with deposited fibronectin matrix from temperature-responsive culture surfaces.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 45 (4), 355-362 (1999).</li>
<li>Okano, T., Yamada, N., Sakai, H., Sakurai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+recovery+system+for+cultured+cells+using+plasma-treated+polystyrene+dishes+grafted+with+poly+%28N-isopropylacrylamide%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly (N-isopropylacrylamide).</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 27 (10), 1243-1251 (1993).</li>
<li>Chamberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+mesenchymal+stem+cells%3A+their+phenotype%2C+differentiation+capacity%2C+immunological+features%2C+and+potential+for+homing%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).</li>
<li>Waterman, R. S., Tomchuck, S. L., Henkle, S. L., Betancourt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mesenchymal+stem+cell+%28MSC%29+paradigm%3A+polarization+into+a+pro-inflammatory+MSC1+or+an+Immunosuppressive+MSC2+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A new mesenchymal stem cell (MSC) paradigm: polarization into a pro-inflammatory MSC1 or an Immunosuppressive MSC2 phenotype.</a> PLoS One. 5 (4), e10088(2010).</li>
<li>Waterman, R. S., Henkle, S. L., Betancourt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+1+%28MSC1%29-based+therapy+attenuates+tumor+growth+whereas+MSC2-treatment+promotes+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell 1 (MSC1)-based therapy attenuates tumor growth whereas MSC2-treatment promotes tumor growth and metastasis.</a> PLoS One. 7 (9), e45590(2012).</li>
<li>Curtin, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+buprenorphine+in+a+postoperative+pain+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Evaluation of buprenorphine in a postoperative pain model in rats.</a> Comparative Medicine. 59 (1), 60-71 (2009).</li>
<li>Nowland, M. H. Guidelines on Anesthesia and Analgesia in Rats - ULAM Guidelines and SOPs - Michigan Medicine Confluence. , 
 <a target="_blank" href="https://wiki.med.umich.edu/display/ULAMGSOP/Guidelines+on+Anesthesia+and+Analgesia+in+Rats">https://wiki.med.umich.edu/display/ULAMGSOP/Guidelines+on+Anesthesia+and+Analgesia+in+Rats</a> (2017).</li>
<li>Alshareeda, A. T., Sakaguchi, K., Abumaree, M., Mohd Zin, N. K., Shimizu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+cell+sheet+technique+on+the+development+of+hepatocellular+carcinoma+in+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The potential of cell sheet technique on the development of hepatocellular carcinoma in rat models.</a> PLoS One. 12 (8), e0184004(2017).</li>
<li>Russo, J., Russo, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlas+and+histologic+classification+of+tumors+of+the+rat+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Atlas and histologic classification of tumors of the rat mammary gland.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 5 (2), 187-200 (2000).</li>
<li>Lin, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+and+limitations+of+genetically+modified+mouse+models+in+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Applications and limitations of genetically modified mouse models in drug discovery and development.</a> Current Drug Metabolism. 9 (5), 419-438 (2008).</li>
<li>Driscoll, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preclinical+new+drug+research+program+of+the+National+Cancer+Institute%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+Reports%22%5BJournal%5D)">The preclinical new drug research program of the National Cancer Institute.</a> Cancer Treatment Reports. 68 (1), 63-76 (1984).</li>
<li>Suzuki, R., Aruga, A., Kobayashi, H., Yamato, M., Yamamoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+in+vivo+cancer+model+using+cell+sheet+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a novel in vivo cancer model using cell sheet engineering.</a> Anticancer Research. 34 (9), 4747-4754 (2014).</li>
<li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+cell+sheet+technique+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Reports%22%5BJournal%5D)">Application of the cell sheet technique in tissue engineering.</a> Biomedical Reports. 3 (6), 749-757 (2015).</li>
<li>Matsuura, K., Haraguchi, Y., Shimizu, T., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sheet+transplantation+for+heart+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Cell sheet transplantation for heart tissue repair.</a> Journal of Controlled Release. 169 (3), 336-340 (2013).</li>
<li>Matsuura, K., Shimizu, T., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+the+development+of+bioengineered+human+three-dimensional+vascularized+cardiac+tissue+using+cell+sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Toward the development of bioengineered human three-dimensional vascularized cardiac tissue using cell sheet technology.</a> International Heart Journal. 55 (1), 1-7 (2014).</li>
<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+evidence+that+tumors+are+angiogenesis+dependent%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent?</a> Journal of the National Cancer Institute. 82 (1), 4-6 (1990).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

