Summary
Vi beskriver användningen av hematopoetisk stamcellstransplantation (HSCT) att bedöma den maligna potentialen för genetiskt modifierade hematopoetiska celler. HSCT är användbart för utvärdering av olika elakartade hematopoetiska celler i vivo samt generera en stor kohort av möss med myelodysplastiska syndrom (MDS) eller leukemi för att utvärdera nya terapier.
Abstract
Myelodysplastiskt syndrom (MDS) är en mångskiftande grupp av hematopoetiska stamceller störningar som definieras av ineffektiva blodbildning, perifera cytopenier, dysplasi och en benägenhet för transformation till akut leukemi. NUP98-HOXD13 (NHD13) transgena möss recapitulate mänskliga MDS när det gäller perifera cytopenier, dysplasi och transformation till akut leukemi. Vi har tidigare visat att MDS kunde överföras från ett genetiskt modifierade mus med MDS till vildtyp mottagare av omplantering MDS nucleated benmärgsceller (BMNC). Till mer tydligt förstå MDS cellen ursprungsland, vi har utvecklat metoder att transplantera specifika, immunophenotypically definieras hematopoetiska delmängder. I den här artikeln beskriver vi processen med att isolera och omplantering specifika populationer av hematopoetiska stamceller och stamceller. Efter transplantation beskriver vi metoder för att bedöma effektiviteten av transplantation och uthållighet hos donatorcellerna MDS.
Introduction
Myelodysplastiskt syndrom (MDS) representerar en rad olika klonal blodsjukdomar som kännetecknas av ineffektiva blodbildning, morfologiska bevis av dysplasi och en benägenhet för transformation till akut myeloisk leukemi (AML)1,2 ,3,4. Ineffektiva blodbildning är erkänd som en mognad arresteringsorder i benmärgen, och leder till perifera cytopenier trots en hypercellular benmärg1,3. Incidensen av MDS har uppskattats omväxlande som 2-12 fall per 100 000 personer årligen i Sverige, och incidensen av MDS ökar med åldern, vilket gör detta till en viktig förutsättning att förstå med tanke på åldrandet U.S. befolkningen3, 5. Även om de flesta fall av MDS har ingen tydlig etiologi, tros vissa fall av MDS bero på exponering för kända genotoxiskt medel, inklusive lösningsmedel som bensen och cancer kemoterapi6.
MDS-patienter har normalt förvärvade mutationer i MDS cellerna7. Även om det är relativt ovanligt, har ett antal MDS patienter förvärvade balanserad kromosomala flyttningar som involverar gener som NUP98, EVI1, RUNX1 och MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). Vårt laboratorium har ett långvarigt intresse för kromosom flyttningar, som inbegriper den NUP98-gen8. Transgena möss som express en NUP98-HOXD13 (NHD13) transgenens reglerad av promotorn Vav1 och enhancer element Visa alla de viktigaste funktionerna i MDS, inklusive perifera cytopenier, morfologiska bevis av dysplasia, och omvandling till AML9 .
Även om MDS har erkänts för över 60 år10, och anses vara en klonal stamceller störning, har ansträngningar att engraft mänsklig MDS cell i nedsatt immunförsvar möss varit till stor del misslyckade, eftersom MDS cellerna engraft dåligt11, 12,13,14 och mössen inte utvecklar klinisk sjukdom. I ett försök att identifiera vilka hematopoetiska celler kan överföra MDS, vi vände sig till den NHD13 modellen, och visade att vi kunde engraft MDS som en sjukdom-enhet som visade alla kardinal funktioner av mänskliga MDS, inklusive perifera cytopenier, dysplasi, och omvandling till AML15. I denna rapport presenterar vi de tekniska detaljerna i dessa experiment, samt strategier för ytterligare fractionate hematopoetiska stamceller och föregångare celler (HSPC), i ett försök att identifiera MDS-inleda celler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djur procedurerna som beskrivs i denna artikel godkändes av National Cancer Institute på Bethesda djur vård och användning kommittén, och överensstämmer med den politik som ingår i The Public Health Service politik för Human Care och användning av försöksdjur, den Djurens välbefinnande Act, och en Guide för skötsel och användning av försöksdjur.
