Name: הדור יציבה של hepatocyte דמויי תאים של אדם אוכלוסיות תאים גזע עובריים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-26T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: למד שיטה יעילה להפקת תאי כבד אנושיים מתאי גזע עובריים באמצעות גירוי פיזיולוגי. השיטה מייצרת תאי כבד תפקודיים לחקר ביולוגיית הכבד וניסויי תרופות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ד&quot;ר חי נתמכה על ידי מלגה RCUK, ד&quot;ר המערבית נתמכה על ידי מחלקת כירורגיה, ד&quot;ר Medine נתמך על ידי מענק מהקרן Core BHF, מר בלטסאר Lucendo-Villarin נתמכה על ידי דוקטור MRC Studenship. ד&quot;ר ג&#39;ואו נתמכה על ידי מלגה מהממשלה הסינית.

<ol><li>Asgari, S., Pournasr, B., Salekdeh, G. H., Ghodsizadeh, A., Ott, M., Baharvand, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+a+new+era+for+hepatology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: a new era for hepatology.</a> J. Hepatol. 53, 738-751 (2010).</li>
<li>Hay, D. C., Pernagallo, S., Diaz-Mochon, J. J., Medine, C. N., Greenhough, S., Hannoun, Z., Schrader, J., Black, J. R., Fletcher, J., Dalgetty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+Screening+of+Polymer+Libraries+to+Define+Novel+Substrates+for+Functional+Hepatocytes+with+Inducible+Drug+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Unbiased Screening of Polymer Libraries to Define Novel Substrates for Functional Hepatocytes with Inducible Drug Metabolism.</a> Stem Cell Research. 6, 92-101 (2011).</li>
<li>Payne, C. M., Samuel, K., Pryde, A., King, J., Brownstein, D., Schrader, J., Medine, C. N., Forbes, S. J., Iredale, J. P., Newsome, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+Functional+Hepatocyte+Like+Cells+in+Immune+Compromised+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+International%22%5BJournal%5D)">Persistence of Functional Hepatocyte Like Cells in Immune Compromised Mice.</a> Liver International. 31, 254-262 (2011).</li>
<li>Greenhough, S., Medine, C., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+Stem+Cell+Derived+Hepatocyte+Like+Cells+and+their+Potential+in+Toxicity+Screening%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Pluripotent Stem Cell Derived Hepatocyte Like Cells and their Potential in Toxicity Screening.</a> Toxicology. 278, 250-255 (2010).</li>
<li>Medine, C. N., Greenhough, S., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Stem+Cell+Derived+Hepatic+Endoderm+in+Human+Drug+Discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+Society+Transactions%22%5BJournal%5D)">The Role of Stem Cell Derived Hepatic Endoderm in Human Drug Discovery.</a> Biochemical Society Transactions. 38, 1033-1036 (2010).</li>
<li>Hannoun, Z., Fletcher, J., Greenhough, S., Medine, C. N., Samuel, K., Sharma, R., Pryde, A., Black, J. R., Ross, J. A., Wilmut, I., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Comparison+between+Conditioned+Media+and+Serum+Free+Media+in+Human+Embryonic+Stem+Cell+Culture+and+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Reprogramming%22%5BJournal%5D)">The Comparison between Conditioned Media and Serum Free Media in Human Embryonic Stem Cell Culture and Differentiation.</a> Cellular Reprogramming. 12, 133-140 (2010).</li>
<li>Dalgetty, D. M., Medine, C., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+Future+Challenges+in+Stem+Cell-Derived+Liver+Technologies%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Progress and Future Challenges in Stem Cell-Derived Liver Technologies.</a> American Journal of Physiology - Gastrointestinal and Liver Physiology. 297, 241-248 (2009).</li>
<li>Hay, D. C., Fletcher, J., Payne, C., Terrace, J. D., Gallagher, R. C. J., Snoeys, J., Black, J., Wojtacha, D., Samuel, K., Hannoun, Z., Pryde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Efficient+Differentiation+of+hESCs+to+Functional+Hepatic+Endoderm+Requires+ActivinA+and+Wnt3a+Signalling%5BTitle%5D)+AND+%22+Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Highly Efficient Differentiation of hESCs to Functional Hepatic Endoderm Requires ActivinA and Wnt3a Signalling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 12301-12306 (2008).</li>
<li>Fletcher, J., Cui, W., Samuels, K., Black, J. R., Currie, I. S., Terrace, J. D., Payne, C., Filippi, C., Newsome, P., Forbes, S. J., Ross, J. A., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Inhibitory+Role+of+Stromal+Cell+Mesenchyme+on+Human+Embryonic+Stem+Cell+Hepatocyte+Differentiation+is+Overcome+by+Wnt3a+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+and+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">The Inhibitory Role of Stromal Cell Mesenchyme on Human Embryonic Stem Cell Hepatocyte Differentiation is Overcome by Wnt3a Treatment.</a> Cloning and Stem Cells. 10, 331-340 (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