כמות נרחבת של המחקר מוקדש להתפתחות נאותה ויוו פרה במודל חיה הדומה סרטן אנושיים. כיום, הגישות העיקריים המשמשים ליצירת מודלים בעלי חיים סרטן כרוך השתלת הנדסה גנטית ותא11. מודלים מהונדס גנטית הם כלים טובים עבור זיהוי ואימות של גנים היעד, כמו גם להבין את המנגנונים המולקולריים שבבסיס רעילות תחת השפעת סמים. לעומת זאת, מודל זה מזוהה עם כמה מגבלות; למשל, השינוי של גן מסוים לא תמיד התוצאה הצפויה פנוטיפ12. הגישה השתלת תאים נפוץ יותר כדי לגרום לסרטן בבעלי חיים, זה כרוך ההזרקה...

HCC הוא סרטן ראשוני של הכבד, קשורה באופן משמעותי עם פרוגנוזה גרועה. מדי שנה, כמעט חצי מיליון חולים חדשים מאובחנים עם HCC, המייצג 85% של סרטן הכבד בחולים ברחבי העולם1. Hepatocarcinogenesis אינה מחלה אחת-טופס; ליתר דיוק, זה אוסף של מחלות בעלי תכונות שונות histopathological ולשינויים גנטיים ולא גנומית, בנוסף מגוון תוצאות prognostic1. לכן, האתגרים העיקריים בהתפתחות של אסטרטגיית טיפולית יעילה עבור HCC הן את הידע מוגבל לביולוגיה HCC וחוסר מודל ניסיוני מתאימים בעלי חיים שיכולים לעזור להבין זו מחלה מורכבת. אין ויוו במודל חיה המחקה סרטן אנושי הוא הכרחי עבור בחירת המועמד גנים וזיהוי סמנים prognostic/ניבוי ערבו אינדוקציה סרטן, כמו גם על חקירת גורמים שונים שעשויים להשפיע על סרטן תגובות לסוכנים טיפולית.
מחקרים במבחנה סרטן משויכות עדיין מגבלות הגדולות. זה בשל העובדה כי התאים הסרטניים לאבד תכונות רבות שלהם ויוו כאשר נשמר בתרבות. השינויים שמתרחשים תאי במבחנה תוצאה של העדר רקמות כל הפיזיולוגיה באווירה ex-vivo . סרטן-לתא אינטראקציה (סטרומה, המערכת החיסונית, להערכת, אפיתל, וכו ') בתוך microenvironment הגידול משקף במידה רבה על סרטן התא מאפיינים2. Microenvironment הגידול יכול לשנות ביטוי גנים/חלבון התא סרטן ומאפיינים פנוטיפי, בנוסף angiogenetic ואת פוטנציאל גרורתי. מערכת התרבות דו-ממדית (2-D) במבחנה חסרה גם מטריצה רקמות מתאים, אשר הכרחי לווסת את התקדמות הגידול. לפיכך, בשל מגבלות אלו, מודלים ויוו צריך תמיד להיות מנוצל כדי לתמוך ממצאים ראשוניים של מודלים במבחנה . במחקר זה, אנו משתמשים בטכנולוגיית תאי גליון לפתח ויוו במודל חיה זה elucidates את התהליך הביולוגי המלא שבבסיס HCC.