1. cell förberedelse
- Skörda benmärgen kärnförsedda celler (BMNC)
- Använd endast sterilt material. Sterilisera återanvändbara instrument använder autoklav. Köpa nålar, sprutor och plastartiklar i engångsbruk sterila behållare. Utföra alla djur och cell manipulationer i en klass II, typ A2 biologisk säkerhet skåp.
- Förbereda BMNCs i en 14 mL rund botten tube innehållande 3 mL HF2 (Hanks balanserad saltlösning kompletteras med 2% fetalt bovint serum).
- Euthanize C57Bl6 givare möss (positiv för CD45-allelen CD45.2), ålder vanligtvis 2-6 månader, med hjälp av en CO2 kammare.
- Sterilisera mus kadavret genom sprutning 70% etanol över hela kroppen med en sprayflaska. Skala huden på benen, från bäckenet ner till fotleden.
- Ta bort platsen och tibiae från slaktkroppen med steril sax (raka, sharp/sharp, 11,5 cm) och pincett (Graefe, tandade, 0,8 mm spets bredd). Trimma dithörande muskler tydligt.
- Skär proximala och distala ändarna av skenbenet med saxen. Håller skenbenet med pincett, in en 27 g 3 mL spruta innehåller 2,5 mL HF2 i tibial märg hålighet på den distala änden av tibia (fotled). Spola benmärgscellerna från skenbenet med lätt tryck i de 14 mL rund botten röret.
- Upprepa för den andra tibia.
- Skär proximala och distala ändarna på lårbenet med sax. Flush lårbenet märg kaviteten genom att infoga en 20-gauge nål bifogas en 3 mL spruta innehållande 2,5 mL HF2 i den distala änden av lårbenet märg kaviteten och skonsam påtryckningsmedel på sprutan.
- Upprepa för andra lårbenet, samla alla benmärg från båda tibiae och platsen i samma 14 mL runt botten rör.
- Skingra märg massan av aspirering upp och ner flera gånger med samma 20 gauge kanylen påsatt på 3 mL-sprutan.
- Antikropp färgning av BMNC
- Räkna BMNC. Tillsätt 20 µL av en 3% ättiksyra till 20 µL av BMNC upphängning genereras i steg 1.1.8. Sedan, räkna med en hemocytometer och ett inverterat Mikroskop.
- Pellets av BMNC genom skonsam centrifugering på 450 x g under 5 minuter vid 4 ° C. Återsuspendera pelleten med HF2 med 90 µL per 107 celler och Lägg till 10 µL av biotinylerade anti härstamning antikroppar cocktail cellsuspension.
- Efter inkubation under 20 minuter vid 4 ° C, tvätta färgas cellerna med 3 mL fosfatbuffrad koksaltlösning (PBS).
- Återsuspendera BMNC med 100 µL av HF2 per 107 celler. Lägg till 2 µL av allophycocyanin (APC) konjugerade anti biotin antikropp att cellsuspensionen, följt av inkubation vid 4 ° C i 20 min.
- Skölj den färgade BMNC med 3 mL PBS och resuspendera BMNC med HF2 kompletteras med 0,2 µg/mL propidium jodid (PI) för flöde flödescytometri cell sortering.
- Flow flödescytometri cell sortering av BMNC
- Kalibrera flöde flödescytometri cell sorterare. Optimera alla Fotomultiplikatorrör (PMTs), scatter och fluorescens parametrar med ofärgade celler och in i linjära intervallet för varje detektor.
- Förbereda ofärgade, PI-färgade och APC märkt härstamning cocktail celler parallellt från steg 1.2. Analysera för spektral ersättning.
- Diskriminera doublet celler av sekventiell gating FSC-H vs. SSC-H 640-SSC-A vs. 640-SSC-H och 640-SSC-S vs 640-SSC-W.
