Name: זרימת עבודה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, אלקטרונים וקרן יונים קריוגני לכרסום ממוקד של תאים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T13:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: חקור שיטות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית לשימור מבנים תאיים בלמלות קריוגניות במהלך כרסום קרן יונים ממוקדת. שילוב זה מאפשר ניתוח מפורט באמצעות טומוגרפיה אלקטרונית קריוגנית של מבנים ביולוגיים נדירים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Komeili, A., Li, Z., Newman, D. K., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetosomes+are+cell+membrane+invaginations+organized+by+the+actin-like+protein+MamK%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Magnetosomes are cell membrane invaginations organized by the actin-like protein MamK.</a> Science. 311 (5758), 242-245 (2006).</li>
<li>Bykov, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+COPI+coat+determined+within+the+cell%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">The structure of the COPI coat determined within the cell.</a> eLife. 6, e32493(2017).</li>
<li>Mahamid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+molecular+sociology+at+the+HeLa+cell+nuclear+periphery%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Visualizing the molecular sociology at the HeLa cell nuclear periphery.</a> Science. 351 (6276), 969-972 (2016).</li>
<li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+translation+dynamics+at+atomic+detail+inside+a+bacterial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Visualizing translation dynamics at atomic detail inside a bacterial cell.</a> Nature. 610 (7930), 205-211 (2022).</li>
<li>Hampton, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlated+fluorescence+microscopy+and+cryo-electron+tomography+of+virus-infected+or+transfected+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Correlated fluorescence microscopy and cryo-electron tomography of virus-infected or transfected mammalian cells.</a> Nat Protoc. 12 (1), 150-167 (2017).</li>
<li>Oikonomou, C. M., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+electron+cryotomography%3A+Toward+structural+biology+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biochem%22%5BJournal%5D)">Cellular electron cryotomography: Toward structural biology in situ.</a> Annu Rev Biochem. 86 (1), 873-896 (2017).</li>
<li>Grimm, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+tomography+of+ice-embedded+prokaryotic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Electron tomography of ice-embedded prokaryotic cells.</a> Biophys J. 74 (2), 1031-1042 (1998).</li>
<li>Medalia, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macromolecular+architecture+in+eukaryotic+cells+visualized+by+cryoelectron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Macromolecular architecture in eukaryotic cells visualized by cryoelectron tomography.</a> Science. 298 (5596), 1209-1213 (2002).</li>
<li>Tamborrini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+native+myosin+filament+in+the+relaxed+cardiac+sarcomere%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure of the native myosin filament in the relaxed cardiac sarcomere.</a> Nature. 623 (7988), 863-871 (2023).</li>
<li>Kaplan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bdellovibrio+predation+cycle+characterized+at+nanometre-scale+resolution+with+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bdellovibrio predation cycle characterized at nanometre-scale resolution with cryo-electron tomography.</a> Nat Microbiol. 8 (7), 1267-1279 (2023).</li>
<li>Schur, F. K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+atomic+model+of+HIV-1+capsid-SP1+reveals+structures+regulating+assembly+and+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An atomic model of HIV-1 capsid-SP1 reveals structures regulating assembly and maturation.</a> Science. 353 (6298), 506-508 (2016).</li>
<li>Arnold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-specific+cryo-focused+ion+beam+sample+preparation+guided+by+3D+correlative+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Site-specific cryo-focused ion beam sample preparation guided by 3D correlative microscopy.</a> Biophys J. 110 (4), 860-869 (2016).</li>
<li>Lam, V., Villa, E. Practical approaches for cryo-FIB milling and applications for cellular cryo-electron tomography. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLam%2C+V+%22cryoEM%3A+Methods+and+Protocols%22">cryoEM: Methods and Protocols</a>. , Springer. 49-82 (2020).</li>