פיתחנו מודל פשוט, הומוגנית לשעתקו מאוד במבחנה כדי לייצר רמות להרחבה של HLCs האדם. המודל שלנו קיבל תוקף על ידי מספר מעבדות פעולה חיצוניים. אנו שגרתי לאפיין בתאי גזע שמקורם HLCs באמצעות ארגז הכלים שלנו לבית של סמנים התפתחותי מסוים מבחני תפקודי כבד (שרובם זמינים מסחרית). שלבים קריטיים בתהליך שלנו הן: שמירה על תא גזע pluripotency; היכולת לכוון תא גזע האנדודרם בידול מוחלט, את המפרט של תרבויות הומוגניות של האנדודרם הכבד ואת היכולת להפיק האנדודרם הכבד בוגרת מציג פונקציה מגוון רח...

Matrigel לוחות ציפוי צלוחיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Matrigel (10 מ&quot;ל, BD Biosciences, בריטניה); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> KO-DMEM (500 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות רקמות צלחות (6 טוב, 12 טוב, קורנינג, בריטניה) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות רקמות צפחת (25 CM2 פרקו, קורנינג, בריטניה) </li></ol> hESC תחזוקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר בינוני פיברובלסטים עובריים מותנה (MEF-CM) (100 מ&quot;ל, R &amp; D מערכות, ארה&quot;ב); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון BSA (50 מ&quot;ל, סיגמא אולדריץ&#39;, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמיחה האדם הבסיסיות גורם פיברובלסטים (100 מיקרוגרם, Peprotech, ארה&quot;ב); חנות ב -20 ° C. </li></ol> HESCs Passaging עם collagenase <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גם בקבוק ומחוברות או hESCs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Matrigel בארות מצופה צלוחיות או על פי הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Phospate שנאגרו מלוחים (-MgCl 2,-CaCl 2) (500 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); לאחסן בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Collagenase IV (1 גרם, Gibco, Invitrעוגן, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכבר בינוני פיברובלסטים עובריים מותנה (MEF-CM) (100 מ&quot;ל, R &amp; D מערכות, ארה&quot;ב). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צמיחה האדם הבסיסיות גורם פיברובלסטים (100 מיקרוגרם, Peprotech, ארה&quot;ב). </li></ol> דיפרנציאציה של hESCs האנדודרם אל הכבד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RPMI 1640 (500 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> B27 מוסף (10 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Activin (2 מיקרוגרם, Peprotech, ארה&quot;ב); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקומביננטי עכבר Wnt3a (2 מיקרוגרם, R &amp; D מערכות, ארה&quot;ב); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> KO-DMEM (500 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> KO-SR (500 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללא חומצות אמינו חיוניות (100 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> β-Mercaptoethanol (10 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DMSO (סיגמא אולדריץ&#39;, בריטניה); לאחסן בטמפרטורת החדר </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליבוביץ L-15 תרבות בינוני (500 מ&quot;ל, Sigmאולדריץ&#39;, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Tryptose פוספט מרק (100 מ&quot;ל, סיגמא אולדריץ&#39;, בריטניה); חנות ב 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Foetal שור בסרום, חום מומת (500 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 21-hemisuccinate (100 מ&quot;ג, סיגמא אולדריץ&#39;, בריטניה) הידרוקורטיזון: חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינסולין (הלבלב שור) (100 מ&quot;ג, סיגמא אולדריץ&#39;, בריטניה); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> L-גלוטמין (100 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חומצה אסקורבית (25 גרם, סיגמא אולדריץ&#39;, בריטניה); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האדם HGF (10 מיקרוגרם, Peprotech, ארה&quot;ב); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקומביננטי Oncostatin M האדם (OSM) (50 מיקרוגרם, R &amp; D מערכות, ארה&quot;ב); חנות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזרק מונעת יחידת מסנן 0.22 מיקרומטר (Millipore, בריטניה) </li></ol> אפיון האנדודרם נגזר hESC כבדית Immunostaining <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוספט חיץ מלוחים (-MgCl 2,-CaCl 2) (500 מ&quot;ל, Gibco, Invitrogen, בריטניה); stoמחדש בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PBST, PBS מורכב עם 0.1% tween 20 (Sigma-Aldrich, בריטניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Paraformaldehyde (PFA) (Sigma-Aldrich, בריטניה) מורכבת ב-PBS, חנות -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גליצרול (Sigma-Aldrich, בריטניה), לאחסן בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טריס Base (Sigma-Aldrich, בריטניה), לאחסן בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתנול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרום (עבד Serotech, בריטניה), לאחסן ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוגדן משניים, fluorophores אלקסה (בדיקות מולקולריות, Invitrogen, בריטניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MOWIOL 4-88 (Polysciences Inc, ארה&quot;ב) מורכב ב טריס HCL וגליצרול כמו לכל הוראות היצרנים. DAPI (פירס, תרמו פישר סיינטיפיק, בריטניה) הוא הוסיף הפתרון MOWIOL בדילול 1:1000. </li></ol><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> ראשי נוגדנים </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Antigen * </td><td> סוג </td><td> ספק </td><td> מהילה </td></tr><tr><td> Alb </td><td> חד שבטיים עכבר </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> 1 / 5<html> 00 </td></tr><tr><td> E-cadherin </td><td> חד שבטיים עכבר </td><td> Millipore </td><td> 1 / 100 </td></tr><tr><td> α-fetoprotein </td><td> חד שבטיים עכבר </td><td> סיגמא </td><td> 1 / 500 </td></tr><tr><td> SSEA-4 FITC </td><td> חד שבטיים עכבר </td><td> Biolegend </td><td> 1 / 100 </td></tr><tr><td> IgG </td><td> חד שבטיים עכבר </td><td> DAKO </td><td> 1 / 500 </td></tr><tr><td colspan="2"> משני נוגדנים </td><td></td><td></td></tr><tr><td> אנטי עכבר FITC המצומד </td><td> חד שבטיים עיזים </td><td> Invitrogen </td><td> 1 / 400 </td></tr></tbody></table> טבלה 2. הנוגדנים המשמשים hESC נגזר immunostaining הכבד האנדודרם, בריכוזים השתמשו, המינים התפתחו וחברות שהם שנרכשו. ניתוח פונקציונלי של האנדודרם הכבד Normalisation (לכל חלבון מ&quot;ג) ss = &quot;jove_step&quot;&gt; מבחני ציטוכרום P450 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> P4-Glo CYP3A4, CYP1A2, ערכות ו luminometer (Promega, ארה&quot;ב). </li><li value="1" style=";text-align:right;direction:rtl"> לבן קרקעית שטוחה 96 גם assay צלחת (BD Biosciences, בריטניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BCA Assay Kit (פירס, תרמו פישר סיינטיפיק, בריטניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Assay שקוף 96 צלחת גם (Iwaki, בריטניה) </li></ol>

