דגימה ועיבוד צחצוח אף באמצעות מיקרוסקופ וידאו ריסני דיגיטלי במהירות גבוהה – התאמה למגפת הקורונה

היעדר נהלי הפעלה רשמיים וסטנדרטיזציה שפורסמו מונעים ממיקרוסקופיה דיגיטלית במהירות גבוהה להיחשב כבדיקת אבחון מאשרת לדיסקינזיה ריסנית ראשונית. יתר על כן, כדי להמשיך לספק שירות אבחון במהלך משבר COVID-19 זה, פרוטוקול המיקרוסקופיה הריסית הותאם כך שיכלול אמצעי בקרת זיהום נאותים. ההערכה התפקודית הרירית באמצעות מיקרוסקופיה דיגיטלית במהירות גבוהה רגישה מאוד וספציפית לאבחון דיסקינזיה ריסנית ראשונית.

בהשוואה לבדיקות אבחון אחרות של דיסקינזיה ריסנית ראשונית, מיקרוסקופיה דיגיטלית במהירות גבוהה קלה יחסית לביצוע, זולה והתוצאות עשויות להיות זמינות תוך יום. למיקרוסקופיית וידאו דיגיטלית במהירות גבוהה יש רגישות וספציפיות גבוהות יותר לאבחון דיסקינזיה ריסנית ראשונית. נכון לעכשיו, רק מיקרוסקופ אלקטרונים ובדיקות גנטיות מוכרות כבדיקות מאשרות לדיסקינזיה ריסנית ראשונית, אך בדיקות אלה יחמיצו אבחנה של דיסקינזיה ריסנית ראשונית ב-15 עד 30% מהחולים.

מי שידגים את הליך צחצוח האף יהיה ליונל בנצ'ימול, תושב אף אוזן גרון מהמעבדה שלי. לפני איסוף דגימת האף, בקש מהמטופל לקנח את האף. לאחר ניקוי מעברי האף, בקש מהמטופל לשכב או לשבת בנוחות כשראשו מונח לאחור.

נער את המברשת בתוספת Medium 199 כדי להרטיב אותה, והנח אנדוסקופ בכניסה לאף כדי לדמיין את טורבינת האף הנחותה. הכנס את מברשת הציטולוגיה לאף, והזיז את המברשת לאחור וקדימה מספר פעמים על החלק האחורי של טורבינת האף התחתונה לפני הנסיגה. הנח את המברשת לתוך שפופרת של M199.

חותכים את החוט כך שיוכל להשתלב לחלוטין בתוך הצינור, וסוגרים מיד את הצינור. לאחר מכן, הניחו את הדגימה בשקית כפולה אטומה. תוך תשע שעות מאיסוף הדגימה, פתח את צינורות הדגימה בארון בטיחות מיקרוביולוגי, והשתמש במלקחיים לאף של Weil-Blakesley כדי לעורר את המברשת כדי לעקור את רצועות האפיתל שנאספו.

הדביקו מרווח דו צדדי על מגלשת זכוכית, והסירו את ההגנה מהמרווח. נער בעדינות את הצינור כדי לאפשר לריסים להתפשט בכל הצינור, והשתמש בפיפטה כדי להעביר כ-60 מיקרוליטר של אפיתל ריסני מאמצע הצינור לתוך המרווח. הנח החלקה מלבנית בגודל 22 על 4 מילימטר על המרווח כדי לסגור את החדר, וחטא את השקופית עם 70% אתנול לפני הוצאתו מארון הבטיחות המיקרוביולוגי

לאחר החלפת כפפות, הניחו את השקופית הזו על צלחת קופסה מחוממת וסגרו את המכסה. הוסף שמן למטרת טבילת השמן, והנח את הקופסה על הבמה של מיקרוסקופ אור זקוף או הפוך. הפעל את הקופסה ואת מחמם העדשות, והתאם את הגדרות הטמפרטורה בבקרי הקופסה ומחמם העדשות.

לאחר חמש דקות, מקם את המטרה עד שהיא רק נוגעת בהחלקת הכיסוי עם קצה העדשה. כדי לדמיין את הקצוות הריסים הנשימתיים של הדגימה, פתח את תוכנת המצלמה, ולאחר מכן השתמש במטרת המיקרוסקופ כדי לאתר ידנית את התאים בתוך הדגימה ולהקרין את התאים על הצג. בדוק שהתמונה גלויה על הצג, והתאם את הקבל ואת מיקוד העדשה לפי הצורך כדי לשפר את איכות התמונה.

