חיזוי קטיעה באמצעות תאי אב מונונוקלאואריים במחזור מקומי בחולים שטופלו באנגיופלסטיקה עם איסכמיה קריטית של הגפיים

למרות שאנגיופלסטיקה משפרת את זרימת הדם באיסכמיה קריטית של הגפיים, חלק מהחולים עדיין יתקדמו לקטיעת גפיים. בהשוואה לפרוגנוזה המבוססת על גורמי סיכון מסורתיים ומאפיינים פנימיים של כלי הדם, מספר ה-MPCs המקומיים יכול לנבא יותר את התוצאה הקלינית, לגבי תפקוד לקוי של האנדותל וקטיעת גפיים. מספר ה-MPCs המקומיים מייצג אינדיקטור מבטיח לפרוגנוזה של אירועים וסקולריים, כגון איסכמיה, מחלות לב ואיסכמיה בגפיים התחתונות, עם יישום פוטנציאלי בריבוד סיכונים ואכיפת מניעה.

ידגימו את ההליכים אדוארדו ורה-גומז, אלחנדרו הרננדז-פטריסיו, קרולינה ארנדה-רודריגז, חואן אריאל גוטיירז-בואנדיה, אטין סואה רואיז-הרננדז, מריו אנטוניו טלז-גונזלס וגבריאל אלכסנדרה דומינגז-פרז. דוקטורנטים מהמעבדות למטבוליזם ניסיוני והתחדשות רקמות, כמו כן, יהיו גבריאל הרננדז-דה רובין ואוסקר אנטוניו לומן-זוניגה. ואלה מהמחלקה לכירורגיית כלי דם.

כדי לקבוע את ה-FMD לפני ואחרי אנגיופלסטיקה, השתמש במתמר ליניארי וסקולרי כדי למדוד את קוטר העורק הברכיאלי של המטופל. המקום הבא, השרוול של מד לחץ דם מעל אתר המדידה באמה, והשרוול 50 מילימטרים של כספית מעל לחץ הדם הסיסטולי למשך חמש דקות לפני שהוא מתרוקן. תוך 60 שניות מרגע הריקון, מדוד שוב את קוטר העורק הברכיאלי, והשתמש במשוואה כדי להעריך את ה-FMD.

כדי להעריך את החומרה הקלינית של איסכמיה בגפיים, על פי סיווג רתרפורד, הנח מחט בגודל 18 לתוך כלי הדם באתר המפשעה שנבחר, והנח מכניס מעל המחט. קדם חוט מנחה גמיש לתוך המבוא והחלף את המדריך בשישה מבוא צרפתי. באמצעות הנחיה פלואורוסקופית, הזריק מדיום ניגוד כדי לזהות את מסלול העורק ואתרי כלי דם חסומים.

הכניסו שני חוטי ניווט צרפתיים 0.014 ושני חוטי תמיכה צרפתיים 0.014 לתוך הספינה, וקדמו את חוטי ההנחיה לאתר החסום. לאחר מכן, הכניסו קטטר צרפתי אחד חמש ולאחר מכן צנתר צרפתי אחד שלושה, ואספו 10 מיליליטר דם מהמקום הקרוב ביותר לחסימת כלי הדם. הניחו את הדגימה על קרח וקדמו שוב חוט מנחה.

כאשר החוט המנחה נמצא במקומו, הכנס צנתר בלון אנגיופלסטיקה, המכיל בלון מתנפח הממוקם בקצה הצנתר, וקדם את קטטר הבלון אנגיופלסטיקה למקום הנגע. נפחו את הבלון כנגד הפלאק החוסם, הממוקם בדופן כלי הדם, וודאו שחזור זרימת הדם. 30 דקות לאחר ביצוע האנגיופלסטיקה, יש לקדם קטטר לאתר הקרוב ביותר לגוש כלי הדם ולאסוף 10 מיליליטר דם.