- Utesluta icke celler använder PI upphetsad på 561 nm och utsläpp samlas in med ett 614/20 band pass filter. Excitera härstamning APC märkt celler på 640 nm och samla utsläpp med ett 671/30 band pass filter.
- Spela in fluorescens värden som spänning höjd och samla minst 100.000 händelser i listan läge datafiler att visualisera populationerna som ska sorteras.
- Beräkna spektrala ersättning efter att förvärva tre prover av 10.000 celler för följande: omärkt celler, PI märkt celler och anti härstamning antikroppar cocktail konjugerat med APC märkt celler.
- Ange tre regioner att sortera härstamning negativa (LN), härstamning positiva (LP) med dim fluorescensintensiteten (LP1) och LP befolkningen med ljusa fluorescens (LP2) i 5 mL rör innehållande 0,5 mL 10% FBS media.
- Sortera celler en en droppe omsluta och rena abortera läge.
- Utföra post sortera analys med 1 000 totala celler på varje sorterad prov att bekräfta den renhet och genomförbarheten av sorterade cellerna.
- Samla sorterade celler genom centrifugering vid 450 x g i 5 minuter vid 4 ° C och resuspendera cellpelleten med 0,5 mL av HF2.
- Bekräfta sorterade cell nummer med hemocytometer och Trypan blå. Justera antalet celler med HF2 för transplantation.
Obs: Ett brett spektrum av BMNC populationer kan isoleras för transplantation med ytterligare kombinationer av fluorokrom-konjugerade antikroppar i steg 1.2.2 ovan.
2. mottagarens möss förberedelse och hematopoetisk stamcellstransplantation (HSCT)
- Beredning av transplantation mottagare
- Upprätthålla veterinär- och djurhållning skötsel av congenic mottagarens möss (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) i en specifik patogen fri (SPF) djuranläggningen.
- Profylaktisk dekontaminering av mag spåret, ge sterilt vatten innehållande 100 mg/L av ciprofloxacin till mottagarna för 7 dagar före dödlig dos (9 Gy) bestrålning, och underhålla under 14 dagar efter bestrålning.
- Ge en dödlig dos (9 Gy) bestrålning från en Cs source enligt följande. Använda en utbildade och certifierade Cs-operatorn. Ställa Cs källa instrumentet att leverera 70 cGy/min helkropps gammastrålning. Placera 10 möss i en specialdesignad hållare och infoga innehavaren i irradiator kammaren. Leverera 9 Gy kroppens totala bestrålning i 13 min och återgå möss till sina burar.
- Hematopoetisk stamcellstransplantation
- Blanda vildtyp (WT) BMNC från en congenic mottagarens mus (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) i en cell dos på 2 x 105 celler per mus med 2 till 5 x 104 celler av renat provet BMNC beredd med flöde flödescytometri sortering som beskrivs i 1.3 ovan. Blanda celler i samma spruta.
Obs: De WT BMNC ger en strålning skona-effekt till mottagarens musen och möjliggöra för överlevnaden av mottagarens musen om test cellerna inte stöder blodbildning. De WT BMNC används i denna typ av experiment express i CD45.1-allel, och därmed kan skiljas från test cellerna med hjälp av antikroppar som diskriminerar mellan CD45.1 och CD45.2. WT BM cellerna kallas ”hjälpare celler”, ”strålning-sparing celler” eller ”konkurrent celler”. - Justera volymen för blandningen cell att 200 µL per mottagare som använder sterila HF2 för att underlätta injektionen.
- Transplantera cell blandningar till dödligt bestrålade mottagarens möss via intravenös svans ven injektionen med en 1 mL spruta och 28-gauge nål, inom 24 timmar efter bestrålning. Placera musen svansen under en värmelampa, eftersom värme leder till svans ven dilatation.
Obs: Avliva alla mottagare möss i slutet av studien och utvärdera sjukdomsförloppet genom obduktion, histologi och flödescytometri.