הדור יציבה של hepatocyte דמויי תאים של אדם אוכלוסיות תאים גזע עובריים

Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations

למרות ההתקדמות רעילות התרופה דוגמנות אדם, תרכובות רבים נכשלים במהלך הניסויים הקליניים, בשל תופעות לוואי צפויות. העלות של מחקרים קליניים הם משמעותיים, ולכן חיוני יותר מסכי הרעלים חזוי מפותחים לפרוס בשלב מוקדם של פיתוח התרופה (Greenhough et al 2010). Hepatocytes האדם מייצגים את המודל הנוכחי זהב סטנדרטי להערכת רעילות התרופה, אבל הם משאב מוגבל כי התערוכה פונקציה משתנה. לכן, השימוש של שורות תאים ורקמות הנציח במודלים של בעלי חיים מועסקים באופן קבוע בשל השפע שלהם. בעוד שני מקורות מידע, הם מוגבלים על ידי פונקציה עניים, השתנות המינים ו / או חוסר יציבות של תרבות (Dalgetty et al 2009). בתאי גזע pluripotent (PSCs) הם מקור חלופה אטרקטיבית של hepatocyte אדם כמו תאים (HLCs) (Medine et al 2010). PSCs מסוגלים התחדשות עצמית והבחנה לכל סוגי תאים סומטיים נמצא המבוגר ובכך מייצגיםמקור פוטנציאלי בלתי נדלה של תאים מובחנים. פיתחנו הליך פשוט, יעיל ביותר, מקובל אוטומציה התשואות HLCs אדם תפקודית (Hay et al 2008; פלטשר et al 2008; חנון et al 2010; פיין et al 2011 ו Hay et al 2011). אנו מאמינים כי הטכנולוגיה שלנו יוביל לייצור להרחבה של HLCs עבור גילוי תרופות, מחלות דוגמנות, בניית חוץ הגשמי מכשירים סלולריים ואולי טיפולים להשתלה מבוסס.

מאמר זה יתמקד דור האנדודרם הכבד האנושי אנושי אוכלוסיות תאים גזע עובריים.

Despite progress in modelling human drug toxicity, many compounds fail during clinical trials due to unpredicted side effects. The cost of clinical ...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לייצר רמות הומוגניות של הפטוציטים אנושיים כדי לחקור את הביולוגיה של הכבד האנושי במבחנה. זה מתחיל על ידי הנעת תאי גזע עובריים אנושיים או תאי גזע עובריים אנושיים לאנדודרם סופי באמצעות גירויים פיזיולוגיים הפעילים ב-A ו-WINT שלוש A.As שלב שני אנדודרם סופי מונע ביעילות רבה לאנדודרם הכבד. אנדודרם הכבד הבא שמקורו ב-ESC אנושי מתבגר במבחנה כדי לייצר הפטוציטים אנושיים פונקציונליים.תוצאות מ-PCR Western Blotting, אימונופלואורסצנטי, אלייזה ומטבוליזם של תרופות מצביעות על כך ששיטה זו מפיקה הפטוציטים מ-ESCs אנושיים ביעילות של כ-90% בטכניקה זו, אנו יכולים, בתיאוריה, לייצר אספקה בלתי נדלית של הפטוציטים אנושיים ראשוניים, המציגים רמות ניכרות של תפקוד כבד אנושי. בעתיד, זה יועיל לחיזוי מדויק של רעילות התרופות ויספק תמיכה בכבד האנושי. החוכמה היא להניע התמיינות סולארית וצפיפות הליבה של תאים אנושיים.