לפני יותר מעשור מעבדה של Okano הוקמה שיטה של הנדסת רקמות, המבוסס על טכנולוגיית תא גליון3. שיטה זו משתמשת פלסטיק תרבות מגיבים תרמו כדי לאפשר הפיכה תא אדהזיה/ניתוק על ידי שליטה על פני השטח hydrophobicity. שיטה זו מאפשרת קציר עדין של תאים בתרבית בתבנית ללא פגע תלת-ממדיים (3-D) (גיליון i.e.,cell), עם מטריצה חוץ-תאית מטופחים (ECM) ואינטראקציות מתא לתא. הטכניקה גיליון תא מחייב את precoating של תרבות מנות עם poly(N-isopropylacrylamide) טמפרטורה-מגיבה פולימר (אני פיפה), וזו מסחרית זמינים ומוכנים לשימוש. בטמפרטורה מתחת 20 ° C, פולימרים פיפה אני להפוך להתייבש, להמיס פתרונות מימית, ואילו, בטמפרטורה גבוהה (37 מעלות צלזיוס), פולימרים להתייבש, להפוך התמיסה עכורים. הפולימר מכיל אמיד הידרופילית שרשראות הידרופוביות לצד רשתות (איזופרופיל קבוצות). בטמפרטורות גבוהות, תנועה בראונית של מולקולות מים מתעצמת, הואיל בטמפרטורה נמוכה, מולקולות המים המקיפים את קבוצות איזופרופיל של פירוק מבנה רטוב וקבוצות איזופרופיל הידרופובי צבירה בגלל אינטראקציות הידרופוביות. לכן, כל שרשרת הפולימר אגרגטים, ארגונייט שוקע4.
במסגרת המחקר הציג, בטכניקה זו משתמשים לפתח מודל חיה HCC באמצעות שלושה גליונות תאים שונים. הגיליון הראשון מועסקים מורכב HCC תא שורת תאים בלבד, בעוד ששני הדפים האחרים מורכבים של שילוב של HCC תא שורת תאים MSCs משני מקורות שונים: MSCs במח העצם (BMMSCs) ו- MSCs הטבור (UCMSCs). MSCs הם הלא-hematopoietic סטרומה תאים המסוגלים המבדילים intocell נגזרות של השושלת mesenchymal, כולל adipocytes, osteocytes, chondrocytes ונייטרלים5. הסיבה שאנו מעסיקים תאים אלה בעת יצירת גליון התא סרטן היא תפוקתב לא עקבית על ההשפעה של MSCs על סרטן. הוצע כי MSCs יכולים להיות שני פנוטיפים שונים: "MSC1", הפנוטיפ proinflammatory, ו- "MSC2", פנוטיפ לדיכוי המערכת החיסונית6. MSCs מבטאים קולטנים כמו אגרה (TLRs). TLR4 לקרקע של MSCs מגביר את הפרשת גורמים proinflammatory, ואילו לקרקע TLR3 מגביר את הפרשת גורמים לדיכוי המערכת החיסונית6. המחקר במבחנה של פנוטיפים שני אלה דיווחו כי תרבות משותפת של MSC1 עם שורות תאים סרטן הקלוש צמיחת תאים של סרטן, בעוד תרבות משותפת MSC2 היה את האפקט ההפוך7. זה מרמז כי MSCs יכול להיות סרטן בעד או נגד סרטן, בהתאם פנוטיפ שלהם. לכן, בנוסף פיתוח המודל בעלי חיים HCC בטכנולוגיה גיליון תא, אנחנו רוצים לחקור את ההשפעה של השתלות MSC על התפתחות גידולים, ואם באמצעות תאים אלה להגביר או להפחית את התפתחות מודל זה.