לאחר מכן, הסר את כל חוטי ההנחיה וספק את הטיפול המתאים לאחר הניתוח. שבועיים לאחר האנגיופלסטיקה, העריכו את החומרה הקלינית של איסכמיה בגפיים, כאבי מנוחה, איסכמיה נמוכה יותר ושימור תפקודי של כף הרגל, על פי סיווג רתרפורד, וזהו את המקרים הדורשים קטיעה גדולה עקב תוצאה שלילית. תוך שעה אחת מרגע האיסוף, העבירו שישה מיליליטר מכל דגימת דם שנאספה לצינורות חדשים של 15 מיליליטר, ודללו את הדגימות ביחס של אחד לאחד ב-PBS.

הוסף שני מיליליטר של מדיום שיפוע צפיפות לכל אחת משלוש מבחנות, והוסף שלושה נפחים שווים של הדם המדולל לכל שפופרת ללא יותר משלושה רבעים מלאים. הפרד את תאי הדם על ידי צנטריפוגה של שיפוע צפיפות, והשתמש בפיפטה כדי לאסוף את תאי הממשק של השכבות המתקבלות. משוך את התאים מכל דגימה לתוך צינור יחיד של 15 מיליליטר, ושטוף כל דגימה שש פעמים, עם שני מיליליטר PBS לכל שטיפה.

לאחר הכביסה האחרונה, השעו מחדש את ה-MPC המכיל כדורים במיליליטר אחד של PBS לדגימה לספירה, והוסיפו פעם אחת 10 לששת התאים לכל צינור למספר המתאים של חמישה צינורות ציטומטריה זרימה של מיליליטר לדגימה. גלולה את התאים על ידי צנטריפוגה, והשעיה מחדש של כל דגימת תא ב-100 מיקרוליטר של קוקטייל הנוגדנים המעניין למשך 10 שניות, לפני הדגירה של התאים למשך 20 דקות בארבע מעלות צלזיוס, מוגנים מפני אור. בתום הדגירה, השתמש בנוגדני בקרה מותאמים לאיזוטיפ כדי להגדיר את שערי הפיזור הקדמיים והצדיים המתאימים לניתוח, והשתמש בצינור המכיל מספר גבוה של תאים חיוביים CD45 ו-CD34 כדי לשער את ה-NPCs.

כדי לבחור פנוטיפים חיסוניים חיוביים כפולים, צור עלילות חדשות וזהה את התאים החיוביים KDR, CD133 ו-CD184, CD34 חיוביים, CD45 חיוביים, ולאחר מכן שער לזיהוי תת-האוכלוסיות העיקריות של MPC. לאחר מכן ניתן לתאם את מספר ה-MPCs עם ערך ה-FMD הבסיסי, ודלתא לאחר אנגיופלסטיקה של FMD, ושיעור החולים הזקוקים לקטיעה משמעותית של הגפה התחתונה. בניתוח מייצג זה, 30 יום לאחר אנגיופלסטיקה בגפיים התחתונות, המספר הבסיסי של MPCs חיוביים ל-CD45, חיוביים ל-CD34, חיוביים ל-KDR, נמצא בקורלציה שלילית עם ה-FMD.

בעוד שהשינוי ב-CD45 חיובי, CD34 חיובי, CD133 חיובי, CD184 חיובי, לאחר אנגיופלסטיקה, נמצא בקורלציה מובהקת עם שיפור ב-FMD. מספר בסיסי מוגבר של MPCs חיוביים CD45, CD34 חיוביים, חיוביים ל-KDR, כמו גם הפחתה לאחר אנגיופלסטיקה בתאי MPC CD45 חיוביים, CD34 חיוביים, CD133 חיוביים, CD184 חיוביים, נצפתו גם בחולים, שהתפתחו לקטיעת גפיים, במהלך הגישה כלי הדם, הקפד לאסוף את הדם מהאתר הקרוב ביותר לחסימת כלי הדם.