Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Developmental Biology
Click here for the English version

Developmental Biology

Bruk av blodkreft stamcelletransplantasjon å vurdere opprinnelsen til AML

Published: October 3, 2018 doi: 10.3791/58140
Automatic Translation
1, 1, 2, 1
1Genetics Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health, 2LGI Flow Cytometry Core Facility, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, National Institutes of Health

Summary

Vi beskriver bruken av blodkreft stilk cellen transplantasjon (HSCT) å vurdere ondartet potensialet av genmodifiserte blodkreft cellene. HSCT er nyttig for evaluering av ulike ondartet blodkreft cellene i vivo som genererer en stor kohort av mus med AML syndromer (MDS) eller leukemi for å evaluere romanen terapi.

Abstract

AML syndromer (MD) er en sammensatt gruppe av blodkreft stamcelletransplantasjon lidelser som er definert av ineffektiv hematopoiesis, perifert blod cytopenias, dysplasia og en tilbøyelighet for transformasjon til akutt leukemi. NUP98-HOXD13 (NHD13) transgene mus recapitulate menneskelige MDS i perifert blod cytopenias dysplasia og transformasjon til akutt leukemi. Vi viste tidligere at MDS kan overføres fra genmodifiserte mus med MDS vill-type mottakere ved transplanting MDS benmarg nucleated celler (BMNC). Å forstå MDS cellen opprinnelse, har vi utviklet metoder å transplantere bestemt, immunophenotypically definert blodkreft delsett. I denne artikkelen beskriver vi prosessen med å isolere og transplanting spesifikke populasjoner blodkreft stilk og progenitor celler. Etter transplantasjon beskriver vi tilnærminger for å vurdere effektiviteten av transplantasjon og utholdenhet av donor MDS cellene.

Introduction

AML syndromer (MDS) representerer ulike sett med klonal blodforstyrrelser preget av ineffektiv hematopoiesis og morfologiske bevis av dysplasia en tilbøyelighet for transformasjon til akutt myelogen leukemi (AML)1,2 ,3,4. Ineffektiv hematopoiesis er anerkjent som en modning arrestasjon i benmargen, og resultater i perifert blod cytopenias til tross for en hypercellular benmarg1,3. Forekomsten av MDS har vært varierende anslått som 2-12 tilfeller pr. 100 000 personer årlig i USA, og forekomsten av MDS øker med alderen, noe som gjør dette til en viktig betingelse for å forstå gitt aldring amerikanske befolkningen3, 5. Selv om de fleste tilfeller av MDS har ingen klart etiologi, er noen tilfeller av MDS antatt å skyldes eksponering for kjente gentoksisk agenter, inkludert løsemidler som benzen, og kreft kjemoterapi6.

MDS pasienter har vanligvis fått mutasjoner i MDS celler7. Selv om det er relativt uvanlig, har en rekke MDS pasienter fått balansert chromosomal translocations involverer gener som NUP98, EVI1, RUNX1 og MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). Vårt laboratorium har en langvarig interesse kromosom translocations, som involverer NUP98 gene8. Transgene mus som uttrykker en NUP98-HOXD13 (NHD13) transgene regulert av Vav1 selskapet og enhancer elementer vise alle de viktigste funksjonene i MDS, inkludert perifert blod cytopenias, morfologiske bevis av dysplasia og transformasjon til AML9 .

Selv om MDS har blitt anerkjent for over 60 år10, og anses å være en klonal stamcelleforskningen lidelse, har å engraft human MDS celle i immunodeficient mus vært stort sett vellykket, fordi MDS cellene engraft dårlig11, 12,13,14 og mus ikke utvikle kliniske sykdommen. I et forsøk på å identifisere hvilke blodkreft cellene kan overføre MDS, vi snudde NHD13 modellen, og viste at vi kunne engraft MD som en sykdom som viste alle kardinal funksjonene av menneskelig MDS, inkludert perifert blod cytopenias dysplasia, og transformasjon til AML15. I denne rapporten presenterer vi de tekniske detaljene for disse eksperimenter, samt tilnærminger til ytterligere smuldre vekk blodkreft stilk og precursor celler (HSPC), i et forsøk på å identifisere MDS-starte celler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Dyr fremgangsmåtene i denne artikkelen ble godkjent av National Cancer Institute i Bethesda Animal Care og bruk komiteen, og overholder policyene i Public Health Service policyen på Human vare og bruk av forsøksdyr, det Dyrevelferd handling, og guiden og bruk av forsøksdyr.