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שצפיפות תאי הליבה חיונית ליצירת אוכלוסיית תאים הומוגנית. הכשרנו למעלה מ-15 אנשים בארבעה אתרים בינלאומיים לבצע טכניקה זו בהצלחה. התחל בתרבית של תאי גזע עובריים אנושיים והתפשט על צלחות מצופות מטריג'ל עם פיברובלסטים עובריים של עכברים מדיה מותנית ORM cm בתוספת FGF בסיסי.חשוב לאפיין בקפידה את ה-ESCs האנושיים שנשמרו לפני התמיינות הכבד. לדוגמה, תאים אלה מציגים מורפולוגיה של ESC אנושי. הם גם מבטאים את סמני תאי הגזע הפלוריפוטנטיים, OCT ארבע וננו ברמות דומות לקו ה-ESC האנושי של הבקרה החיובית H 7.בנוסף, ה-ESCs האנושיים חיוביים ל-SS EEA ארבעה. כאשר ESCs E אנושיים מגיעים לשטף של 30 עד 60%, החלף את ה-ME CM במדיום התמיינות טרי שהוכן מראש. כדי ליזום התמיינות בכבד, יש להחליף את המדיום כל 24 שעות למשך שלושה ימים.לאחר שלושה ימים, התאים מקבלים מראה משולש כשהם מתחילים להתמיין לכיוון פנוטיפ אנדודרמלי. העבר את המדיום לבידול SR DMSO. תרבות בינונית למשך ארבעה עד חמישה ימים.החלפת המדיום כל 48 שעות. לאחר תקופה זו של חמישה ימים, התאים יתחילו לקבל מראה מצולע האופייני לתאי הכבד. התמיינות של ESC אנושי לאנדודרם הכבד באה לידי ביטוי בסדרה של שינויים מורפולוגיים עמוקים עד היום התשיעי.יתר על כן, הביטוי של אוקטה ארבע במהלך תשעת הימים יורד בהדרגה. לעומת זאת, תעתיקי כבד של FP ואלבומין גדלים מהיום השביעי ואילך. המשך על ידי הבשלת התאים ושמירה על פנוטיפ הכבד במדיום הסופי למשך תשעה ימים עם מדיום טרי כל 48 שעות.לבסוף, עקוב אחר התאים המתורבתים על ידי מיקרוסקופ ניגוד פאזה לשינויים מורפולוגיים הדרגתיים מצורה משולשת קוצנית למורפולוגיה אופיינית של כבד המציגה מראה מצולע כדי להעריך כמותית את בדיקת תפקוד האנדודרם בכבד. עבור ציטוכרום P ארבע 50 פעילות אנזימטית, במיוחד SIP שלוש A ארבע או SIP אחד A שתיים. יום הדגירה הראשון 17.תאי אנדודרם בכבד שמקורם ב-ESC אנושי עם המצע הספציפי המבצע תגובות בטריפליקטים. זכור להשתמש באמצעי תרבית רקמות כדגירה שלילית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך חמש שעות. אסוף את הסופרנטנטים ומדוד את הרמות היחסיות של הפעילות האנזימטית הבסיסית כמפורט בהוראות היצרן.כעת, עבור כל דגימה, חשב את הפעילות האנזימטית למיליגרם חלבון כפי שנקבע על ידי A-B-C-A-S. צביעה חיסונית של תרביות טיפוסיות שמקורן בשיטה זו של התבגרות חוץ גופית של אנדודרם בכבד. להדגים ביטוי הומוגני של שלושה סמני כבד אנושיים, אלבומין FP ו-ein.לאחר צפייה בסרטון זה, אתם אמורים להבין היטב כיצד להבדיל ביעילות בין תאי גזע אנושיים ותאי גזע לומדים להפטוציטים. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו על בסיס יומי עם התחייבות של כשתי דקות וחצי למיליון תאים. חשוב מאוד לבדוק שינויים מורפולוגיים על בסיס יומי במהלך תהליך ההתמיינות.

