הכריחו ריור כשיטה לנתח מיומנות וקטור של יתושים

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחלות המועברות על ידי יתושים, כגון האם מין יתוש הוא וקטור מתחרה לנגיף מסוים או לא. היתרון העיקרי בשיטה זו הוא שניתן לנתח כמות גדולה של יתושים בו זמנית, ללא שימוש בחיות מעבדה כמו עכברים. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו מכיוון שהיא זקוקה למוטוריקה עדינה שניתן לרכוש רק באמצעות תרגול.

הדגמה חזותית של טכניקה זו היא קריטית, מכיוון שקשה ללמוד את שלבי המפתח; הם דורשים ניסיון בטיפול ביתושים ווירוסים, וגם מיומנויות מוטוריות עדינות. כדי להתחיל, יש לדלל את מלאי הנגיף. לאחר מכן, ערבבו דם אנושי שפג תוקפו עם פרוקטוז, סרום בקר מסונן ומלאי הנגיף.

הקפיאו 140 מיקרוליטר של תערובת קמח דם לניתוח נוסף באמצעות TCID50. לאחר מכן, הכניסו שתי טיפות של 50 מיקרוליטר מתערובת קמח הדם בבקבוקון פלסטיק, ואפשרו ליתושים להאכיל במשך שעתיים. לאחר הרדמת היתושים, ספרו את הפרטים התפוסים במלואם, והעבירו אותם לבקבוקון חדש המכיל כרית כותנה ספוגה בפרוקטוז.

לאחר מכן, שמרו על היתושים בטמפרטורה של 27 מעלות צלזיוס ו-80% לחות למשך 14 או 21 יום. מלאו את רפידות הכותנה רוויות הפרוקטוז כל 72 שעות ב-1.5 מיליליטר פרוקטוז. ראשית, זרע 20,000 תאי Vero לבאר בצלחת של 96 בארות עם מצע גידול משלים.

להכנת מכשיר הרוק, הניחו צלחת זכוכית מרובעת על הספסל בזווית של 30 מעלות. לאחר מכן, הדביקו סרט דו צדדי לחלק העליון של צלחת הזכוכית. לאחר מכן, גלגלו חימר דוגמנות עד לקוטר של 0.5 סנטימטרים, והצמידו אותו לצלחת אופקית במרחק של סנטימטר אחד מהסרט הדו-צדדי.

חתכו את הקצוות מהמספר הנדרש של קצות מסנן של 10 מיקרוליטר, ומלאו כל קצה ב-10 מיקרוליטר PBS. לאחר מכן, הניחו את הקצוות על חימר הדוגמנות, ואבטחו אותם בלחץ עדין. לאחר מכן, שיתקו את היתושים על ידי הסרת רגליהם וכנפיהם.

תקן את היתושים לסרט שמעל קצות המסנן. הנח בעדינות את הפרובוסקיס של כל יתוש לקצה מסנן. לאחר 30 דקות, הסר את קצות המסנן והשליך את החימר והסרט.

העבירו את הרוק שנאסף לצינורות תגובה המכילים 10 מיקרוליטר PBS. מערבבים בעדינות את הרוק וה-PBS, ומעבירים את התערובת לבארות של צלחת של 96 בארות. דגרו את הצלחת במשך שבעה ימים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני.

בעזרת מיקרוסקופ אור, בדוק את התאים אם יש אפקט ציטופתי. ברגע שבאר חיובית להשפעה ציטופתית, השתמש בפיפטה כדי לקצור 140 מיקרוליטר של הסופרנטנט. לאחר מכן, העבירו את הסופרנטנט לצינור תגובה.

לאחר מכן, מערבבים 140 מיקרוליטר של הסופרנטנט עם 560 מיקרוליטר של מאגר AVL, ודוגרים במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. לבסוף, הוסף 560 מיקרוליטר אתנול, והפוך את הדגימה לערבוב. באמצעות פרוטוקול זה, נבדקו מספר מיני יתושים לזיהום והעברה של נגיף הזיקה בתנאי אקלים שונים.

בתנאי דגירה של 27 מעלות צלזיוס כל מיני האדס הראו רוק חיובי לנגיף זיקה. לעומת זאת, אף אחת מדגימות הרוק מטקסוני הקולקס לא הכילה עדות לנגיף. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו עבור 50 יתושים בשעה אחת אם היא מבוצעת כראוי.

לאחר צפייה בסרטון זה אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע ניסויי רוק בכפייה. אל תשכח שעבודה עם יתושים נגועים עלולה להיות מסוכנת מאוד, ולכן תמיד יש לנקוט באמצעי בטיחות מיוחדים לטיפול ביתושים בתנאי BSA-3 בעת ביצוע כל ניסוי.