Summary
우리는 유전자 조작된 조 혈 모 세포의 악성 잠재력을 평가 하기 위해 조 혈 모 세포 이식 (HSCT)의 사용을 설명 합니다. HSCT 소설 치료를 평가 하 형성 증후군 (MDS) 또는 백혈병 생쥐의 대형 코 호트 생성 뿐만 아니라 다양 한 악성 조 혈 모 세포에 vivo에서 평가 대 한 유용 합니다.
Abstract
형성 증후군 (MDS) 효과 조, 말 초 혈액 cytopenias, 발육 이상, 급성 백혈병에 변환에 대 한 성향에 의해 정의 되는 조 혈 줄기 세포 장애의 다양 한 그룹입니다. NUP98-HOXD13 (NHD13) 유전자 변형 마우스 주변 혈액 cytopenias, 발육 이상, 및 급성 백혈병 변환 인적 MDS 정리. 우리는 이전는 MDS 옮겨질 수 있었다 MDS와 유전자 조작된 마우스에서 야생-타입 받는 사람에 게 이식 MDS 골 nucleated 세포 (BMNC)에 의해 설명 했다. 더 명확 하 게 근원의 MDS 셀 이해, 특정 이식 하는 방법을 개발 했습니다, 그리고 immunophenotypically 조 혈 하위 집합을 정의 합니다. 이 문서에서 우리는 분리 하 고 조 혈 줄기와 조상 세포의 특정 인구를 이식 하는 과정을 설명 합니다. 따라 이식, 이식의 효율성 및 기증자 MDS 셀의 지 속성을 평가 하는 방법 설명 합니다.
Introduction
형성 증후군 (MDS) 대표 클론 혈액 장애 효과 조, 발육 이상의 morphologic 증거 및 급성 골수성 백혈병 (AML)1,2로 변환에 대 한 성향 특징의 다양 한 세트 ,,34. 효과 조 골 수에서 성숙 체포 및 hypercellular 골1,3에 불구 하 고 주변 혈액 cytopenias 결과 인식 됩니다. MDS의 발병 률 각종 2-12의 경우는 미국에서 매년 100, 000 명 당으로 추정 하 고 MDS의 발병 률 증가 나이, 노화 미국 인구3, 주어진 이해 하는 중요 한 조건 만들기 5. MDS의 대부분의 경우는 더 명확한 병 인, MDS의 경우 벤젠, 그리고 암 화학요법6같은 용 매를 포함 하 여 알려진된 차적인 에이전트에 노출 때문에 생각 된다.
MDS 환자 일반적으로 MDS 셀7에 돌연변이 인수 했습니다. 비록 상대적으로 드문, MDS 환자 수 유전자 NUP98, EVI1, RUNX1, MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman) 등을 포함 하는 균형된 염색체 translocations를 인수 했습니다. 우리 연구소는 염색체 translocations, NUP98 유전자8을 포함에 대 한 오랜 관심 있습니다. 유전자 변형 마우스 NUP98-HOXD13 (NHD13) transgene Vav1 발기인에 의해 규제 및 증강 요소 표시의 모든 MDS, 주변 혈액 cytopenias, 발육 이상, 및 AML9 변환 형태 론 적 증거를 포함 하 여 주요 기능을 표현 .
MDS는 60 년10에 대 한 인정을 받고 있다 고 클론 줄기 세포 장애로 간주 됩니다, engraft 인적 MDS 셀 immunodeficient 마우스에 노력 하지 크게 성공 했습니다, MDS 셀 engraft 저조한11, 때문에 12,,1314 및 쥐 임상 질병을 개발 하지 않습니다. 조 혈 모 세포는 MDS를 전송할 수 있습니다 식별 하는 노력에서 우리 NHD13 모델 그리고 모든 주변 혈액 cytopenias를 포함 하 여 인적 MDS의 기본적인 기능을 보여준 질병 엔터티로 MDS를 engraft 수 있는 우리가 나타났다 발육 이상, 그리고 AML15변환입니다. 이 보고서에서 우리는 MDS 시작 셀을 식별 하기 위해에서 이러한 실험, 뿐만 아니라 조 혈 줄기와 선구자 세포 (HSPC), 더 이상 충분치 접근의 기술적인 세부 사항 제시.