robust-generation-hepatocyte-like-cells-from-human-embryonic-stem

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מאמר זה יתמקד בפיתוח משטחים מצופים פולימר לטווח ארוך, תרבות היציבה של תאי גזע המופקת hepatocytes האנושי.

ייצוב Hepatocellular הפנוטיפ באמצעות משטחים סינטטיים אופטימליים

השיטה המוצגת כאן מתארת ​​בפועל ייצור מדרגים טובים (GMP) מערכת בידול -ready לייצר תאי hepatocyte דמוי אדם מתאי גזע פלוריפוטנטיים. היא משמשת חסכונית מערכת הסטנדרטית כדי לייצר תאי hepatocyte דמוי אדם למחקר כבד בסיסי ויישומי אדם.

מוגדרי דור Scalable של תאי Hepatocyte דמוי מתאי גזע פלוריפוטנטיים האנוש

פרוטוקול המובאת כאן מתאר פלטפורמה לזיהוי מולקולות קטנות לטיפול של מחלת כבד. תיאור שלב אחר שלב מוצגת המפרט איך להבדיל iPSCs לתוך תאים בעלי מאפיינים hepatocyte ב 96-ובכן צלחות, כדי להשתמש בתאים על המסך עבור מולקולות קטנות עם פוטנציאל פעילות טיפולית.