- Blanda vildtyp (WT) BMNC från en congenic mottagarens mus (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) i en cell dos på 2 x 105 celler per mus med 2 till 5 x 104 celler av renat provet BMNC beredd med flöde flödescytometri sortering som beskrivs i 1.3 ovan. Blanda celler i samma spruta.
3. engraftment Assay använder Flow flödescytometri
- Utvärdera donatorn cell engraftment, samla perifert blod (PB) från mottagarens mössen på 6: e vecka, 12: e veckan och 16: e veckan efter transplantation.
- Värm mottagarna i bur med värmelampa för ca 1 min och Placera musen i en fasthållning.
- Klipp svansen venen med en skalpell (blad 10, #3 skalpell handtag) och samla 100 µL av PB per mottagare använder en microcapillary tub som innehåller EDTA som en antikoagulant.
- Dela insamlade PB i två lika portioner genom att placera 50 µL i ett sterilt mikrocentrifug rör. Använda en alikvot för en automatiserad blodstatus (CBC) (framförd kärnan histopatologi NCI) och använda den andra alikvoten för antikropp färgning och flödescytometri.
- För att upptäcka givare engraftment genom flödescytometri, att lysera röda blodkroppar (RBC) genom att tillsätta 1 mL hypoton RBC lyseringsbuffert (8,29 redov NH4Cl, 1 g/L KHCO3, 0,037 g/L Na2EDTA, pH 7,2) till 50 µL av den insamlade PB. Vortex provet blanda och inkubera i 10 minuter vid rumstemperatur.
- Centrifugera lyserat PB på 4 600 x g för 1,5 min. noggrant Aspirera supernatanten och kassera.
- Delvis störa cellpelleten genom att försiktigt trycka eller ”snärta” botten av röret. Lägg till 1,3 mL PBS i pelleten ligger i rör och centrifugera vid 4.600 x g för 1,5 min. noggrant aspirera och Kassera supernatanten.
- Tillsätt 200 µL HF2 kompletteras med 5% råtta serum till cellpelleten och störa cellpelleten genom att trycka eller snärta.
- Lägger till anti-CD45.2-antikropp (1 µL) konjugerat med allophycocyanin (APC) att cellsuspensionen. Inkubera vid 4 ° C i minst 30 min, och kortfattat vortex blandningen.
- Efter färgningen, tvätta cellerna två gånger enligt ovan och blandas med 400 µL av HF2 kompletteras med 1 µg/mL av PI.
- Upptäcka engraftment med hjälp av en flödescytometer för 4-färg. Få ytterligare information om celltyper i perifert blod genom att lägga till ytterligare antikroppar för att upptäcka specifika celltyper, såsom B- eller T-lymfocyter.
- Registrera serienummer engraftment data använder ett kalkylark för ytterligare analys av data.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi visar representativa siffror för resultaten av flera experiment. Figur 1 visar en representativ flödescytometri sortering experiment. Under normala hematopoetiska differentiering, som celler blir förbundit sig till en specifik hematopoetiska härstamning, de förvärva härstamning-definiera cell yta markörer och förlora potentialen för självförnyelse. Därför i vildtyp möss är stamceller självförnyelse begränsad till härstamning-negativa BMNC. I detta experiment sorterade vi BMNC från NHD13 benmärg till härstamning-negativ, låg härstamning positiva och höga härstamning-positiva celler. Dessa sorteras celler transplanterade sedan i WT mottagare att bestämma självförnyelse kapacitet.
Figur 2 visar resultat från ett separat experiment, i vilka härstamning negativa celler eller osorterade celler från NHD13 givare med MDS transplanterade i dödligt bestrålade WT mottagare. NHD13 donatorcellerna uttryckt CD45.2 cell surface markören, WT konkurrent cellerna (se avsnitt 2.2.1 ovan) uttryckte den CD45.1 cell surface markören. Figur 3 visar seriell engraftment analys av osorterade NHD13 BMNC eller härstamning-negativa NHD13 BMNC. Efter ca 16 veckor, konkurrera ut de NHD13 cellerna WT cellerna, vilket framgår av den ökande andelen av CD45.2 +-celler i perifert blod. Figur 4 visar ett exempel på leukemiska omvandling från en mus som transplanteras med NHD13 MDS cellerna.