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Protocol
이 문서에서 설명 하는 동물 절차 베 데스 다 동물 관리 및 사용 위원회, 국립 암 연구소에 의해 승인 했다 그리고 인간적 관심과 실험실 동물의 사용에는 공중 보건 서비스 정책에 포함 된 정책 준수는 동물 복지 행위, 그리고 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드.
1. 세포 준비
- 수확 골 nucleated 세포 (BMNC)
- 메 마른 재료만을 사용 합니다. 소독 증기 압력솥을 사용 하 여 다시 사용할 수 있는 악기. 바늘, 주사기, 그리고 단일 사용 무 균 용기에 플라스틱 도자기를 구입. 유형 a 2 생물 안전 캐비닛 클래스 II에서 모든 동물 및 세포 조작을 수행 합니다.
- HF2 3 mL를 포함 하는 하단 튜브 라운드 14 ml에서 BMNCs 준비 (행 크의 균형 소금 솔루션 2% 태아 둔감 한 혈 청으로 보충).
- C57Bl6 기증자 쥐 (CD45 대립 유전자 CD45.2에 대 한 긍정적인), 일반적으로 2-6 개월, 나이 CO2 챔버를 사용 하 여 안락사
- 스프레이 병으로 몸 전체에 70% 에탄올을 분사 하 여 마우스 시체를 소독. 발목 아래로 골반에서 다리에서 피부를 벗 겨.
- 살 균 (직선, 샤 프/샤 프, 11.5 c m)가 위와 집게 (Graefe, 톱니, 0.8 m m 팁 폭)를 사용 하 여 시체에서 femora 및 경골을 제거 합니다. 명확 하 게 연결 된 근육을 잘라.
- 경골의 근 위 및 원심 끝은가 위로 잘라. 집게와 경골을 잡고, 경골 (발목)의 원심 끝에 tibial 골 수 구멍으로 HF2의 2.5 mL를 포함 하는 27-게이지 3 mL 주사기를 삽입 합니다. 하단 튜브 라운드 14 mL에 부드러운 압력을 사용 하 여 경골에서 골 수 세포를 플러시.
- 다른 경골에 대 한 반복 합니다.
- 가 위는 대 퇴 골의 근 위 및 원심 끝을 잘라. 플러시 20 게이지 바늘을 삽입 하 여 대 퇴 골 골 수 구멍에 대 퇴 골 골 수 구멍의 선단부 HF2의 2.5 mL를 포함 하 고 주사기에 부드러운 압력을 적용 3 mL 주사기에 부착.
- 다른 대 퇴 골, 두 경골에서 모든 골을 수집에 대 한 반복 하 고 동일한 14 ml femora 원형 하단 튜브.
- 위쪽 및 아래쪽 3 mL 주사기에 부착 된 동일한 20 게이지 바늘으로 여러 번 발음 하 여 골 수 질량을 분산.
- 항 체 BMNC의 얼룩
- 수 BMNC입니다. 1.1.8 단계에서 생성 된 BMNC 서 스 펜 션의 20 µ L를 3% 초 산 용액의 20 µ L를 추가 합니다. 그런 다음는 hemocytometer와는 거꾸로 한 현미경을 사용 하 여 계산 합니다.
- BMNC에서 4 ° c.에서 5 분 동안 450 x g 부드러운 원심 분리 하 여 펠 렛 HF2와 펠 릿 107 셀 당 90 µ L를 사용 하 여 resuspend을 셀 서 스 펜 션에 biotinylated 반대로 혈통 항 체 칵테일의 10 µ L를 추가 합니다.
- 4 ° C에서 20 분 동안 잠복기 후 얼룩진된 셀 3 mL의 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)을 씻는 다.
- 107 셀 당 HF2의 100 µ L 함께 BMNC resuspend 2 µ L allophycocyanin (APC)의 활용 방지 비오 틴 항 체는 세포 현 탁 액, 20 분 동안 4 ° C에 외피 다음에 추가 합니다.
- 3 mL의 PBS로 얼룩진된 BMNC를 헹 구 고 HF2 0.2 µ g/mL 흐름 cytometry 셀 정렬 propidium 요오드 화물 (PI)의 보충과 BMNC resuspend.