1. celle forberedelse

  1. Høsting benmarg kjerne celle (BMNC)
    1. Bruk bare sterile materialer. Sterilisere gjenbrukbare instrumenter med en steam autoclave. Kjøpe nåler, sprøyter og plast ware i voksen sterile containere. Utfør alle dyr og celle manipulasjoner i en klasse II, Type A2 biologisk sikkerhet regjering.
    2. Forberede BMNCs i en 14 mL rundt bunnen rør som inneholder 3 mL HF2 (Hanks balansert salt løsning med 2% fosterets bovin serum).
    3. Euthanize C57Bl6 donor mus (positivt for CD45 allelet CD45.2), alder vanligvis 2-6 måneder, bruke en CO2 kammer.
    4. Sterilisere musen carcass av sprøyting 70% etanol over hele kroppen med en sprayflaske. Skrelle huden fra beina, fra bekkenet til ankelen.
    5. Fjern femora og tibiae fra carcass sterilt saks (rett, skarp/skarp, 11,5 cm) og tang (Graefe, taggete, 0,8 mm tips bredde). Trim vedlagte muskler klart.
    6. Skjær tibia proksimale og distale ender med saksen. Holder tibia med tang, sette inn en 27-gauge 3 mL sprøyte som inneholder 2,5 mL av HF2 inn i tibial margtransplantasjon hulrommet på distale tibia (ankel). Tømme benmarg cellene fra tibia bruke lett trykk i det 14 mL rundt bunnen rør.
      1. Gjenta for andre tibia.
    7. Klippe proksimale og distale endene av femur med saks. Flush femur margtransplantasjon hulrommet ved å sette inn en 20-gauge nål festet til en 3 mL sprøyte som inneholder 2,5 mL av HF2 til distale femur margtransplantasjon hulrom og bruke lett trykk på sprøyten.
      1. Gjenta for andre femur, samle alle benmarg fra begge tibiae og femora i den samme 14 mL rundt bunnen rør.
    8. Spre margtransplantasjon massen av aspirating opp og ned flere ganger med samme 20-måle pinne festet til 3 mL sprøyte.
  2. Antistoff farging av BMNC
    1. Antall BMNC. Legge til 20 µL av en 3% eddiksyre løsning 20 µL av BMNC suspensjon generert i trinn 1.1.8. Deretter telle ved hjelp av en hemocytometer og en invertert mikroskop.
    2. Pellets til BMNC med mild sentrifugering 450 x g i 5 min på 4 ° C. Resuspend pellets med HF2 med 90 µL per 107 celler og legge 10 µL biotinylated anti-lineage antistoff cocktail til celle suspensjon.
    3. Rugende etter 20 min på 4 ° C, vaskes farget cellene med 3 mL fosfat-bufret saltvann (PBS).
    4. Resuspend BMNC med 100 µL av HF2 per 107 celler. Legg 2 µL av allophycocyanin (APC) konjugert anti-biotin mot celle suspensjon, etterfulgt av inkubasjon ved 4 ° C i 20 min.
    5. Skyll den farget BMNC med 3 mL PBS og resuspend BMNC med HF2 med 0,2 µg/mL propidium iodide (PI) for flyt cytometri celle sortering.
  3. Flow cytometri celle sortering av BMNC
    1. Kalibrere flyt cytometri cellen sorter. Optimalisere alle photomultiplier rør (PMTs), scatter og fluorescens parametere bruke unstained kvinne celler og angi innen lineær hvert detektor.
    2. Forberede unstained kvinne, PI-farget og APC merket avstamning cocktail celler parallelt fra trinn 1.2. Analysere spectral erstatningskrav.
    3. Diskriminere doublet celler av sekvensiell gating FSC-H vs SSC-H, 640-SSC-A vs. 640-SSC-H og 640-SSC-S vs 640-SSC-W.
    4. Utelukke uholdbare celler med PI spent på 561 nm og utslipp samlet med en 614/20 band pass filter. Opphisse avstamning APC merket cellene på 640 nm og samle utslipp med et 671/30 band pass filter.
    5. Registrere fluorescens verdier som spenning høyde og samle minst 100.000 hendelser i listen modus datafiler visualisere befolkningen skal sorteres.
    6. Beregne spectral kompensasjon etter å anskaffe tre eksempler på 10.000 celler for følgende: umerkede celler, PI merket celler og anti-lineage antistoff cocktail konjugert med APC merket celler.
    7. Angi tre regioner sortere avstamning negative (LN), avstamning positive (LP) med svak fluorescens intensitet (LP1) og LP befolkningen med lyse fluorescens (LP2) i 5 mL rør som inneholder 0,5 mL 10% FBS medier.
    8. Sortere celler ved hjelp av en en dråpe innhylle og rense avbryte modus.
    9. Utføre innlegget Sorter analyse med 1000 totale celler på hver sorterte prøve å bekrefte renhet og levedyktigheten til sorterte cellene.
    10. Samle sorterte celler med sentrifugering 450 x g i 5 min på 4 ° C og resuspend celle pellets med 0,5 mL HF2.
    11. Bekreft sorterte cellen med hemocytometer og Trypan blå. Justere celle nummer med HF2 for transplantasjon.
      Merk: Et bredt spekter av BMNC bestander kan være isolert for transplantasjon med flere kombinasjoner av fluorochrome-konjugerte antistoffer i trinn 1.2.2 ovenfor.