<table><tbody><tr><td><ריאגנטים חזקים>; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS&nbsp;</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>DMEM גלוקוז גבוה&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>D5671-500 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין&nbsp;</td><td>Life Technology</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלח פיזיולוגית סטרילית</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S0817-1GA</td><td></td></tr><tr><td>קו תאי HepG2 אנושי</td><td>ATCC, ארה"ב</td><td>HB-8065</td><td></td></tr><tr><td>קו תאים MSCs מח עצם אנושי</td><td>PromoCell, ארה"ב</td><td>C-12974</td><td></td></tr><tr><td>רקמת חבל טבור אנושית MSCs</td><td>PromoCell, ארה"ב&nbsp;</td><td>C-12971</td><td></td></tr><tr><td>קטמין 50%</td> <td>רומפון, באייר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קסילזין 2%</td> <td>רומפון</td><td>23076-35-9</td><td></td></tr><tr><td>Alphadine&reg; &nbsp; תמיסה.</td><td>ריאד פארמה</td><td>LBL0816</td><td></td></tr><tr><td><חזק>חד פעמי:&nbsp; </חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל פוליפרופילן בהירות גבוהה צינור צנטריפוגה PP בז</td><td>&nbsp;</td><td></td><td></td>352097</tr><tr><td>3.5 ס"מ סטרילי כלי תרבית UpCell סטריליים עם נייר סינון (ממברנה)</td><td>Sigma</td><td>174904-1CS</td><td></td></tr><tr><td>100-1000 & מיקרו; l &nbsp; טיפים לפיפטה&nbsp;</td><td>סיגמא</td><td>CLS4868-1000EA&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>נוהל בסיסי וילון</td><td>תרמופישר</td><td>PMD5293.0</td><td></td></tr><tr><td><חזק>ציוד&nbsp; </פיפטה חזקה></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פלוס, נפח משתנה</td><td>Eppendorf&reg; &nbsp; מחקר ו-reg;</td><td>Z683779-1EA</td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור תרביות רקמה 37 מעלות; C, 5% CO2כל</td> <td>מותג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ארון בטיחות ביולוגי</td><td>כל מותג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חממת תרביות רקמות 20 & deg; C, 5% CO2כל</td> <td>מותג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כלים כירורגיים סטריליים וחולדות עירומות:&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr> אזמל <tr><td>מספריים</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>מלקחיים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; תפר ניילון&nbsp; 5-0</td><td>Accutome</td><td>AB-3854S</td><td>מונופילמנט, Lancet</td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרקי טוברקולין</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-826-88</td><td></td></tr><tr><td>חולדות עירומות&nbsp;</td><td>Charles נהר</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

חקר את הפוטנציאל של תא גזע mesenchymal גיליון על הפיתוח של קרצינומה hepatocellular in vivo

Exploring the Potential of Mesenchymal Stem Cell Sheet on The Development of Hepatocellular Carcinoma In Vivo

אין ויוו במודל חיה המחקה סרטן אנושי יכול להיות יישומים שונים המספקים מידע קליני משמעותי. משמש כיום הטכניקות לפיתוח ויוו סרטן דגמים יש מגבלות ניכר. לפיכך, במחקר זה, אנו שואפים לממש בטכנולוגיית תאי גליון לפתח מודל סרטן ויוו . קרצינומה Hepatocellular (HCC) מפותחת בהצלחה בחולדות עירום באמצעות גליונות התא שנוצר מתאי השורה תא HCC. הסדינים התא סרטן שנוצרו באמצעות אדהזיה תאיים ויצירת מבנה מרובדת, נשלט על ידי מטריצות. דבר זה מאפשר השתלת גיליון HCC לתוך הכבד ויצירת מודל בעלי חיים נושאות תוך חודש. בנוסף, חקר את התפקיד של גזע mesenchymal (MSC) בפיתוח של מודל זה סרטן. בנוסף הגיליון קו תא HCC, נוצרים עוד תא שני גיליונות: גיליון HCC תאי מח עצם MSCs (BMMSCs) ואת גיליון של תאים HCC, חבל הטבור MSCs (UCMSCs). הגליונות אשר יש שילוב של תאים HCC והן MSCs הם גם מסוגלים לייצר חיה נושאות. עם זאת, התוספת של MSCs מקטין את גודל הגידול בנוי, זו השפעה שלילית על התפתחות גידולים משתנה בהתאם למקור של MSCs בשימוש. אפשרות זו מציינת כי גיליון תא העשוי מסוימת יחוברו MSC יכול להיות מנוצל שליטה וניהול של הגידול.

Tumorigenicity של התאים המושתלים גיליונות בחולדות:
חודש אחד לאחר ההשתלה, כל גיליונות התאים המושתלים כבדי של חולדות פיתחו גידולים (איור 3). הגודל הממוצע של גידולים מפותחים של HepG2, HepG2/BMMSC HepG2/UCMSC תא הסדינים היו 4.5 ס מ 4 ס מ, 2.5 ס מ, בהתאמה10.
ניתוח היסטולוגית של רקמות הכבד:</stron...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לפתח ויוו סרטן מודל של שימוש בטכנולוגיית תאי גליון. מודל כזה יכול להיות מאוד שימושי עבור הערכת הרפוי נגד סרטן.