<li>Rigort, A., Plitzko, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-focused-ion-beam+applications+in+structural+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Cryo-focused-ion-beam applications in structural biology.</a> Arch Biochem Biophys. 581, 122-130 (2015).</li>
<li>Noble, A. J., de Marco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-focused+ion+beam+for+in+situ+structural+biology%3A+State+of+the+art%2C+challenges%2C+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Cryo-focused ion beam for in situ structural biology: State of the art, challenges, and perspectives.</a> Curr Opin Struct Biol. 87, 102864(2024).</li>
<li>Rigort, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focused+ion+beam+micromachining+of+eukaryotic+cells+for+cryoelectron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Focused ion beam micromachining of eukaryotic cells for cryoelectron tomography.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (12), 4449-4454 (2012).</li>
<li>Iancu, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+cryotomography+sample+preparation+using+the+Vitrobot%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Electron cryotomography sample preparation using the Vitrobot.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2813-2819 (2006).</li>
<li>Dobro, M. J., Melanson, L. A., Jensen, G. J., McDowall, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plunge+freezing+for+electron+cryomicroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Plunge freezing for electron cryomicroscopy.</a> Methods Enzymol. 481, 63-82 (2010).</li>
<li>Chang, Y. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlated+cryogenic+photoactivated+localization+microscopy+and+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Correlated cryogenic photoactivated localization microscopy and cryo-electron tomography.</a> Nat Methods. 11 (7), 737-739 (2014).</li>
<li>Wu, G. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-scale+3D+cryo-correlative+microscopy+for+vitrified+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">Multi-scale 3D cryo-correlative microscopy for vitrified cells.</a> Structure. 28 (11), 1231-1237.e3 (2020).</li>
<li>Lin, C., Zhang, L., Zhang, Z., Jiang, Y., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locating+cellular+contents+during+cryo-FIB+milling+using+cellular+secondary-electron+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Locating cellular contents during cryo-FIB milling using cellular secondary-electron imaging.</a> J Struct Biol. 215 (3), 108005(2023).</li>
<li>Wagner, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparing+samples+from+whole+cells+using+focused-ion-beam+milling+for+cryo-electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparing samples from whole cells using focused-ion-beam milling for cryo-electron tomography.</a> Nat Protoc. 15 (6), 2041-2070 (2020).</li>
<li>Carter, S. D., Mamede, J. I., Hope, T. J., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlated+cryogenic+fluorescence+microscopy+and+electron+cryo-tomography+shows+that+exogenous+TRIM5%CE%B1+can+form+hexagonal+lattices+or+autophagy+aggregates+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Correlated cryogenic fluorescence microscopy and electron cryo-tomography shows that exogenous TRIM5α can form hexagonal lattices or autophagy aggregates in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (47), 29702-29711 (2020).</li>
<li>Guo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+structure+of+neuronal+C9orf72+poly-GA+aggregates+reveals+proteasome+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">In situ structure of neuronal C9orf72 poly-GA aggregates reveals proteasome recruitment.</a> Cell. 172 (4), 696-705.e12 (2018).</li>
<li>Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+demonstration+of+roGFP2+as+an+environmental+sensor+for+cryogenic+correlative+light+and+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification and demonstration of roGFP2 as an environmental sensor for cryogenic correlative light and electron microscopy.</a> J Struct Biol. 214 (3), 107881(2022).</li>
<li>Sartor, A. M., Dahlberg, P. D., Perez, D., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mApple+as+a+red+fluorescent+protein+for+cryogenic+single-molecule+imaging+with+turn-off+and+turn-on+active+control+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Characterization of mApple as a red fluorescent protein for cryogenic single-molecule imaging with turn-off and turn-on active control mechanisms.</a> J Phys Chem B. 127 (12), 2690-2700 (2023).</li>