Figur 1: flödescytometri sortering strategi av BMNC färgas med härstamning antikroppar cocktail. Varje rektangulär låda på dot tomten representerar cellen befolkningen sorteras för HSCT att utvärdera cellernas funktion. R4, härstamning negativa; R5, låg härstamning positiva; R6, hög härstamning positivt. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: representativa FACS profiler för engraftment analys använder givare anti-CD45.2 antikroppsreaktion. BMNC mottagaren var transplanteras med 1 X 106 NHD13 BMNC (CD45.2 +) och LNBM mottagare med 5 X 104 NHD13 härstamning negativa BM celler (CD45.2 +). I varje fall användes 2 x 105 WT BMNC (CD45.1 +) som konkurrent celler. Siffror i den övre och nedre rutorna representerar CD45.2 positiva (härlett från NHD13 givare) och CD45.2 negativa (härlett från WT konkurrent celler), respektive, på efter transplantation 6 vecka och 24. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Engraftment kinetik av enskilda mottagare efter transplantation. Varje rad på grafen visar seriell engraftment analyser av en enskild mottagare mus. BMNC mottagare transplanterades med 1 X 106 celler i NHD13 hela BMNC, och LNBM mottagare transplanterades med 5 X 104 av NHD13 härstamning negativa BM efter sortering. NHD anger NHD13 givare. BM, BMNC mottagarens möss; LNBM, härstamning negativa BM mottagare; PBMC, perifert blod mononucleated cell. I alla fall NHD13 donatorcellerna gradvis konkurrera ut WT cellerna. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: maj-Grünwald Giemsa (MGG) färgning av benmärgen (BM) från MDS mottagaren som utvecklats till AML. Notera förekomsten av talrika Blaster och omogna former. Pilarna anger Blaster och pilspetsar visar omogna former. Ursprungliga 400 X. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Även om MDS är en klonal hematopoetiska stamceller störning, MDS ”stam” eller initierande celler, har ännu inte karaktäriserats. Vi har tidigare visat att MDS kan vara transplanterbara WT möss med benmärg från NHD13 möss av HSCT, kännetecknas av makrocytär anemi, leukopeni, neutropeni och morfologiska bevis av dysplasi15. Dessutom identifieras konkurrenskraftiga återinsättning analyser en tillväxt fördel av celler från benmärgen NHD13 MDS. Sammantaget antyda dessa fynd förekomsten av en MDS stam eller initierande cell. Ytterligare experiment pågår nu, som syftar till att förfina immunophenotypic egenskaperna hos en MDS inleda cell15 med mer definierade stammen och progenitor cell märkpennor (CD150, CD48, c-Kit och Sca-1)16 kombinerat med härstamning markör färgning metod som beskrivs i detta protokoll.
Att identifiera MDS innebär inleda celler med hjälp av NHD13 möss omfattande flöde flödescytometri sortering förfarande. Ex vivo manipulering av primära BMNCs lägger stress på cellerna, potentiellt leder till celldöd eller funktionella förlust. Därför bör ansträngningar göras för att minska tiden för ex vivo manipulation inklusive flöde flödescytometri Avskiljningens tid. På tillverkare och modell av flöde flödescytometri instrument och dynamik är ytterligare variabler som kan påverka cellernas viabilitet efter sortering. HSCT förfarandet kräver cell infusion genom ett blodkärl. Även svansen ven injektion kan vara en mer utmanande teknik än retro-orbital injektion, vår erfarenhet kan svans ven injektion utföras snabbare än retro-orbital injektion som mottagarens möss inte är sövd för svans venen injektioner. Begränsning av injektionsvolym (maximalt 150 µL) är en annan fråga i retro-orbital injektion17, som cellen i högre koncentration kan leda till ytterligare förlust av celler under cell utarbetandet, såsom klippning av celler på väggen i sprutor och nålar.