- Flow cytometry 세포 BMNC의 분류
- 교류 cytometry 셀 정렬 보정. 모든 광 전 증폭 관 관 (Pmt), 분산형, 및 흠 없는 세포를 사용 하 여 형광 매개 변수를 최적화 하 고 각 검출기의 선형 범위 내에서 설정.
- 흠 없는, PI-스테인드, 준비 하 고 APC 라는 혈통 단계 1.2에서에서 병렬로 칵테일 셀. 스펙트럼 보상에 대 한 분석.
- 더블 릿 셀의 FSC-H 대 SSC-H, 640-SSC-H 640-SSC-A 대 대 640-SSC-S 640-SSC-W. 순차 게이팅 하 여 차별
- 561 및 방출 614/20 밴드 패스 필터와 수집에 PI 흥분된을 사용 하 여 미달 셀을 제외 합니다. 자극 혈통 APC 671/30 밴드 패스 필터와 640 nm 및 수집 방출에서 셀을 표시 합니다.
- 전압 높이 형광 값을 기록 하 고 목록 모드 데이터 파일을 정렬 인구 시각화에서 적어도 100000 이벤트를 수집 합니다.
- 다음에 대 한 10000 셀의 3 개의 샘플을 얻은 후 스펙트럼 보상 계산: 셀, 셀을 표시 하는 PI 및 APC 세포 분류와 활용 된 반대로 혈통 항 체 칵테일 레이블 없음.
- 10 %FBS 미디어의 0.5 mL를 포함 하는 5 mL 튜브에 밝은 형광 (LP2)와 계보 부정적인 (LN), 희미 한 형광 강도 (LP1)와 LP 인구 혈통 긍정적인 (LP)을 정렬 하려면 3 개의 영역을 설정 합니다.
- 한 방울을 사용 하 여 정렬 셀 포함 하 고 중단 모드를 정화.
- 순도 및 정렬된 셀의 정렬 된 각 샘플에 1000 총 셀 게시물 정렬 분석을 수행 합니다.
- 4 ° C에서 5 분 동안 450 x g에서 원심 분리에 의해 정렬 된 세포를 수집 하 고 HF2의 0.5 mL와 펠 릿 셀 resuspend.
- 정렬된 셀 hemocytometer Trypan 블루와 번호를 확인 합니다. 이 식 위한 HF2와 휴대폰 번호를 조정 합니다.
참고: BMNC 인구의 넓은 스펙트럼 1.2.2 위의 단계에서 추가 조합의 형광 색소 활용 된 항 체를 사용 하 여 이식에 대 한 격리 수 있습니다.
2. 받는 사람 마우스 준비 및 조 혈 모 세포 이식 (HSCT)
- 이식 받는 사람의 준비
- 동물 축산 congenic 받는 사람 마우스 (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) 특정 병원 체 자유롭게 (SPF) 동물 시설에서 들을 유지.
- 위장 트랙의 예방 오염에 대 한 치명적인 복용량 (9 Gy) 방사선 조사, 이전 7 일 동안 100 mg/L ciprofloxacin 받는 사람에 게의 포함 하는 메 마른 물 제공 하 고 조사에 따라 14 일 동안 유지 합니다.
- Cs 소스에서 치명적인 복용량 (9 Gy) 방사선 조사를 다음과 같이 제공 합니다. 훈련, 인증 된 Cs 연산자를 사용 합니다. Cs 소스 악기 70 cGy/분 몸 전체 감마 방사선을 전달 하기 위해 설정 합니다. 맞춤형 홀더에서 10 마우스를 놓고 홀더 irradiator 챔버에 삽입 합니다. 13 분에 9 Gy 총 몸 방사선 조사를 제공 하 고 그들의 감 금 소에는 마우스를 반환 합니다.
- 조 혈 줄기 세포 이식
- 혼합 야생 타입 (WT) congenic 받는 사람 마우스 (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) 마우스와 함께 2 ~ 5 x 10 당 2 × 105 셀의 셀 복용량에서 BMNC BMNC 준비 정화 테스트의4 셀 흐름 cytometry 위의 설명된에서 1.3으로 정렬. 셀 같은 주사기에 혼합.
