Name: מידול זיהום מתמשך של Pseudomonas aeruginosa בזחלי דג זברה פצועים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: למד מידול זיהום מתמשך של Pseudomonas aeruginosa בזחלי דג זברה פצועים. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לבחון יעילות תרופות אנטיביוטיות ולחקור סבילות לאנטיביוטיקה בזיהומים כרוניים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כל הניסויים בדגי הזברה המתוארים במחקר הנוכחי נערכו באוניברסיטת מונפלייה על פי עקרונות 3Rs - החלפה, הפחתה ועידון - בהתאם להנחיות האיחוד האירופי לטיפול בחיות מעבדה ואושרו על ידי Direction Sanitaire et Vétérinaire de l'Hérault ו- Comité d'Ethique pour l'utilisation d'animaux à des fins scientifiques תחת התייחסות CEEA-LR-B4-172-37. כל ניסויי ההדבקה בוצעו בעוברים עד 5 ימים לאחר ההפריה. גידול דג הזברה הבוגר (Danio rerio) מדגי AB או Golden Lines עמד בהנחיות הבינלאומיות המפורטות בהנחיית הגנת בעלי החיים של האיחוד האירופי 2010/63/EU. מתקן דג הזברה של אוניברסיטת מונפלייה עם תנאים סטנדרטיים המוגדרים כאור של 12 שעות: מחזור חושך, מיכל פוליקרבונט 3.5 ליטר (מקסימום 22 דגים לכל מיכל) המחובר למערכת מחזור עם מליחות של 4% / מוליכות 400 מיקרוש וטמפרטורת מים של 28 מעלות צלזיוס. הדגים הוזנו פעמיים ביום במזון דגים.
1. הכנת פתרונות
<ol>
	<li>הכן פתרון עבודה 1x למי דגים עם או בלי מתילן כחול לגידול עוברי דג זברה (ראה טבלה 1).</li>
	<li>הכן 20x מלאי (0.4%) ו-1x תמיסת הרדמה טריקאין עובדת כמתואר בטבלה 1. כדי למנוע הקפאה והפשרה חוזרות ונשנות של תמיסת המלאי, הכינו 10 מ"ל מנות של 20x טריקאין ואחסנו בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>הכן תמיסת טריטון 2% מדוללת בתמיסת מלח חוצצת פוספט 1x (PBS; טבלה 1).</li>
</ol>
2. הכנת חיסון של  P. aeruginosa פלואורסצנטי המבטא GFP באופן קונסטרוקטיבי
הערה: כל העבודה עם P. aeruginosa נעשית עם אמצעי זהירות BSL-2 בארון בטיחות ביולוגית. יש לשנות גנטית את זני P. aeruginosa כדי לבטא באופן מכונן מדווח פלואורסצנטי, כגון GFP (כפי שמשמש כאן ומתוארב-13). מומלץ מאוד להשתמש בזנים עם מדווח פלואורסצנטי מקודד כרומוזומלי כדי למנוע אובדן פלסמיד במקרה של מדווח פלואורסצנטי מקודד פלסמיד.
<ol>
	<li>יומיים לפני ההדבקה, יש לצאת מ-80 מעלות צלזיוס מלאי של P. aeruginosa מהונדס גנטית המבטא GFP על לוחות אגר LB (טבלה 1) ולדגור למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>בדוק את הקרינה של המושבות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי (הגדלה 6x) כדי לחסן מושבת GFP+P. aeruginosa ב-1 מ"ל של מרק LB (טבלה 1) ולגדול בן לילה ב-37 מעלות צלזיוס עם טלטול (180 סל"ד).</li>
	<li>ביום ההדבקה, יש לדלל את תרבית הלילה הנ"ל של P. aeruginosa בשעה 1:20 ל-5 מ"ל של מרק LB טרי. מגדלים את החיידקים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם ניעור (180 סל"ד) עד שהתרבית מגיעה ל-OD600 = 0.8. זה אמור לקחת בערך 2-3 שעות.</li>
	<li>צנטריפוגה את תרבית החיידקים למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר (RT) ב 3584 x גרם. הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את הגלולה ב-4 מ"ל מי דגים ללא מתילן כחול.</li>
	<li>התאם את נפח התרבות עם מי דגים כך שיהיה 7 x 107 עד 1 x 108 CFU/mL. זה מתאים ל-OD600 של כ-0.15 (שיותאם לכל זן).</li>