<li>Sexton, D. L., Burgold, S., Schertel, A., Tocheva, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+confocal+cryo-CLEM+with+cryo-FIB+milling+for+in+situ+imaging+of+Deinococcus+radiodurans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Res+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution confocal cryo-CLEM with cryo-FIB milling for in situ imaging of Deinococcus radiodurans.</a> Curr Res Struct Biol. 4, 1-9 (2022).</li>
<li>Dahlberg, P. D., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryogenic+super-resolution+fluorescence+and+electron+microscopy+correlated+at+the+nanoscale%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Phys+Chem%22%5BJournal%5D)">Cryogenic super-resolution fluorescence and electron microscopy correlated at the nanoscale.</a> Annu Rev Phys Chem. 72 (1), 253-278 (2021).</li>
<li>Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exploring+transient+states+of+PAmKate+to+enable+improved+cryogenic+single-molecule+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Exploring transient states of PAmKate to enable improved cryogenic single-molecule imaging.</a> J Am Chem Soc. 146 (42), 28707-28716 (2024).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ELI+trifocal+microscope%3A+A+precise+system+to+prepare+target+cryo-lamellae+for+in+situ+cryo-ET+study%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">ELI trifocal microscope: A precise system to prepare target cryo-lamellae for in situ cryo-ET study.</a> Nat Methods. 20 (2), 276-283 (2023).</li>
<li>Loginov, S. V., Boltje, D. B., Hensgens, M. N. F., Hoogenboom, J. P., vander Wee, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depth-dependent+scaling+of+axial+distances+in+light+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optica%22%5BJournal%5D)">Depth-dependent scaling of axial distances in light microscopy.</a> Optica. 11 (4), 553-568 (2024).</li>
<li>Petrov, P. N., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addressing+systematic+errors+in+axial+distance+measurements+in+single-emitter+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Addressing systematic errors in axial distance measurements in single-emitter localization microscopy.</a> Opt Express. 28 (13), 18616-18632 (2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+3D+localization+by+integrated+fluorescence+microscopy+%28iFLM%29+for+cryo-FIB-milling+and+in+situ+cryo-ET%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">Precise 3D localization by integrated fluorescence microscopy (iFLM) for cryo-FIB-milling and in situ cryo-ET.</a> Microsc Microanal. 29 (Suppl. 1), 1055-1057 (2023).</li>
<li>Perton, E., Boltje, D., Jakobi, A., Hoogenboom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Workflow+for+fluorescence-targeted+lamella+milling+from+vitrified+cells+with+a+coincident+fluorescence%2C+electron%2C+and+ion+beam+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Workflow for fluorescence-targeted lamella milling from vitrified cells with a coincident fluorescence, electron, and ion beam microscope.</a> Bio Protoc. 15 (14), e5390(2025).</li>
<li>Boltje, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryogenic%2C+coincident+fluorescence%2C+electron%2C+and+ion+beam+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">A cryogenic, coincident fluorescence, electron, and ion beam microscope.</a> eLife. 11, e82891(2022).</li>
<li>Sica, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+interference+for+the+guidance+of+cryogenic+focused+ion+beam+milling+beyond+the+axial+diffraction+limit%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Optical interference for the guidance of cryogenic focused ion beam milling beyond the axial diffraction limit.</a> bioRxiv. , (2024).</li>
<li>Dahlberg, P. D., Perez, D., Hecksel, C. W., Chiu, W., Moerner, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metallic+support+films+reduce+optical+heating+in+cryogenic+correlative+light+and+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Metallic support films reduce optical heating in cryogenic correlative light and electron tomography.</a> J Struct Biol. 214 (4), 107901(2022).</li>
<li>Lukinavicius, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorogenic+probes+for+live-cell+imaging+of+the+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fluorogenic probes for live-cell imaging of the cytoskeleton.</a> Nat Methods. 11 (7), 731-733 (2014).</li>
<li>Wang, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWang%2C+J+%22Direct+visualization+of+cellular+protein+complexes+in+situ+by+fluorescence-guided+cryo-FIB-SEM+and+cryo-ET%22">Direct visualization of cellular protein complexes in situ by fluorescence-guided cryo-FIB-SEM and cryo-ET</a>. , California Institute of Technology. (2025).</li>