כאשר אותרו רצועות האפיתל הריסי, בחר רק קצוות אפיתל ריסניים שלמים ולא מופרעים, שאורכם לפחות 50 מיקרון. הקפד להשתמש רק בקצוות רגילים או בקצוות עם בליטות קלות לניתוח פונקציונלי ריסני ולא לכלול קצוות ריסניים עם בליטות גדולות ותאים ריסניים מבודדים או תאים בודדים ללא מגע בינם לבין כל סוג תא אחר. כאשר נבחר קצה טוב, השתמש בקצב פריימים של מצלמה של 500 פריימים לשנייה כדי להקליט את קצה הריסים הפועם למשך כשתי שניות.

לאחר הקלטת מינימום של שישה קצוות טובים במבט צדדי, הסר את השקופית מהקופסה המחוממת והנח את המגלשה, החלקת הכיסוי והמרווח לשקית אטומה. לאחר מכן, הכניסו את הכפפות והמסכה לתיק, והניחו את השקית במיכל הפסולת הרפואית המסוכנת המתאים. כדי לנתח את תדירות הפעימות הריריות, פתח את ההקלטה בתוכנת ניתוח וידאו מתאימה, וחלק את הקצוות הריסים לכחמישה אזורים סמוכים של כ-10 מיקרון.

זהה ודמיין את הריסים או קבוצות הריסים בקצב פריימים מופחת ומקסימום שתי מדידות תדר פעימות ריסניות לאזור כדי להשיג מקסימום 10 מדידות תדר פעימות ריסניות לכל קצה. רשום את מספר המסגרות הנדרשות לקבוצת ריסים כדי להשלים חמישה מחזורי פעימה, והשתמש בנוסחה כדי לחשב את תדירות הפעימות הריריות. כדי לקבוע את האחוז של כל דפוס פעימות ריסני מובהק בתוך דגימה, עבור כל ריסים או קבוצת ריסים, השווה את הנתיב המדויק שלקחו הריסים במהלך מחזור פעימות מלא עם דפוס פעימות הריסים הרגיל שנצפה בניתוח המיקרוסקופיה הדיגיטלית במהירות גבוהה.

לייחס דפוס פעימות ריסני מובהק, כגון רגיל, נוקשה, חסר תנועה, אסינכרוני או דיסקיניטי ומעגלי, לכל ריס או קבוצת ריסים שנותחו. לאחר מכן, חשב את האחוז של כל דפוס פעימות ריסני מובהק בתוך כל דגימה. דפוס פעימות הריסים המיוחס לדגימה הוא דפוס פעימות הריסים הדומיננטי שנצפה.

כאן, אנו צופים בתוצאות מפורטות של ניתוח תפקודי ריסני מדגימות צחצוח האף של 14 מתנדבים בוגרים. מתוך 14 דגימות צחצוח האף הללו, נרשמו 242 קצוות ריסניים, ו-212 עמדו בקריטריוני ההכללה המוגדרים לניתוח. בסך הכל התקבלו 807 מדידות תדירות פעימות ריסניות והערכות דפוס פעימות ריסניות מהריסים או מקבוצות הריסים שנותחו.

מדד התנועתיות הממוצע היה דומה לערכים שדווחו בעבר שנצפו במתנדבים בריאים. ציון הדיסקינזיה ותדירות פעימות הריסים היו דומים לערכים שדווחו בעבר שהתקבלו בעת בחירת קצוות רגילים או קצוות עם הקרנה מינורית. כאשר משתמשים בקצוות באיכות נמוכה, מדווחים על תדירות פעימות ריסנית נמוכה יותר וציונים גבוהים יותר של דיסקינזיה.

תאי דם וליחה הנרכשים מצחצוח חזק מדי יכולים לחסום פעימות ריסים חופשיות או להסתיר ריסים מהמתבונן. לעומת זאת, אם המברשת אינה לוחצת בחוזקה על טורבינת האף התחתונה, ייתכן שהדגימה לא תכיל מספיק רצועות אפיתל ריסניות איכותיות. בנוסף, אם צחצוח האף מתבצע בחלק הקדמי של חלל האף, יתקבלו רק תאי אפיתל מעבר שאינם ריסניים.

שני ההיבטים החשובים ביותר של הפרוטוקול הם איכות צחצוח האף ובחירת שברי אפיתל איכותיים כדי למנוע תוצאה חיובית מלאה או כישלון של הטכניקה.