	<li>כדי לכמת את החיסון, בצע דילול סדרתי של תרחיף החיידקים, צלחת 20 מיקרוליטר של דילול 10-4 על צלחת אגר LB, ודגירה למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>ספרו מושבות GFP+ תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לקבוע את ה-CFUs של החיסון.</li>
</ol>
3. איסוף והכנה של עוברי דג הזברה
<ol>
	<li>3 ימים לפני ניסוי טבילת החיידקים, הקימו זוגות רבייה של דגי זברה. הניחו זכר ונקבה רבייה במיכל הכלאה.</li>
	<li>למחרת בבוקר, אוספים את הביצים לאחר ההפריה בעזרת מסננת דקה. מניחים את הביצים שנאספו בצלחת פטרי המכילה מי דגים עם מתילן כחול.</li>
	<li>כדי למנוע זיהום, הוסף טיפה אחת של אקונומיקה לצלחת הפטרי. לאחר 5 דקות, החלף את מי הדגים בכחול מתילן כדי להסיר את האקונומיקה.</li>
	<li>השליכו ביציות עם התפתחות עוברית לא תקינה (ביציות לא מופרות דומות לשלב ביצית של תא אחד) או ביציות מתות (מראה לבן).</li>
	<li>בבוקר ההדבקה (ב-2 dpf), יש לפרק את העוברים בשני מלקחיים דקים מאוד תחת מיקרוסקופ סטריאו (הגדלה פי 11). קרעו את הכוריון בעזרת מלקחיים מבלי לצבוט את העובר על מנת לשחרר אותו.</li>
	<li>מניחים את העוברים המפורקים בצלחת פטרי המכילה דגים עם מתילן כחול. דוגרים את הכלים בחום של 28 מעלות צלזיוס עד לזיהום.</li>
</ol>
4. פגיעה בעובר
<ol>
	<li>להרדים עוברי דג זברה במי דגים ללא מתילן כחול, המכילים 0.02% טריקאין, כ-5 דקות לפני הפציעה בצלחת תרבית תאים (35 מ"מ על 10 מ"מ). העוברים כבר לא זזים ואינם מגיבים לגירויים.</li>
	<li>הנח מחטים של 25 גרם על גבי שני מקלות אכילה כדי להקל על הטיפול במחטים.</li>
	<li>תחת מיקרוסקופ סטריאו, הסר עוברים עם התפתחות לא תקינה או מתים. בעזרת תנועה מעגלית של המנה, אספו את כל העוברים במרכז.</li>
	<li>בודד עוברים בזה אחר זה באמצעות שתי מחטים במצב אנכי (ראש למטה - זנב למעלה) והנח את המחט השמאלית בזנב כדי לשמור עליה ישרה. חותכים את הסנפיר בקצה החריץ בעזרת המחט הימנית. בצע את החיתוך במכה אחת. אין לחרוג מ-10 דקות בין חיתוך לטבילה בתמיסת החיידקים.</li>
</ol>
5. זיהום של עוברים פצועים
<ol>
	<li>מתחת לארון הבטיחות הביולוגי מסוג II, מערבל והוסף את תמיסת P. aeruginosa בערך 1 x 107 CFU/mL לצלחת של 6 בארות.</li>
	<li>אסוף את העוברים הפגועים עם פיפטת זכוכית פסטר חד פעמית והוסף אותם לתמיסת החיידקים מתחת לעמדת הבטיחות המיקרוביולוגית. דגרו את הצלחת בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס למשך שעה וחצי. הערה: אם יש צורך במספר רב של זחלים נגועים, הכינו קבוצות של כ-50 זחלים, צרו את הפצע, טבלו אותם וחזרו על הפעולה עבור הקבוצה הבאה.</li>
	<li>לאחר ההדבקה יש לשטוף את העוברים תחת עמוד הבטיחות המיקרוביולוגי כמתואר להלן.<ol>
		<li>מעבירים את העוברים בעזרת פיפטת זכוכית לשטיפה ל -10 מ"ל מי דגים ללא מתילן כחול, ומוסיפים כמה שפחות נוזלים, למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>העבירו שוב את העוברים הנגועים באמצעות פיפטת זכוכית לשטיפה שנייה ל-4 מ"ל מי דגים ללא מתילן כחול למשך מספר דקות.</li>
		<li>העבירו 24 עוברים נגועים בנפרד לצלחת מרובת בארות עם 1 מ"ל מי דגים ללא מתילן כחול.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>מניחים את הצלחות בקופסת פלסטיק בחממה בטמפרטורה של 28 מעלות צלזיוס. הרטיבו את הקופסה (עם מגבות נייר לחות, למשל) כדי להגביל את האידוי.</li>
</ol>
6. הישרדות של עוברים נגועים
<ol>
	<li>עבור מחקרי הישרדות עוברים, בדוק את הכדאיות במיקרוסקופ סטריאו ב-18 שעות, 24 שעות ו-48 שעות לאחר ההדבקה (hpi). עובר נחשב מת כאשר הלב וזרימת הדם נפסקים.</li>