<li>Last, M. G., Tuijtel, M. W., Voortman, L. M., Sharp, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selecting+optimal+support+grids+for+super-resolution+cryogenic+correlated+light+and+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Selecting optimal support grids for super-resolution cryogenic correlated light and electron microscopy.</a> Sci Rep. 13 (1), 8270(2023).</li>
<li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+electron+microscope+tomography+using+robust+prediction+of+specimen+movements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated electron microscope tomography using robust prediction of specimen movements.</a> J Struct Biol. 152 (1), 36-51 (2005).</li>
<li>Mastronarde, D. N., Held, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+tilt+series+alignment+and+tomographic+reconstruction+in+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated tilt series alignment and tomographic reconstruction in IMOD.</a> J Struct Biol. 197 (2), 102-113 (2017).</li>
<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Struct Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
<li>Meng, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UCSF+ChimeraX%3A+Tools+for+structure+building+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">UCSF ChimeraX: Tools for structure building and analysis.</a> Protein Sci. 32 (11), e4792(2023).</li>
<li>Heebner, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+learning-based+segmentation+of+cryo-electron+tomograms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Deep learning-based segmentation of cryo-electron tomograms.</a> J Vis Exp. (189), e64435(2022).</li>
<li>Klumpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+platform+for+automated+cryo-FIB+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">A modular platform for automated cryo-FIB workflows.</a> eLife. 10, e70506(2021).</li>
<li>Li, Y., Kang, D. -D., Dai, J. -Y., Wang, L. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cage+effect+of+electron+beam+irradiation+damage+in+cryo-electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22npj+Comput+Mater%22%5BJournal%5D)">The cage effect of electron beam irradiation damage in cryo-electron microscopy.</a> npj Comput Mater. 10 (1), 115(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>אקילוס 2 קריו-FIB</td><td>תרמופישר סיינטיפיק</td><td></td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/electron-microscopy/products/dualbeam-fib-sem-microscopes/aquilos-cryo-fib.html?cid=msd_ls_xseg_xmkt_sdb-aquilos_285811_na_pso_gaw_pei90m & gad_source=1& gad_campaignid=12 764255901& gbraid=0AAAAADxi_GS s7OvZmg4cgCUm0PjSiq9X9& gclid= Cj0KCQjwh5vFBhCyARIsAHBx2w xlIfYHMvqY3sSWu6oEAdUynCSf9 KRg9Jhjp7l0Dot9qTl6GyQaEo8aAiy 2EALw_wcB</td></tr><tr><td>קופסת רשת קריו תואמת Autogrid</td><td>מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים</td><td></td><td>https://www.emsdiasum.com/autogrid -compatible-cryo-grid-box?srsltid= AfmBOorQAd3esD8fLmnDDO2TvrNk cj4UINXFnPSMgrpEmkWd0H7ImUq7</td></tr><tr><td>טבעות אוטוגריד וקליפים C</td><td>ננוסופט</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/100-pack-autogrid-rings-c-clips</td></tr><tr><td>חבילת התוכנה של CLEM</td><td>קבוצת המחקר דאלברג בסטנפורד/SLAC</td><td></td><td>https://github.com/pdahlb/CLEM_software_suite.git</td></tr><tr><td>דרגונפליי 2022.1</td><td>מערכות מחקר אובייקטים</td><td></td><td>https://dragonfly.comet.tech/</td></tr><tr><td>אנזל</td><td>דלמיק ב. ו.</td><td></td><td>מערכת ENZEL היא כלי מותאם אישית ואינה זמינה מסחרית כיום</td></tr><tr><td>IMOD 4.12</td><td>אוניברסיטת קולורדו</td><td></td><td>https://bio3d.colorado.edu/imod/</td></tr><tr><td>דוור חנקן נוזלי LD4</td><td>ננוסופט</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/ld4-liquid-dewar-4-liters</td></tr><tr><td>MATLAB 2023</td><td>MathWorks</td><td></td><td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td></tr><tr><td>כלי מניפולטור מכסה סיכה</td><td>ננוסופט</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/pin-lid-manipulator-tool</td></tr><tr><td>ערכת כלים לפייתון</td><td>קבוצת המחקר דאלברג בסטנפורד/SLAC</td><td></td><td>https://github.com/pdahlb/trico_softwaresuite</td></tr><tr><td>Quantifoil R2/2, LF, רשת 200, רשת אלקטרומגנטית</td><td>מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים</td><td></td><td>https://www.emsdiasum.com/quantifoil-r-22-lf-200-mesh-gold</td></tr><tr><td>EM סידורי</td><td>אוניברסיטת קולורדו בולדר</td><td></td><td>https://bio3d.colorado.edu/SerialEM/</td></tr><tr><td>ספינת סטנדרט Spearlab (דואר העברה)</td><td>ננוסופט</td><td></td><td>https://www.nanosoftmaterials.com/product-page/spearlab-standard-vessel</td></tr><tr><td>פינצטה</td><td>מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים</td><td></td><td>https://www.emsdiasum.com/style-3sa</td></tr></tbody></table>