שימוש האדם המושרה תאים דמויי Hepatocyte נגזר תאי גזע Pluripotent לגילוי סמים

פרוטוקול זה מתאר גישה אוטומטית למחצה כדי לייצר hepatocyte כמו תאים מתאי גזע pluripotent אנושי בתבנית 96 צלחת טוב. תהליך זה הוא מהירה וחסכונית, המאפשר שהייצור של איכות מובטחת אצוות של תאים hepatocyte דמוי למחקר אנושי בסיסי ויישומי.

יצור אוטומטי למחצה של Hepatocyte כמו תאים מתאי גזע Pluripotent

פרוטוקול זה מפרט מונאולייר, שיטה נטולת סרום להפקת ביעילות תאים של hepatocyte מתאי גזע בעלי עוצמה מרבית (hPSCs) בתוך 18 ימים. זה כרוך שישה שלבים כמו hPSCs ברציפות להבדיל לתוך תא ביניים-סוגים כגון הרצף הפרימיטיבי, אנדופעיים מוחלט, האחורי הקדמי ואת ניצן הכבד ושלתי לפני היווצרות תאים hepatocyte כמו.

יעיל הבידול של תאים האדם Pluriפוטנטי לתוך תאי הכבד

פרוטוקול זה מתאר גישה להפקת hepatospheres של תאי גזע האדם בעלי עוצמה באמצעות מערכת התרבות המוגדרת הרכבה עצמית תא. פרוטוקול זה מתוכנת במספר קווי תאים, העלות האפקטיבית ומאפשרת ייצור של כדורי גוף האדם יציבים עבור יישומים ביו-רפואיים.

סרום חינם הפקת מימדים תלת-ממדיים של האדם בתאי גזע חזקים

מטרת מאמר זה היא לספק גישה סטנדרטית כדי לגרום בידול אב האדם בכבד מתאי גזע פלוריפוטנטים. הפיתוח של הליך זה עם ניסוחים מדיה מוכנים לשימוש מציעים למשתמש מערכת facile כדי ליצור תאי כבד אנושיים למחקר ותרגום ביו-רפואי.

מפרט פרוגניטור בכבד מתאי גזע פלוריפוטנטים באמצעות מערכת בידול מוגדרת

כתב יד זה מתאר פרוטוקול מפורט לבידול של תאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) לתאים דמויי הפטוציטים תפקודיים (HLCs) על ידי השלמת Activin A ו- CHIR99021 באופן רציף במהלך בידול hESC לאנדודרם סופי (DE).

שיטה יעילה לאינדוקציה מכוונת של תאים דמויי הפטוציטים מתאי גזע עובריים אנושיים

כאן אנו מציגים שיטה לא גנטית ליצירת ספרואידים אוטולוגיים אנושיים בכבד באמצעות תאים חד-גרעיניים שבודדו מדם היקפי במצב יציב.

ספרואידים של כבד אנושי מדם היקפי למחקרי מחלות כבד

פרוטוקול זה מתאר את היצירה של אורגנואידים אנדודרמליים בכבד (eHEPOs) מהירים וניתנים לשחזור. בעזרת פרוטוקול זה, ניתן לייצר eHEPOs תוך שבועיים ולהתרחב לטווח ארוך (יותר משנה) מבלי לאבד את הבידול והפונקציונליות שלהם.

יצירת אורגנואידים פונקציונאליים בכבד אנדודרמלי

מערכות התמיינות תאים פלוריפוטנטיות זמינות (PSC) לתפקוד מעוכבות כיום על ידי בעיות של שונות חמורה מקו לקו ואצווה לאצווה. כאן, תוך שימוש בהתמיינות לבבית כדוגמה העיקרית, אנו מציגים פרוטוקול לניטור חכם ומווסת את תהליך התמיינות PSC המבוסס על למידת מכונה מבוססת תמונה.

אסטרטגיית למידת מכונה מבוססת תמונה של תאים חיים לניטור התמיינות תאי גזע פלוריפוטנטית

למד שיטה יעילה להפקת תאי כבד אנושיים מתאי גזע עובריים באמצעות גירוי פיזיולוגי. השיטה מייצרת תאי כבד תפקודיים לחקר ביולוגיית הכבד וניסויי תרופות.

הדור יציבה של hepatocyte דמויי תאים של אדם אוכלוסיות תאים גזע עובריים

גלה סרטונים נוספים