참고: WT BMNC 받는 사람 마우스에 방사선을 살려주는 효과 제공 하 고 테스트 셀 조를 지원 하지 않는 경우 받는 사람 마우스의 생존에 대 한 허용. WT BMNC CD45.1 대립 유전자 표현 이런이 종류의 실험에 사용 하 고 따라서 구분할 수 있습니다 CD45.1과 CD45.2 사이 감 별 하는 항 체를 사용 하 여 테스트 셀에서. WT BM 셀 "도우미 셀", "방사선을 살려주는 세포", 또는 "경쟁 세포" 라고 하. - 주사를 촉진을 위한 살 균 HF2를 사용 하 여 받는 사람 당 200 µ L 셀 혼합 볼륨을 조정 합니다.
- 치명적 방사능된 받는 사람 마우스를 통해 정 맥 꼬리 정 맥 주입에 1 mL 주사기와 방사선의 24 시간 안에 28 게이지 바늘을 사용 하 여 셀 혼합물을 이식. 열 꼬리 정 맥 팽창 리드 열 램프 아래 마우스 꼬리를 놓습니다.
참고: 연구의 끝에 모든 받는 사람 마우스를 안락사 하 고 검 시, 조직학, cytometry에 의해 질병의 진행을 평가 합니다.
- 혼합 야생 타입 (WT) congenic 받는 사람 마우스 (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) 마우스와 함께 2 ~ 5 x 10 당 2 × 105 셀의 셀 복용량에서 BMNC BMNC 준비 정화 테스트의4 셀 흐름 cytometry 위의 설명된에서 1.3으로 정렬. 셀 같은 주사기에 혼합.
3. engraftment 분석 결과 Flow Cytometry 사용 하 여
- 기증자 세포 engraftment를 평가 하려면 6 주, 12 주, 그리고 이식 후 16 주 사용 받는 사람 마우스에서 말 초 혈액 (PB)을 수집 합니다.
- 약 1 분 동안 열 램프와 새에서 받는 사람을 따뜻한 고 마우스는 restrainer 합니다.
- 메스 (블레이드 10, #3 메스 핸들)와 꼬리 정 맥을 절단 하 고 EDTA 항 응고 제에로 포함 하는 microcapillary 튜브를 사용 하 여 받는 사람 마다 PB의 100 µ L를 수집 합니다.
- 수집 된 PB을 살 균 microcentrifuge 튜브에서 50 µ L를 배치 하 여 두 개의 동일한 aliquots에 나눕니다. (NCI Histopathology 코어에서 수행) 자동화 완료 혈액 검사 (CBC)에 대 한 한 약 수를 사용 하 고 두 번째 약 수를 사용 하 여 항 체 얼룩이 지기에 대 한 cytometry 흐름.
- Cytometry에 의해 기증자 engraftment를 검색, 수집된 PB의 50 µ L을 소형 RBC 세포의 용 해 버퍼 (8.29 g/L NH4Cl, KHCO3, 나2EDTA, pH 7.2 0.037 g/L의 1 g/L)의 1 mL을 추가 하 여 적혈구 (RBC) lyse. 소용돌이 혼합 하 여 샘플을 실 온에서 10 분을 품 어.
- 원심에서 4600 x g lysed PB 1.5 분 신중 하 게는 상쾌한 발음 하 고 삭제.
- 부분적으로 부드럽게 도청 또는 "터치" 튜브의 아래쪽 셀 펠 렛을 방해. 1.3 mL PBS의 펠 릿에 위치한 1.5 분에 4600 x g에서 원심 분리기와 신중 하 게 aspirate 삭제는 상쾌한 추가 합니다.
- 감청 또는 flicking, 셀 펠 릿 고 HF2 5% 쥐 혈 청 셀 펠 릿 보충의 200 µ L을 추가 됩니다.
- 추가 안티-CD45.2 항 체 (1 µ L) allophycocyanin (APC) 세포 현 탁 액을 함께 활용 합니다. 적어도 30 분, 그리고 짧게 소용돌이 혼합물에 4 ° C에서 품 어.
- 얼룩, 후 위에서 설명한 대로 두 번 셀을 세척 하 고 HF2 PI의 1 µ g/mL와 보충의 400 µ L 함께 resuspend.
- 사용 하 여 4 색 교류 cytometer engraftment를 감지 합니다. 추가 추가 항 체 특정 세포 유형, B 또는 T 세포 등을 감지 하 여 말 초 혈액 내의 셀 형식에 대 한 추가 정보를 가져올.