זרימת עבודה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, אלקטרונים וקרן יונים קריוגני לכרסום ממוקד של תאים

Workflow Using a Cryogenic Coincident Fluorescence, Electron, and Ion Beam Microscope for Targeted Milling of Cells

Cryogenic focused ion beam milling with scanning electron microscopy (CryoFIB-SEM) has become the&#160;dominant approach for preparing sub-200-nm thick ...

workflow-using-cryogenic-coincident-fluorescence-electron-ion-beam

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנחנו כאן להמחיש כיצד להשתמש אלקטרונים cryotomography (ECT) כדי ללמוד את ultrastructure של תאים חיידקיים של כמעט ילידי מדינות, כדי "macromolecular" (~ 4 ננומטר) החלטה.

אלקטרונים Cryotomography של תאים חיידקיים

Cryo אלקטרונים מיקרוסקופים, או סורק (SEM) או הילוכים (TEM), נמצא בשימוש נרחב לאפיון של דגימות ביולוגיות או חומרים אחרים עם תכולת מים גבוהה 1. SEM / אלומת יונים ממוקדת (FIB) משמשת לזיהוי תכונות של עניין בדגימות ולחלץ lamella להעברה לcryo-TEM דק, אלקטרונים שקופים.

Cryo-אלקטרון מתכוון בהכנה מיקרוסקופית דגימה של אלומת יונים ממוקדת

כאן אנו מתארים פרוטוקולים לשבש בתאי יונקים ידי כרסום מצב מוצק בטמפרטורה קריוגני, לייצר תמצית התא מן אבקת התא וכתוצאה מכך, ולבודד קומפלקסים חלבונים של עניין על ידי לכידת זיקה על חרוזים פאראמגנטיים בקנה מידה מיקרון מצמידים נוגדנים.

לכידת חלבון זיקה מורכבת מ בתאי יונקי Cryomilled

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור תרבות התא על ממברנות הסיליקון ניטריד ו-לקפוא לפני לפני הדמיה רנטגן קרני הקרינה עם סינכרוטרון nanoprobe רנטגן הקריוגני. כאשר רק טמפרטורת החדר בניתוח ננו מסופק, הדגימות הקפואות יכול להיות נוסף מיובש להקפיא. אלה הם צעדים קריטיים כדי לקבל מידע על הרכב היסודות תאיים.

תרבות התא על ממברנות הסיליקון נידהר וקריופיקציה עבור סינכרוטרון X-ray פלואורסצנטית ננו-ניתוח

טכניקות קרן יונים ממוקדת קריוגנית (FIB) ומיקרוסקופיית אלקטרונים סורקת (SEM) יכולות לספק תובנות מפתח לגבי הכימיה והמורפולוגיה של ממשקים מוצקים-נוזליים שלמים. שיטות להכנת מפות ספקטרוסקופיות באיכות גבוהה של פיזור אנרגיה (EDX) של ממשקים כאלה מפורטות, תוך התמקדות בהתקני אגירת אנרגיה.