חקר את הפוטנציאל של תא גזע Mesenchymal גיליון על הפיתוח של קרצינומה Hepatocellular In Vivo

An in vivo animal model that mimics human cancer could have various applications that deliver significant clinical information. The currently used ...

שלום, אני ד"ר עלאא אלשרידה מהמרכז הבינלאומי למחקר רפואי ע"ש המלך עבדאללה במחלקה לתאי גזע ורפואה רגנרטיבית. היום נדגים את ההשפעה של תאי גזע מזנכימליים על התפתחות קרצינומה הפטו-תאית על מודל חולדות באמצעות טכנולוגיית יריעות תאים. שלום, אני עבדאללה אל-מובארק.אני עובד בכירורגיה ניסויית ובמעבדת בעלי חיים באוניברסיטת המלך סעוד. אנו משתמשים בחולדה העירומה כדי למנוע דחיות לאחר השתלת יריעת התא. תרשים זה מציג הליך השתלת גיליון תאים בחולדות עירומות.במחקר זה ישתמשו בחולדות עירומות בנות שמונה עד 12 שבועות. ראשית, חתכו את החולדות ובצעו חתך של שבעה עד עשרה סנטימטרים בין העור לשרירים שמתחתיו באמצעות אזמל על מנת לחשוף את הכבד. כדי להעביר את יריעת התא, השתמש בקרום סטרילי.הניחו את הממברנה על יריעת התא כדי לאסוף אותה. לאחר מכן, הניחו את יריעת התא עם הממברנה מעל אונה אחת של הכבד. בניית יריעות תאים.לפני זריעת התאים, מצפים צלחות תרבית UpCell המגיבות לטמפרטורה של 3.5 סנטימטר ב-FBS לא מדולל. ציפוי כלים ב- FBS תומך בצמיחת התאים בשכבת הממברנה ומונע פירוק תאים. הקפד לכסות את כל שטח הכלים.דגרו על המנות למשך 24 שעות בחום של 37 מעלות צלזיוס באווירה לחה המכילה 5% פחמן דו חמצני ו-95% אוויר. למחרת הסר את עודפי ה- FBS ואפשר לכלים להתייבש בטמפרטורת החדר למשך שעה לפחות. זרע לפחות מיליון תאי סרטן HepG2 לבד או בתרבית משותפת עם תאי גזע מזנכימליים לתוך מדיום תרבית DEM.המדיום הוסיף 10% FBS ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין. היחס ששימש בין תאים סרטניים לתאי גזע מזנכימליים במחקר זה הוא 4:1. לאחר הוספת התאים יש לנער בעדינות את הכלים.דגרו על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה המכילה 5% פחמן דו חמצני ו-95% אוויר. ניתוק גיליון התא. במפגש תאים של 100% הוציאו את הכלים מהחממה של 37 מעלות צלזיוס.כעת, דגרו על יריעת תאי הסרטן HepG2 למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר, תוך דגירה של HepG2 בתרבית משותפת עם תאי גזע מזנכימליים למשך 30 עד 40 דקות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה המכילה 5% פחמן דו חמצני ב-95% אוויר. במהלך זמן הדגירה לניתוק גיליון התא התחל את הליך החיה. כל המחקרים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה של אוניברסיטת המלך סעוד.ביצוע ההליך הכירורגי. בדוק את עומק ההרדמה על ידי בדיקת רפלקס נסיגת הדוושה. לחטא את אזור הניתוח ביוד.כעת, מרחו קרצוף שני עם יוד. מכסים את החיה בווילון מעוקר כדי למנוע זיהום של החתך. בעזרת אזמל מעוקר יוצרים חתך בין העור לשרירים שמתחתיו, בגודל של כשבעה עד עשרה סנטימטרים כדי לחשוף את הכבד.הפרד את שריר הבטן מהעור בעזרת הקצה האחורי השטוח של האזמל. דוקרים בזהירות את הלינאה אלבה בעזרת אזמל ומרחיבים את החתך בעזרת מספריים חדים. השתלת גיליון תאים בכבד של חולדה.הקש בעדינות על צלחת התרבות מעל הספסל כדי לנתק את הסדין מפני השטח שלו. הפרד את גיליון התא מפני השטח של המנה על ידי גירוד שולי הסדין בחצי עיגול. כעת, הסר בעדינות את כל מדיום התרבות מהמנה.ודא שהסדין שלם ללא כל נזק, אחרת לא ניתן להשתמש בו. הכן קרום סטרילי לקטיף והעברת יריעת התא. אז ראשית, יש להשרות את הממברנה במי מלח רגילים, ואז להסיר את עודפי המלח בעזרת ניצן כותנה סטרילי.הנח את הממברנה הרטובה מעל יריעת התא, תוך הימנעות מבועות אוויר בין הממברנה ליריעת התא. הוסף כמה טיפות של מי מלח רגילים על הממברנה ויריעת התא כדי לאסוף את החומר. השאירו את הממברנה למספר שניות כדי לוודא שיריעת התא מחוברת כראוי על הממברנה, ולאחר מכן אספו אותה.כעת, הכינו את הכבד להשתלה. ודא שמשטח הכבד יבש. הניחו את הממברנה עם יריעת התא מעל אונה אחת של כבד החולדה.הוסף כמה טיפות של מי מלח מעוקרים כדי לנתק את יריעת התא מהממברנה. המתן חמש דקות לפני שתסיר בזהירות את הממברנה. ניתן לראות את יריעת התא מחוברת על הכבד בסרטון זה.לבסוף, סגור את השרירים הבסיסיים וחתכי העור עם חמישה תפרי ניילון. לאחר סגירת החתך יש לחטא את אזור הניתוח בבטדין. הזמן מההרדמה לראש משתנה, אך בדרך כלל הוא איפשהו בין חמש ל -20 דקות תוצאות.איור זה מציג את הגידול שהתפתח בכבד של חולדה לאחר חודש של השתלת יריעת תאי HepG2. כאן, הגידול פותח לאחר השתלת תאי סרטן HepG2 מיוצרים ביריעות תאים ותאי גזע מזנכימליים של מח עצם. בעוד שזה מראה, הגידול הקטן ביותר שהתפתח בכבד של חולדה לאחר השתלת יריעת תאים המיוצרת מתאי סרטן HepG2 ותאי גזע מזנכימליים של חבל הטבור, איור זה מראה צביעת H ו-E של כבד החולדה לאחר חודש אחד של השתלת יריעת תאים.כאשר A מייצג תאי כבד רגילים של חולדות, ו-B מייצג תאי כבד של חולדות סרטניות. מסקנה. אז לאחר צפייה בסרטון זה אתה אמור להיות מסוגל לפתח מודל קרצינומה של הכבד על חולדה עירומה באמצעות טכנולוגיית יריעות תאים. תודה שצפית.