2. mottaker mus forberedelse og blodkreft stamcelletransplantasjon (HSCT)

  1. Utarbeidelse av transplantasjon mottakere
    1. Opprettholde veterinær og røkting av congenic mottaker mus (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) i et bestemt patogen gratis (SPF) dyr anlegg.
    2. Gi sterilt vann som inneholder 100 mg/L av ciprofloxacin til mottakerne i 7 dager før dødelig dose (9 Gy) bestråling forebyggende dekontaminering av gastrointestinal spor, og opprettholde i 14 dager etter bestråling.
    3. Gi en dødelig dose (9 Gy) bestråling fra en Cs kilde som følger. Bruk en utdannet, sertifisert Cs operatør. Angi Cs kilde maskinen levere 70 cGy/min hele kroppen gamma bestråling. Plasser 10 mus i en spesialdesignet holderen og holderen inn i det irradiator kammeret. Levere 9 Gy hele kroppen bestråling i 13 min og tilbake mus til deres burene.
  2. Blodkreft stamcelletransplantasjon
    1. Bland vill type (WT) BMNC fra en congenic mottaker mus (B6-LY5.1/Cr, CD45.1) på en celle dose av 2 x 105 celler per mus med 2 til 5 x 104 celler av renset test BMNC forberedt med flyt cytometri sortering som beskrevet i 1.3 ovenfor. Bland celler i samme sprøyten.
      Merk: WT BMNC gi en stråling-effekt til mottakeren musen og tillate overlevelse av mottakeren musen Hvis testen cellene ikke støtter hematopoiesis. WT BMNC brukt i denne typen eksperiment express CD45.1 allelet, og dermed kan skilles fra test celler ved hjelp av antistoffer som diskriminerer mellom CD45.1 og CD45.2. WT BM cellene kalles "hjelper celler", "stråling-sparing celler" eller "konkurrent celler".
    2. Juster celle blanding volumet til 200 µL per mottaker ved hjelp av sterile HF2 for å tilrettelegge injeksjon.
    3. Transplantasjon celle blandinger til drepende bestrålt mottaker mus via intravenøs hale blodåre injeksjon bruker 1 mL sprøyte og 28-gauge nål, innen 24 timer av bestråling. Plass musen halen under en varmelampe, som varme fører til hale blodåre dilatasjon.
      Merk: Euthanize alle mottaker musene på slutten av studien og evaluere sykdomsprogresjon ved obduksjon, histology og flowcytometri.