אפיון בקנה מידה ננומטרי של ממשקים נוזליים-מוצקים על ידי צימוד כרסום קרן יונים ממוקד קריו עם מיקרוסקופיית אלקטרונים סורקת וספקטרוסקופיה

הפרוטוקול המוצג כאן מתאר את השימוש ב- Spotiton, מערכת רובוטית חדשנית, כדי לספק שתי דוגמאות של עניין על רשת ננו-חוטים עצמית המערבבת לפחות 90 אלפיות השנייה לפני vitrification בקריוגן נוזלי.

הכנת רשת מיקרוסקופית קריו-אלקטרון למחקרים שנפתרו בזמן באמצעות מערכת רובוטית חדשנית, Spotiton

פרוטוקול זה מדגים כיצד לדמיין דגימות ביולוגיות שנשמרו על ידי קריו באמצעות מיקרוסקופיית תאורה מובנית קריו. אנו מדגימים את המתודולוגיה על ידי הדמיית הציטוסקלטון של תאי U2OS.

איסוף נתונים מיקרוסקופי תאורה מובנה קריו מתאים שהשתמרו בהקפאה

שימוש בכרסום קרן יונים ממוקדת כדי לייצר זגוגית על הרשת מדגימות ביולוגיות קפואות עבור טומוגרפיה קריו-אלקטרונית.

הכנת Lamellae מדגימות ביולוגיות זגוגית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק קרן כפולה עבור טומוגרפיה קריו-אלקטרונים

אנו מציגים פרוטוקול להכנת lamella של דגימות ביולוגיות קפואות לצלול על ידי מיקרו-מכונות קרן יונים ממוקדות קריו למחקרים מבניים ברזולוציה גבוהה של מקרומולקולולים במקום עם טומוגרפיה קריו-אלקטרונית. הפרוטוקול המוצג מספק קווים מנחים להכנת lamellae באיכות גבוהה עם רבייה גבוהה לאפיון מבני של macromolecules בתוך cerevisiae Saccharomyces.

הכנה ומיקרו-מכונות קריו-FIB של סרביסיה Saccharomyces עבור טומוגרפיה קריו-אלקטרון

כאן, אנו מציגים צינור לכרסם קרן יונים ממוקדת מתאם תלת-ממדי על הנחיית הכנת דגימות תאיות לטומוגרפיה קריו-אלקטרונית. המיקום התלת-ממדי של חלבונים בעלי תיוג פלואורסצנטי נקבע תחילה על ידי מיקרוסקופ קריו-פלואורסצנטי, ולאחר מכן מיועד לכרסום. הפרוטוקול מתאים לתאי יונקים, שמרים וחיידקים.

הכנת הדגימה על ידי כרסום קרן יונים ממוקדת תלת-ממדית לטומוגרפיית קריו-אלקטרונים ברזולוציה גבוהה

פרוטוקול זה מתקן את טומוגרפיית הקריו-אלקטרון (קריו-ET) לרקמות עבות על ידי שילוב הקפאה בלחץ גבוה (HPF) עם שיטת הוופל, הרמת קרן יוני מוקד קריוגנית (crio-FIB), ורכישה מקבילה סימטרית במינון, מה שמניב למלות דקות ודגימות מזגוגות לניתוח שכפול בשטח בהיפוקמפוס העכבר.

תהליך עבודה של טומוגרפיית קריו-אלקטרון לרקמות עבות שהודגם בהיפוקמפוס של עכבר

חקור שיטות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית לשימור מבנים תאיים בלמלות קריוגניות במהלך כרסום קרן יונים ממוקדת. שילוב זה מאפשר ניתוח מפורט באמצעות טומוגרפיה אלקטרונית קריוגנית של מבנים ביולוגיים נדירים.

זרימת עבודה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, אלקטרונים וקרן יונים קריוגני לכרסום ממוקד של תאים

גלה סרטונים נוספים