exploring-potential-mesenchymal-stem-cell-sheet-on-development

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

מאמר זה יתמקד דור האנדודרם הכבד האנושי אנושי אוכלוסיות תאים גזע עובריים.

הדור יציבה של hepatocyte דמויי תאים של אדם אוכלוסיות תאים גזע עובריים

כאן אנו מתארים את הבידוד של CD133 לבטא בתאי גזע כבד סרטן בתאי גזע מהכבד Murine שלם, תהליך הדורש עיכול רקמות, העשרה התא cytometry בידוד תזרים. אנו כוללים שיטות מתקדמות בידוד תא בודד והרחבת משובט.

בידוד של הכבד CD133 + בתאי גזע משובטים עבור הרחבת

xenografts גידול האנושי בעכברים עם מערכת חיסון חלשים הם כלים רבי ערך כדי ללמוד ביולוגיה בסרטן. פרוטוקולים ספציפיים כדי ליצור xenografts תת עורי וintrahepatic מתאי אנושיים hepatocellular קרצינומה או שברי גידול מתוארים. התחדשות כבד הנגרמת על ידי כריתה חלקית בעכברי נמען מוצגת כאסטרטגיה כדי להקל על קליטתם intrahepatic.

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

הממברנה הכוריואלנטואית של הגוזל (CAM) היא חסרת חיסון ובעלת כלי דם גבוהים, מה שהופך אותה למודל טבעי in vivo של צמיחת גידול ואנגיוגנזה. בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה אמינה לגידול גידולי קרצינומה תלת מימדיים של הכבד (HCC) באמצעות בדיקת CAM.