3. engraftment analysen med Flow cytometri

  1. For å evaluere donor celle engraftment, samle perifert blod (PB) fra mottakeren musene på 6 uke 12 uke og 16 uke etter transplantasjon.
  2. Varm mottakerne i buret med varmelampe i ca 1 min og Plasser musen i en restrainer.
  3. Klipp halen venen med skalpell (blad 10 #3 skalpell håndtere) og samle 100 µL av PB per mottaker ved hjelp av et microcapillary rør med EDTA som en antikoagulerende.
  4. Del samlet PB i to like dele ved å plassere 50 µL i et sterilt microcentrifuge rør. Bruke en aliquot for et automatisert full blodstatus (CBC) (utført NCI histopatologi kjernen) og bruk den andre aliquot til antistoff farging og flow cytometri.
  5. For å oppdage donor engraftment av flowcytometri, lyse røde blodlegemer (RBC) ved å legge til 1 mL av hypotonisk RBC lyseringsbuffer (8.29 g/L NH4Cl, 1 g/L KHCO3, 0.037 finans Na2EDTA, pH 7.2) 50 µL av samlet PB. Vortex prøve å blande og ruge 10 min ved romtemperatur.
  6. Sentrifuge lysed PB 4600 x g for 1,5 min. nøye Sug opp nedbryting og kast.
  7. Delvis avbryte celle pellet ved forsiktig å trykke eller "blar" bunnen av røret. Legg 1.3 mL PBS i pellet ligger i rør og sentrifuge 4600 x g for 1,5 min. nøye leveringstanken og Forkast nedbryting.
  8. Forstyrre den cellen pellet ved å trykke eller flicking, og legge 200 µL av HF2 med 5% rotten serum til celle pellets.
  9. Legg til anti-CD45.2 antistoff (1 µL) konjugert med allophycocyanin (APC) til celle suspensjon. Ruge på 4 ° C for minst 30 min og kort virvle blandingen.
  10. Etter farging, vask cellene to ganger som beskrevet ovenfor, og resuspend med 400 µL av HF2 med 1 µg/mL av PI.
  11. Merker engraftment med en 4-farge flyt cytometer. Få mer informasjon om celletyper i perifert blod ved å legge ytterligere antistoffer for å finne spesifikke celletyper, som B- og T-lymfocytter.
  12. Registrere føljetong engraftment data ved hjelp av regnearket slik at ytterligere analyse av data.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Vi viser representant tall for resultatene av flere eksperimenter. Figur 1 viser et representativ flowcytometri sortering eksperiment. Under normale blodkreft differensiering, som celler blir forpliktet til en bestemt blodkreft linje, de erverve avstamning-definerende celle overflate markører og miste potensialet for selvtillit fornyelse. Derfor i vill-type mus, er Stamcelle selvtillit fornyelse begrenset til avstamning-negativ BMNC. I dette eksperimentet sortert vi BMNC fra NHD13 benmarg i avstamning-negativ, lavt lineage positiv og høy avstamning-positive celler. Dette sortert celler ble deretter transplanted i WT mottakere til selvtillit fornyelse kapasitet.

Figur 2 viser resultater fra en separat eksperiment, i hvilken avstamning negativ celler eller usortert celler fra NHD13 givere med MDS ble transplantert inn drepende bestrålt WT mottakere. NHD13 donor cellene uttrykte den CD45.2 celle overflaten markøren, mens WT konkurrent cellene (se avsnitt 2.2.1 ovenfor) uttrykt CD45.1 celle overflaten markøren. Figur 3 viser føljetong engraftment analyse av enten usortert NHD13 BMNC, eller avstamning-negativ NHD13 BMNC. Etter ca 16 uker utkonkurrere de NHD13 cellene WT cellene, som vist av den økende andelen av CD45.2 + celler i perifert blod. Figur 4 viser et eksempel på leukemic transformasjon fra mus transplantert med NHD13 MDS celler.

Figure 1
Figur 1: flowcytometri sortering strategi BMNC farget med avstamning antistoff cocktail. Hver rektangulær boks på dot tomten representerer celle befolkningen sortert for HSCT å vurdere celle funksjon. R4 avstamning negativ. R5, lavt lineage positiv; R6, høy avstamning positiv. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: representant FACS profiler for engraftment analysen bruker donor spesifikt anti-CD45.2 antistoff. BMNC mottaker ble transplantert med 1 X 106 NHD13 BMNC (CD45.2 +) og LNBM mottaker med 5 X 104 NHD13 avstamning negative BM celler (CD45.2 +). I hvert tilfelle, ble 2 x 105 WT BMNC (CD45.1 +) brukt som konkurrent celler. Tall i øvre og nedre bokser representerer CD45.2 positiv (avledet fra NHD13 donor) og CD45.2 negative (avledet fra WT konkurrent celler), henholdsvis på etter transplantasjon 6 ukers og 24 uke. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: Engraftment kinetics av enkeltmottakere etter transplantasjon. Hver linje i diagrammet viser føljetong engraftment analyser av en enkelt mottaker musen. BMNC mottakere ble transplantert med 1 X 106 celler av NHD13 hele BMNC og LNBM mottakere ble transplantert med 5 X 10-4 i NHD13 avstamning negative BM etter sortering. NHD angir NHD13 donor. BM, BMNC mottaker mus; LNBM, avstamning negative BM mottakeren. PBMC, perifert blod mononucleated celle. I alle tilfeller utkonkurrere NHD13 donor cellene gradvis WT cellene. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4: mai-Grünwald Giemsa (MGG) flekker av benmarg (BM) fra MDS mottaker kommet til AML. Legg merke til tilstedeværelsen av mange støt og umodne. Pilene angir eksplosjonene, og pilspisser angir umodne skjemaer. Opprinnelige 400 X. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Selv om MDS er en klonal blodkreft stamcelletransplantasjon lidelse, Lederne "stem" eller initiering celler, har ennå ikke blitt beskrevet. Vi viste tidligere at MDS kan transplantable til WT mus med benmarg fra NHD13 mus ved HSCT, preget av macrocytic anemi, leukopeni, nøytropeni og morfologiske bevis av dysplasia15. I tillegg identifisert konkurransedyktig repopulation analyser en vekst fordel av celler fra benmargen NHD13 MDS. Sammen bety disse funnene eksistensen av en MDS stammen eller initiering celle. Flere eksperimenter er nå pågår, rettet mot raffinering immunophenotypic kjennetegner en MDS starte celle15 bruker mer definert stammen og stamfar celle markører (CD150, CD48, c-Kit og Sca-1)16 kombinert med linjen markør flekker metoden beskrevet i denne protokollen.