Även om dessa experiment är fokuserad på den NHD13 modellen för MDS, kan de HSCT sortering och transplantation metoder som beskrivs här användas för alla genetiskt modifierade möss. Förutom att fastställa egenskaperna hos själv förnya hematopoetiska celler, kan denna transplantation strategi användas för andra ändamål. Exempelvis om man önskar att erhålla en stor kohort av möss med MDS benmärg för att bedöma effekten av behandling med en liten molekyl, en stor kohort (30 + möss) kan genereras av omplantering WT möss med MDS BM. Alternativt, HSCT strategin kan vändas. I ett försök att bota möss av MDS, NHD13 möss med MDS kan transplanteras med WT BM, och framgången av transplantatet kan övervakas genom att bedöma hur stor andel av hematopoetiska celler som uttrycker CD45.1 (som markerar WT BM) i motsats till CD45.2 (som markerar MDS BM) 18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vi har inget att redovisa.
Acknowledgments
Detta arbete stöds av intramurala forskningsprogrammet av National Cancer Institute, National Institutes of Health (bevilja nummer ZIA SC 010378 och BC 010983).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 14 mL round bottom tube | Falcon | 352057 | |
| Hank's balanced salt solution | Lonza | 10-527F | |
| Anti-CD45.2 antibody | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
| 3 mL Syringe | Monoject | 8881513934 | |
| 27-G needle | BD | 305109 | |
| 20-G needle | BD | 305176 | |
| Lineage Cocktail | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
| Anti-Biotin antibodies | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
| 1 mL Syringe | Excelint | 26027 | Insulin Syringe |
| Heating Lamp | Thermo Fisher Scientific | E70001901 | |
| FACS machine | Cytec | FACScan | 2 lasers, 5 color detectors |
| FACS sorting instrument | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously |
| Propidium Iodide | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
| Gamma Irradiator | Best Theratronics | Gammacell 40 | |
| Blood collection tube | RAM scientific | 76011 | |
| Recipient mice | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
| NUP98-HOXD13 mice | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colony maintained at NIH |
| 5 mL round bottom tube | Falcon | 352058 |
References
- Corey, S. J., et al. Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases. Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).
- Garcia-Manero, G. Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management. American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).
- Heaney, M. L., Golde, D. W. Myelodysplasia. The New England Journal of Medicine. 340 (21), 1649-1660 (1999).
- Nimer, S. D. Myelodysplastic syndromes. Blood. 111 (10), 4841-4851 (2008).
- Aul, C., Giagounidis, A., Germing, U. Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics. International Journal of Hematology. 73 (4), 405-410 (2001).
- Pedersen-Bjergaard, J., Christiansen, D. H., Desta, F., Andersen, M. K. Alternative genetic pathways and cooperating genetic abnormalities in the pathogenesis of therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia. Leukemia. 20 (11), 1943-1949 (2006).
- Uy, G. L., et al. Dynamic changes in the clonal structure of MDS and AML in response to epigenetic therapy. Leukemia. 31 (4), 872-881 (2017).
- Gough, S. M., Slape, C. I., Aplan, P. D. NUP98 gene fusions and hematopoietic malignancies: common themes and new biologic insights. Blood. 118 (24), 6247-6257 (2011).
- Lin, Y. W., Slape, C., Zhang, Z., Aplan, P. D. NUP98-HOXD13 transgenic mice develop a highly penetrant, severe myelodysplastic syndrome that progresses to acute leukemia. Blood. 106 (1), 287-295 (2005).
- Block, M., Jacobson, L. O., Bethard, W. F. Preleukemic acute human leukemia. Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).
- Thanopoulou, E., et al. Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome. Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).
- Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. J. Engraftment of distinct clonal MDS-derived hematopoietic precursors in NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient mice after intramedullary transplantation of hematopoietic and stromal cells. Blood. 104 (7), 2202-2203 (2004).
- Benito, A. I., et al. NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors. Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).
- Medyouf, H., et al. Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit. Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).
- Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).
- Pietras, E. M., et al. Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions. Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).
- Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S.
- Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome. PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).