<em&gt; באוב</emAssay&gt; אפרוח chorioallantoic ממברנה (CAM) כמודל xenograft יעיל של Hepatocellular Carcinoma

ההתפשטות הגרורה של הסרטן היא הסיבה העיקרית למוות הקשורים לסרטן. אנו מספקים תיאור מעמיק של מתודולוגיה ניתוח ההישרדות שלנו להקמת מערכת "חולה-כמו" orthotopic מודל עכבר syngeneic לחקר המנגנונים של גרורות בגידולים מוצקים איבר.

&quot;מטופל כמו&quot; Orthotopic syngeneic עכבר הדגם של Hepatocellular Carcinoma גרורה

ההכנה והשתלות של רקמת שומן נגזר תאי גזע (ASC) מגיליונות דיו sutured. חיבור המעי הגס במודל חולדה מוצג. יישום זה הרומן מראה כי גיליונות ASC יכולים להפחית זליגת השקה המעי הגס.

השתלת תאי רקמת שומן-Derived גיליון כדי להפחית את זליגת לאחר קיצור קיבה חלקית במודל של עכברים

מאמר זה מספק שיטה ריאלי ויעיל עבור בניית מרובה שכבות תאי גזע סדינים עם מאפיינים חיוביים תאי גזע.

בניית גיליון מרובה שכבות תאי גזע Mesenchymal עם מערכת תרבות דינמית תלת-ממד

כאן, אנו מתארים את ההתפתחות של מודל מורטין רלוונטי קלינית של סרטן הכבד לכידה של תכונות החיסונית אופייני של סרטן hepatocellular (HCC).

מודל העכבר המושרה של הפאציט הנגרמת על ידי מדגם של סרטן הפטאותאי העולה בקביעת דלקת הכבד פיברוזיס

פרוטוקול זה מציג מודל ביומימטי תלת מימדי עם תא סטרומה פיברוטית נלווית. מוכן עם הידרוג'לים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית ביחסים המחקים את התכונות הביו-פיזיקליות של המטריצה החוץ-תאית הסטרומלית, מתווך פעיל של אינטראקציות תאיות, צמיחת גידולים וגרורות.

מודל ביומימטי לסרטן הכבד לחקר אינטראקציות גידול-סטרומה בסביבה תלת מימדית עם תכונות ביו-פיזיקליות מתכווננות

מחלות כבד נגרמות על ידי גורמים רבים המקדמים פיברוזיס או שחמת הכבד. השתלה היא האפשרות היחידה להחלים בריאות. עם זאת, בהתחשב במחסור באיברים הניתנים להשתלה, יש לחקור חלופות. המחקר שלנו מציע השתלת פיגומי קולגן ברקמת הכבד ממודל של בעלי חיים.

השתלת פיגומי מטריצת קולגן תלת מימדית כאסטרטגיית התחדשות הכבד

אורגנואידים מחוללים מהפכה במידול רקמות מותאם אישית לפיתוח איברים, גילוי תרופות וחקר מחלות. הנדסת אורגנואידים מתקדמת ליצירת רקמות סינתטיות מורכבות. המטרה היא לשלב מורפוגנזה, טכנולוגיית אסמבלואידים וביומטריצות כדי לקדם את הנדסת הרקמות. פרוטוקול זה מסייע במידול אורגנוגנזה בכבד ובקביעת הנחיות לבניית רקמות סינתטיות.

טכניקות גידול במבחנה למידול אורגנוגנזה של כבד, בניית מכלולים ותכנון רקמות סינתטיות באמצעות קווי תאים אנושיים

חקור את השפעת תאי גזע מזנכימליים על התפתחות קרצינומה הפטוצלולרית באמצעות טכנולוגיית גיליון תאים במודל עכברוש עירום. שיטה זו מאפשרת הערכת טיפולים אנטי-סרטניים ביעילות.

חקר את הפוטנציאל של תא גזע Mesenchymal גיליון על הפיתוח של קרצינומה Hepatocellular In Vivo

גלה סרטונים נוספים