Identifisere MDS innebærer starte celler med NHD13 mus omfattende flyt cytometri sortering prosedyren. Ex vivo manipulering av primære BMNCs plasserer belastning på cellene, noe som kan resultere i celledød eller funksjonelle tap. Derfor bør gjøres for å redusere tiden av ex vivo manipulasjon inkludert av flyt cytometri sortering. -Maker og modell av flyt cytometri instrumenter og flow dynamics vises flere variabler som kan påvirke celle levedyktighet etter sortering. HSCT prosedyren krever celle infusjon gjennom en blodåre. Selv om hale blodåre injeksjon kan være en mer utfordrende teknikk enn retro-orbital innsetting, i vår erfaring, kan hale blodåre injeksjon utføres raskere enn retro-orbital innsetting som mottaker mus ikke er anesthetized for hale venen injeksjoner. Begrensning av injeksjon volum (maksimalt 150 µL) er en annen sak i retro-orbital innsetting17, som en høyere celle konsentrasjon kan føre til ytterligere tap av celler i cellen forberedelse, for eksempel klippe av celler på veggen av sprøyter og nåler.

Selv om disse eksperimentene er fokusert på NHD13 modell for MDS, kan HSCT sortering og transplantasjon tilnærminger beskrevet her brukes for alle genmodifiserte musen. I tillegg til bestemme egenskapene til selv fornyende blodkreft cellene, kan denne transplantasjon brukes til andre formål. For eksempel, hvis man ønsker å få en stor kohort av mus med MDS benmarg å vurdere effekten av behandling med et lite molekyl, en stor kohort (30 + mus) kan genereres ved transplanting WT mus med MDS BM. Alternativt, HSCT strategien kan reverseres. I et forsøk på å kurere mus i MDS, NHD13 mus med MDS kan være transplantert med WT BM og suksessen til transplantasjon kan overvåkes ved å vurdere andelen blodkreft celler som uttrykker CD45.1 (som markerer WT BM) i motsetning til CD45.2 (som markerer MDS BM) 18.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Vi har ingenting å avsløre.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av Intramural forskningsprogrammet av National Cancer Institute, National Institutes of Health (gi tall ZIA SC 010378 og BC 010983).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
14 mL round bottom tube Falcon 352057
Hank's balanced salt solution Lonza 10-527F
Anti-CD45.2 antibody Southern Biotech 1800-15 LOT# A077-T044O
3 mL Syringe Monoject 8881513934
27-G needle BD 305109
20-G needle BD 305176
Lineage Cocktail Miltenyi 130-090-858 LOT# 5170418221
Anti-Biotin antibodies Miltenyi 130-113-288 LOT# 5171109046
1 mL Syringe Excelint 26027 Insulin Syringe
Heating Lamp Thermo Fisher Scientific E70001901
FACS machine Cytec FACScan 2 lasers, 5 color detectors
FACS sorting instrument Beckman Coulter MOFLO ASTRIOS 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously
Propidium Iodide Thermo Fisher Scientific P3566
Gamma Irradiator Best Theratronics Gammacell 40
Blood collection tube RAM scientific 76011
Recipient mice Charles River B6-LY5.1/Cr, CD45.1
NUP98-HOXD13 mice n/a C57Bl/6, CD45.2 Colony maintained at NIH
5 mL round bottom tube Falcon 352058