- 데이터의 추가 분석에 대 한 있도록 스프레드 시트를 사용 하 여 직렬 engraftment 데이터를 기록 합니다.
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Representative Results
우리는 몇 가지 실험의 결과 대 한 대표적인 수치를 보여줍니다. 그림 1 실험 정렬 대표 cytometry를 보여준다. 정상적인 조 혈 차별화, 동안 세포가 특정 조 혈 혈통에 최선을 다하고 그들은 혈통 정의 세포 표면 마커를 확보 고 자기 갱신에 대 한 가능성을 잃게. 따라서, 야생-타입 마우스, 줄기 세포 자체-갱신은 혈통 부정적인 BMNC에 국한. 이 실험에서 우리 혈통-부정, 낮은 혈통 긍정적인, 그리고 높은 혈통 양성 세포로 NHD13 골 수에서 BMNC 정렬. 이러한 정렬 셀 다음 자기 갱신 용량을 확인 받는 사람 WT에 이식 했다.
그림 2 는 별도 실험에서 결과 혈통에 부정적인 세포 또는 MDS와 NHD13 기증자에서 정렬 되지 않은 셀 치명적 방사능된 WT 받는 사람에 이식 했다. WT 경쟁자 세포 CD45.1 세포 표면 마커를 표현 (섹션 2.2.1 위의 참조) 반면 NHD13 기증자 세포 CD45.2 세포 표면 마커를 표현. 그림 3 은 정렬 되지 않은 NHD13 BMNC, 또는 계보 네거티브 NHD13 BMNC의 직렬 engraftment 분석을 보여준다. 약 16 주 후, NHD13 셀 노르만족 WT 셀 CD45.2 + 주변 혈액에 있는 세포의 증가 비율에 의해 표시 된 것 처럼. 그림 4 는 NHD13 MDS 세포와 함께 이식 마우스에서 leukemic 전이의 예를 보여 줍니다.
그림 1: BMNC의 전략 정렬 cytometry 스테인드 혈통 항 체 칵테일. 도트 플롯에 각 직사각형 상자 HSCT 세포 기능을 평가 하기 위한 정렬 셀 인구를 나타냅니다. R4, 혈통 부정적인; R5, 낮은 혈통 긍정적인; R6, 높은 혈통 긍정 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: engraftment 분석 결과 기증자 특정 안티-CD45.2 항 체를 사용 하 여에 대 한 대표적인 FACS 프로필. BMNC 받는 사람 1 X 106 NHD13 BMNC (CD45.2 +) 이식 했다 그리고 5 X 104 NHD13 계보 부정적인 BM와 LNBM 받는 세포 (CD45.2 +). 각각의 경우에 2 x 105 WT BMNC (CD45.1 +) 경쟁자 셀으로 사용 되었다. 상위 및 하위 상자 대표 CD45.2 긍정적인 (NHD13 기증자에서 파생 된) 숫자와 부정적인 CD45.2 (에서 파생 WT 경쟁자 셀), 각각, 6 주, 24 주 후 이식에. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 이식 후 개별 받는 사람의 Engraftment 활동. 그래프에 각 줄에 개별 받는 사람 마우스의 직렬 engraftment 분석 보여 줍니다. BMNC 받는 사람 NHD13 전체 BMNC의 1 X 106 세포로 이식 했다 그리고 LNBM 받는 사람 NHD13 계보 부정적인 BM의 5 X 104 정렬 후 이식 했다. NHD는 NHD13 기증자를 나타냅니다. BM, BMNC 받는 사람 쥐; LNBM, 계보 부정적인 BM 받는 사람; PBMC, 주변 혈액 mononucleated 셀 모든 경우에, NHD13 기증자 세포는 점차 노르만족 WT 셀. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4: 5 월-그 룬 발트 Giemsa (MGG) 진행 AML에 MDS 받는 사람에서 골 (BM)의 얼룩. 수많은 폭발 및 미 성숙한 형태의 존재 note 화살표 폭발, 나타내고 화살촉 미숙한 형태를 표시 합니다. 원래 400 X. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
MDS는 클론 조 혈 줄기 세포 장애, MDS "줄기", 또는 시작 셀 특징 되었습니다 아직 없습니다. 우리는 이전 MDS transplantable WT 쥐 HSCT, macrocytic 빈혈증, leukopenia, 호 중구 감소 증, 그리고 발육 이상15의 morphologic 증거 특징에 의해 NHD13 쥐에서 골 수를 사용 하 여 될 수 있는 시연 했다. 또한, 경쟁력 있는 repopulation 분석 NHD13 MDS 골 수에서 세포의 성장 우위를 확인. 함께 찍은, 이러한 결과 MDS 줄기 또는 시작 셀의 존재 의미. 추가 실험은 진행 중인 지금,는 immunophenotypic 정제 목적으로 시작 하는 MDS의 특성15 더 정의 된 줄기와 조상 세포 마커 (CD150, CD48, c-Kit 및 Sca 1)를 사용 하 여16 계보와 결합 마커 얼룩이 프로토콜에서 설명 하는 방법입니다.
MDS 식별 광범위 한 교류 cytometry 정렬 절차를 포함 한다 NHD13 마우스를 사용 하 여 셀을 시작. 기본 BMNCs의 비보 전 조작 세포 죽음 또는 기능 손실 결과로 잠재적으로 셀에 스트레스를 장소. 따라서, 노력 비보 전 조작 흐름 cytometry 정렬의 시간 등의 시간을 줄이기 위해 여야 한다. 메이커와 교류 cytometry 악기와 흐름 역학 모델 추가 변수를 정렬 한 후 세포 생존 능력을 영향을 미칠 수 있습니다. HSCT 절차 혈관을 통해 세포 주입을 필요합니다. 꼬리 정 맥 주입 역-궤도 주입, 우리의 경험에 보다 좀 더 도전적인 기술 수 있지만 꼬리 정 맥 주입 수행할 수 있습니다 복고 궤도 주입 보다는 더 빠르게 받는 쥐 꼬리 정 맥에 대 한 취 하지는 주사입니다. 사출 볼륨 (최대 150 µ L)의 제한 복고풍 궤도 주입17, 또 다른 문제는 높은 셀 농도 주사기의 벽에 세포의 전단 같은 셀 준비 과정에서 셀의 추가 손실이 발생할 수 있습니다 및 바늘입니다.
비록 이러한 실험 MDS에 대 한 NHD13 모델에 초점을 맞추고 있다, 여기서 설명 HSCT 정렬 및 이식 방법 어떤 유전자 조작 마우스 사용할 수 있습니다. 자체 갱신 조 혈 모 세포의 특성을 결정 하는 것 외에도 이식 이렇게 다른 용도로 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 하나의 작은 분자와 함께 치료의 효능을 평가 하기 위해 MDS 골 수와 쥐의 큰 코 호트를 욕망, 대형 코 호트 (30 + 마우스)을 생성할 수 또는 MDS BM.와 WT 쥐를 이식, HSCT 전략 반전 될 수 있다. MDS의 쥐를 치료 하려고, MDS와 NHD13 쥐 WT BM으로 이식 될 수 있습니다. 및 이식의 성공 (WT BM 표시)는 CD45.1 CD45.2 (MDS BM 표시)는 반대로 표현 조 혈 모 세포의 비율을 평가 하 여 모니터링할 수 있습니다. 18.
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Disclosures
공개 하는 것이 없다.
Acknowledgments
이 작품은 국립 암 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원 되었다 건강의 국가 학회 (ZIA SC 010378와 BC 010983 번호 부여).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 14 mL round bottom tube | Falcon | 352057 | |
| Hank's balanced salt solution | Lonza | 10-527F | |
| Anti-CD45.2 antibody | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
| 3 mL Syringe | Monoject | 8881513934 | |
| 27-G needle | BD | 305109 | |
| 20-G needle | BD | 305176 | |
| Lineage Cocktail | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
| Anti-Biotin antibodies | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
| 1 mL Syringe | Excelint | 26027 | Insulin Syringe |
| Heating Lamp | Thermo Fisher Scientific | E70001901 | |
| FACS machine | Cytec | FACScan | 2 lasers, 5 color detectors |
| FACS sorting instrument | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously |
| Propidium Iodide | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Gamma Irradiator | Best Theratronics | Gammacell 40 | |
| Blood collection tube | RAM scientific | 76011 | |
| Recipient mice | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 mice | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colony maintained at NIH |
| 5 mL round bottom tube | Falcon | 352058 |
References
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