	<li>ייצוג שיעורי תמותה/הישרדות באמצעות ייצוגים גרפיים של גרם מדרגות קפלן-מאייר (GraphPad Prism 8.3.0) וניתוח הנתונים באמצעות דירוג לוג או מבחנים סטטיסטיים מתאימים אחרים.</li>
</ol>
7. ספירת עומס חיידקים בעוברים נגועים (איור 1)
<ol>
	<li>בצע קביעת CFU מעוברים נגועים בארבע נקודות זמן שונות: 1.5 hpi, כלומר מיד לאחר ההדבקה, ולאחר כל שטיפה ב-24, 48 ו-72 hpi עם 5 עוברים לנקודת זמן. בצע את כל השלבים תחת עמדת הבטיחות המיקרוביולוגית.</li>
	<li>התכוננו לכל זחל נגוע 1.5 מ"ל צינורות מיקרו-צנטריפוגה המכילים 95 מיקרוליטר של 1x PBS. נפח הזחלים הוא בסביבות 5 מיקרוליטר.</li>
	<li>העבירו את הזחלים לצלחת של 6 בארות עם 4 מ"ל מי דגים ללא מתילן כחול כדי לבצע שטיפה ולחסל חיידקים פלנקטוניים.</li>
	<li>מניחים כל עובר בצינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל PBS, ומוסיפים כמה שפחות נוזלים. פשוט געו בפיפטת הזכוכית המכילה את הזחלים על פני השטח של ה-PBS כדי לאפשר לזחלים לשקוע לתוך צינור המיקרו-צנטריפוגה מבלי להוסיף נוזל.</li>
	<li>מועכים את העוברים בנפרד באמצעות עלי בצד צינור המיקרו-צנטריפוגה. שמור את העלי בתוך הצינור. קבע את נקודת הקצה כאשר לא נותר עובר שלם.</li>
	<li>מרימים את העלי ומוסיפים 100 מיקרוליטר PBS-Triton 2% כדי לשטוף את כל החיידקים שנותרו מהעלי (הריכוז הסופי הוא 1%). מערבולת ומחכה 10 דקות. אין לעבד יותר מחמישה עוברים בו זמנית.</li>
	<li>זרוק 3x, 10 מיקרוליטר של ליזטים לא מדוללים על צלחות אגר LB עבור כל עובר. בצע דילול סדרתי של הליזטים בצלחת של 96 בארות עד שמגיעים לדילול של 10-3 באמצעות פיפטה רב ערוצית. זרוק 3x, 10 מיקרוליטר של דילול 10-1, 10-2 ו-10-3 ליד הלא מדוללים על צלחות אגר LB ודגירה על הצלחות למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>ספרו מושבות פלואורסצנטיות של כל דילול תחת המיקרוסקופ וחישבו את ה-CFU לכל עובר נגוע.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68464/68464fig1.jpg"> 
איור 1: ציר זמן ניסיוני להערכת אלימות והתמדה חיידקית בעובר דג הזברה. קיצורים: CFU = יחידות יוצרות מושבה, hpi = שעות לאחר ההדבקה. הציור נוצר עם BioRender.com. הנתון שונהמ-13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68464/68464fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
8. בדיקת טיפול כנגד זיהום מתמשך (איור 2)
<ol>
	<li>הכן תמיסות אנטיביוטיות בריכוז מעכב מינימלי (MIC) פי 40 לזן P. aeruginosa . לפני הניסוי יש לבדוק שריכוז האנטיביוטיקה הנבחר אינו רעיל לעובר.</li>
	<li>בצע את שלבים 7.1 ו- 7.2. מניחים 1 מ"ל מי דגים עם אנטיביוטיקה בצלחת של 24 בארות ומבצעים בקרה ללא אנטיביוטיקה.</li>
	<li>העבירו חמישה עוברים משלב הכביסה בכל טיפול לצלחת של 24 בארות, והוסיפו כמה שפחות נוזלים.</li>
	<li>דגירה עם האנטיביוטיקה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. חזור לשלב 7.3. לכמת את העומס החיידקי לאחר הטיפול.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68464/68464fig2.jpg"> 
איור 2: הליך ניסיוני המשמש להערכת היעילות של טיפולים אנטיביוטיים על עוברים נגועים. קיצורים: ATB 30' = טיפול אנטיביוטי למשך 30 דקות, CFU = יחידות יוצרות מושבה, hpi = שעות לאחר ההדבקה. הציור נוצר עם BioRender.com. הנתון שונהמ-13. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68464/68464fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.</a>

<ol><li>Garcia-Clemente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Pseudomonas+aeruginosa+Infection+on+Patients+with+Chronic+Inflammatory+Airway+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of Pseudomonas aeruginosa Infection on Patients with Chronic Inflammatory Airway Diseases.</a> J Clin Med. 9 (12), 3800(2020).</li>
<li>Serra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+wound+infections%3A+the+role+of+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Anti-Infect%22%5BJournal%5D)">Chronic wound infections: the role of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.</a> Expert Rev Anti-Infect. 13 (5), 605-613 (2015).</li>
<li>Tacconelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery%2C+research%2C+and+development+of+new+antibiotics%3A+the+WHO+priority+list+of+antibiotic-resistant+bacteria+and+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Discovery, research, and development of new antibiotics: the WHO priority list of antibiotic-resistant bacteria and tuberculosis.</a> Lancet Infect Dis. 18, 318-327 (2018).</li>
<li>La Rosa, R., Johansen, H. K., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+Bacterial+Infections%2C+Antibiotic+Treatment+Failure%2C+and+Microbial+Adaptive+Evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Persistent Bacterial Infections, Antibiotic Treatment Failure, and Microbial Adaptive Evolution.</a> Antibiotics. 11 (3), 419(2022).</li>
<li>Kember, M., Grandy, S., Raudonis, R., Cheng, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-Canonical+Host+Intracellular+Niche+Links+to+New+Antimicrobial+Resistance+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Non-Canonical Host Intracellular Niche Links to New Antimicrobial Resistance Mechanism.</a> Pathogens. 11 (2), 220(2022).</li>
<li>Lorenz, A., Pawar, V., Häussler, S., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+host-pathogen+interactions+from+state-of-the-art+animal+models+of+respiratory+Pseudomonas+aeruginosa+infections%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Insights into host-pathogen interactions from state-of-the-art animal models of respiratory Pseudomonas aeruginosa infections.</a> FEBS Lett. 590, 3941-3959 (2016).</li>
<li>Reyne, N., McCarron, A., Cmielewski, P., Parsons, D., Donnelley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+bead+or+not+to+bead%3A+A+review+of+Pseudomonas+aeruginosa+lung+infection+models+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">To bead or not to bead: A review of Pseudomonas aeruginosa lung infection models for cystic fibrosis.</a> Front Physiol. 14, 1104856(2023).</li>
<li>Pletzer, D., Mansour, S. C., Wuerth, K., Rahanjam, N., Hancock, R. E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Mouse+Model+for+Chronic+Infections+by+Gram-Negative+Bacteria+Enabling+the+Study+of+Anti-Infective+Efficacy+and+Host-Microbe+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">New Mouse Model for Chronic Infections by Gram-Negative Bacteria Enabling the Study of Anti-Infective Efficacy and Host-Microbe Interactions.</a> mBio. 8, e00140-e00217 (2017).</li>
<li>Pont, S., Blanc-Potard, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Embryo+Infection+Model+to+Investigate+Pseudomonas+aeruginosa+Interaction+With+Innate+Immunity+and+Validate+New+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Embryo Infection Model to Investigate Pseudomonas aeruginosa Interaction With Innate Immunity and Validate New Therapeutics.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 745851(2021).</li>
<li>Nogaret, P., El Garah, F., Blanc-Potard, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Infection+Protocol+in+Zebrafish+Embryo+to+Assess+Pseudomonas+aeruginosa+Virulence+and+Validate+Efficacy+of+a+Quorum+Sensing+Inhibitor+In+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">A Novel Infection Protocol in Zebrafish Embryo to Assess Pseudomonas aeruginosa Virulence and Validate Efficacy of a Quorum Sensing Inhibitor In Vivo.</a> Pathogens. 10 (4), 401(2021).</li>
<li>Phennicie, R. T., Sullivan, M. J., Singer, J. T., Yoder, J. A., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+resistance+to+Pseudomonas+aeruginosa+infection+in+zebrafish+is+mediated+by+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific resistance to Pseudomonas aeruginosa infection in zebrafish is mediated by the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.</a> Infect Immunity. 78 (11), 4542-4550 (2010).</li>
<li>Kumar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+Transcriptomics+of+Host-Pathogen+Interaction+of+Cystic+Fibrosis+Isolate+Pseudomonas+aeruginosa+PASS1+With+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Dual Transcriptomics of Host-Pathogen Interaction of Cystic Fibrosis Isolate Pseudomonas aeruginosa PASS1 With Zebrafish.</a> Front Cell Infect Microbiol. 8, 406(2018).</li>
<li>Pont, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Pseudomonas+aeruginosa+persist+and+evade+antibiotic+treatment+in+a+wound+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Intracellular Pseudomonas aeruginosa persist and evade antibiotic treatment in a wound infection model.</a> PLoS Pathogens. 21 (2), e1012922(2025).</li>
<li>Facchini, M., De Fino, I., Riva, C., Bragonzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+Term+Chronic+Pseudomonas+aeruginosa+Airway+Infection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice.</a> J Vis Exp. (85), e51019(2014).</li>
<li>Bianconi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+genomics+and+biological+characterization+of+sequential+Pseudomonas+aeruginosa+isolates+from+persistent+airways+infection%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genom%22%5BJournal%5D)">Comparative genomics and biological characterization of sequential Pseudomonas aeruginosa isolates from persistent airways infection.</a> BMC Genom. 16, 1105(2015).</li>
<li>Buyck, J. M., Tulkens, P. M., Van Bambeke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacodynamic+evaluation+of+the+intracellular+activity+of+antibiotics+towards+Pseudomonas+aeruginosa+PAO1+in+a+model+of+THP-1+human+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicro+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Pharmacodynamic evaluation of the intracellular activity of antibiotics towards Pseudomonas aeruginosa PAO1 in a model of THP-1 human monocytes.</a> Antimicro Agents Chemother. 57 (5), 2310-2318 (2013).</li>
<li>Volpe, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+classification+of+representative+fluoroquinolones+by+a+cell+culture+method%5BTitle%5D)+AND+%22Aaps+Pharmsci%22%5BJournal%5D)">Permeability classification of representative fluoroquinolones by a cell culture method.</a> Aaps Pharmsci. 6 (2), 1-6 (2004).</li>
<li>Pang, Z., Raudonis, R., Glick, B. R., Lin, T. J., Cheng, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+resistance+in+Pseudomonas+aeruginosa%3A+mechanisms+and+alternative+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa: mechanisms and alternative therapeutic strategies.</a> Biotechnol Adv. 37 (1), 177-192 (2019).</li>
<li>Lamberti, Y., Surmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intracellular+phase+of+extracellular+respiratory+tract+bacterial+pathogens+and+its+role+on+pathogen-host+interactions+during+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">The intracellular phase of extracellular respiratory tract bacterial pathogens and its role on pathogen-host interactions during infection.</a> Curr Opin Infect Dis. 34 (3), 197-205 (2021).</li>
</ol>

<a href="https://app.jove.com/t/6639">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/68464">10.3791/68464</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/68464">Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae</a>. The Authors&#160;section was&#160;updated.

Erratum: Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae

<table><tbody><tr><td>אתיל-3-אמינובנזואט מתאן סולפונאט</td><td>סיגמא</td><td>E50521</td><td></td></tr><tr><td>גלולת בוכנה</td><td>Eppendorf, Dutscher</td><td>33522</td><td></td></tr><tr><td>מלחי ים</td><td>אינסטנט אוקיינוס, מערכות אקווריום&nbsp; &nbsp;</td><td>218035</td><td></td></tr><tr><td>טריטון</td><td>יורומדקס</td><td>2000-ב</td><td></td></tr></tbody></table>

מידול זיהום מתמשך של pseudomonas aeruginosa בזחלי דג זברה פצועים

Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae

עובר דג הזברה הוא מודל מתאים לניטור זיהום מתמשך עם מבודדי P. aeruginosa CF השתמשנו במצב טבילה של עוברים פצועים כדי להעריך in vivo את האלימות של שלושה מבודדי CF (A6520, B6513 ו-C6490)9. הערכנו גם את ההתנהגות של מבודד CF מאוחר המאופיין היטב, RP73, הידוע בקולוניזציה ארוכת טווח בדרכי הנשימה של עכברים14,15. כל ארבעת מבודדי ה-CF היו מוחלשים מאוד בהשוואה לזן הייחוס PAO1 (<st...

מידול זיהום מתמשך של Pseudomonas aeruginosa בזחלי דג זברה פצועים

Pseudomonas aeruginosa is a major human pathogen, particularly in chronic wound infections and chronic pulmonary infections (especially in patients with ...

modeling-persistent-pseudomonas-aeruginosa-infection-wounded

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

עוברי דג הזברה שקוף הוכיחו המארחים מודל שימושי כדי לחזות אינטראקציות למידה תפקודית בין תאים חיסוניים מולדים פתוגנים חיידקיים תאיים,...

זיהום של עוברים דג הזברה עם פתוגנים חיידקיים תאיים

ההתפתחות המהירה, גודל קטן השקיפות של דג הזברה הם יתרונות עצומים למחקר שליטה החיסון המולדת של...

הדמיה לא פולשנית של פטרת מופצת הזחלים דג הזברה

סרטון זה מתאר טכניקה של הזרקה תוך צפקית, שיטה להעברת תמיסות לחלל הבטן של דגי זברה בוגרים.

הזרקה תוך צפקית: שיטה להעברת תמיסה לחלל הבטן של דג זברה בוגר

מקור: Luukinen, H. ואחרים. מידול שחפת בדג זברה בוגר נגוע במיקובקטריום מרינום .  J. Vis. Exp. (2018).

הערכת תפקיד חסינות המארח בזיהום מיקובקטריאלי באמצעות מודל דג זברה

מקור: פלורס, א. ואחרים. שימוש בפרוטוזואן Paramecium caudatum ככלי לזיהומים המועברים במזון בזחלי דגי זברה. J. Vis. Exp. (2019).הסרטון הזה מדגים את השיטה לקביעת מודל זיהום חיידקי במעי המועבר במזון לזחלי דגי זברה על ידי האכלה בפרמסיה הנגועה ב-E. coli פלואורסצנטי.

מידול זיהום במעי בזחלי דגי זברה באמצעות חיידקים המועברים במזון

in vivo אינטראקציות מרחביות-זמניות של פתוגן והגנות חיסוניות ברמת הרירית אינן ניתנות להדמיה בקלות במארחים קיימים של בעלי חוליות. השיטה המוצגת כאן מתארת פלטפורמה רב-תכליתית לחקר קנדידה רירית בבעלי חוליות חיים תוך שימוש בכיס השחייה של דג הזברה הצעיר כאתר זיהום.

דוגמנות רירית פטרת בזחל דג הזברה על ידי הזרקת Swimbladder

עוברי דג זברה שקופים אופטית נמצאים בשימוש נרחב כדי לחקור ולדמיין בזמן אמת את האינטראקציות בין מיקרואורגניזמים פתוגניים לתאי החיסון המולדים. מיקרו-הזרקה של Mycobacterium abscessus, בשילוב עם הדמיה פלואורסצנטית, משמשת לבחינת מאפיינים פתוגניים חיוניים כגון היווצרות חבל בעוברי דג זברה.

פענוח ופתוגנזה הדמיה והשתרגות<em&gt; Abscessus Mycobacterium</em&gt; בעוברי דג הזברה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול שחפת אנוש מודל דג זברה למבוגרים באמצעות הפתוגן הטבעי שלה, התחממות עולמית. חילוץ DNA ו- RNA של האיברים הפנימיים של דג זברה נגוע יכול לשמש כדי לחשוף את שהסכום הכולל mycobacterial טוען את הדגים, של המחשב המארח תגובות מערכת החיסון עם qPCR.

מידול שחפת ב דג נגוע זברה בוגרת התחממות עולמית

המחקר הנוכחי מתאר מודל העובר דג זברה ויזואליזציה ויוו וניתוח intravital לזיהום הקשורים biomaterial לאורך זמן מבוסס על קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ. מודל זה היא מערכת מבטיח משלימים מודלים בעלי חיים יונקים כגון עכבר מודלים לימוד הקשורים biomaterial זיהומים ויוו.

מודל העובר דג זברה, ויזואליזציה Vivo, ניתוח Intravital של Biomaterial-הקשורים Staphylococcus aureus זיהום

אנו מתארים פרוטוקול חיסונים מושהה ליצירת זיהומים כרוניים הפצע בעכברים המוסמכים.

מדבקת החיסון נגד הידבקות כרונית בנגיף הדלקת בפצע

פרוטוקול זה מתאר מודל זיהום אספרגילוס בזחלים זברה. נבגי אספרגילוס הם microinjected לתוך hindbrain של זחלים, טיפול כימי משמש כדי לגרום לדיכוי המערכת החיסונית. התקדמות הזיהום מנוטרת באמצעות מערך הדמיה יומי כדי לפקח על צמיחה פטרייתית ותגובות חיסוניות, כמו גם ספירה של נבגים חיים על ידי ציפוי יחידה יוצר מושבה.

זיהום זחלי זברה עם נבגי אספרגילוס לניתוח אינטראקציות מארח-פתוגן

למד מידול זיהום מתמשך של Pseudomonas aeruginosa בזחלי דג זברה פצועים. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לבחון יעילות תרופות אנטיביוטיות ולחקור סבילות לאנטיביוטיקה בזיהומים כרוניים.

מידול זיהום מתמשך של Pseudomonas aeruginosa בזחלי דג זברה פצועים

גלה סרטונים נוספים