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Corey, S. J., et al. Myelodysplastic syndromes: the complexity of stem-cell diseases. Nature Reviews Cancer. 7 (2), 118-129 (2007).
  2. Garcia-Manero, G. Myelodysplastic syndromes: 2015 Update on diagnosis, risk-stratification and management. American Journal of Hematology. 90 (9), 831-841 (2015).
  3. Heaney, M. L., Golde, D. W. Myelodysplasia. The New England Journal of Medicine. 340 (21), 1649-1660 (1999).
  4. Nimer, S. D. Myelodysplastic syndromes. Blood. 111 (10), 4841-4851 (2008).
  5. Aul, C., Giagounidis, A., Germing, U. Epidemiological features of myelodysplastic syndromes: results from regional cancer surveys and hospital-based statistics. International Journal of Hematology. 73 (4), 405-410 (2001).
  6. Pedersen-Bjergaard, J., Christiansen, D. H., Desta, F., Andersen, M. K. Alternative genetic pathways and cooperating genetic abnormalities in the pathogenesis of therapy-related myelodysplasia and acute myeloid leukemia. Leukemia. 20 (11), 1943-1949 (2006).
  7. Uy, G. L., et al. Dynamic changes in the clonal structure of MDS and AML in response to epigenetic therapy. Leukemia. 31 (4), 872-881 (2017).
  8. Gough, S. M., Slape, C. I., Aplan, P. D. NUP98 gene fusions and hematopoietic malignancies: common themes and new biologic insights. Blood. 118 (24), 6247-6257 (2011).
  9. Lin, Y. W., Slape, C., Zhang, Z., Aplan, P. D. NUP98-HOXD13 transgenic mice develop a highly penetrant, severe myelodysplastic syndrome that progresses to acute leukemia. Blood. 106 (1), 287-295 (2005).
  10. Block, M., Jacobson, L. O., Bethard, W. F. Preleukemic acute human leukemia. Journal of the American Medical Association. 152 (11), 1018-1028 (1953).
  11. Thanopoulou, E., et al. Engraftment of NOD/SCID-beta2 microglobulin null mice with multilineage neoplastic cells from patients with myelodysplastic syndrome. Blood. 103 (11), 4285-4293 (2004).
  12. Kerbauy, D. M., Lesnikov, V., Torok-Storb, B., Bryant, E., Deeg, H. J. Engraftment of distinct clonal MDS-derived hematopoietic precursors in NOD/SCID-beta2-microglobulin-deficient mice after intramedullary transplantation of hematopoietic and stromal cells. Blood. 104 (7), 2202-2203 (2004).
  13. Benito, A. I., et al. NOD/SCID mice transplanted with marrow from patients with myelodysplastic syndrome (MDS) show long-term propagation of normal but not clonal human precursors. Leukemia Research. 27 (5), 425-436 (2003).
  14. Medyouf, H., et al. Myelodysplastic cells in patients reprogram mesenchymal stromal cells to establish a transplantable stem cell niche disease unit. Cell Stem Cell. 14 (6), 824-837 (2014).
  15. Chung, Y. J., Choi, C. W., Slape, C., Fry, T., Aplan, P. D. Transplantation of a myelodysplastic syndrome by a long-term repopulating hematopoietic cell. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (37), 14088-14093 (2008).
  16. Pietras, E. M., et al. Functionally Distinct Subsets of Lineage-Biased Multipotent Progenitors Control Blood Production in Normal and Regenerative Conditions. Cell Stem Cell. 17 (1), 35-46 (2015).
  17. Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. Retro-orbital injections in mice. Lab Animal. 40 (5), 155-160 (2011).
  18. Chung, Y. J., Fry, T. J., Aplan, P. D. Myeloablative hematopoietic stem cell transplantation improves survival but is not curative in a pre-clinical model of myelodysplastic syndrome. PLoS One. 12 (9), e0185219 (2017).

Tags

Utviklingspsykologi biologi problemet 140 AML syndromer blodkreft stamcelletransplantasjon fluorescens-aktivert celle sortering benmarg NUP98-HOXD13 akutt myelogen leukemi blodkreft kreft
Bruk av blodkreft stamcelletransplantasjon å vurdere opprinnelsen til AML
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chung, Y. J., Khawaja, G., Wolcott,… More

Chung, Y. J., Khawaja, G., Wolcott, K. M., Aplan, P. D. Use of Hematopoietic Stem Cell Transplantation to Assess the Origin of Myelodysplastic Syndrome. J. Vis. Exp. (140), e58140, doi:10.3791/58140 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter