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Articolo metodologico

Monitoraggio della colonizzazione e della manutenzione batterica sull'Arabidopsis thaliana Radici in un sistema idroponico galleggiante

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DOI:

10.3791/59517

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28 maggio 2019

 ,  , 

In questo articolo

Sommario

Qui descriviamo un test di crescita delle piante idroponica per quantificare la presenza delle specie e visualizzare la distribuzione spaziale dei batteri durante la colonizzazione iniziale delle radici delle piante e dopo il loro trasferimento in diversi ambienti di crescita.

Abstract

I batteri formano microbiomi di rizosfera complessi modellati da microbi interagenti, organismi più grandi e l'ambiente abiotico. In condizioni di laboratorio, la colonizzazione della rizosfera da batteri che promuovono la crescita delle piante (PGPB) può aumentare la salute o lo sviluppo di piante ospiti rispetto alle piante non colonizzate. Tuttavia, nelle impostazioni di campo, i trattamenti batterici con PGPB spesso non forniscono benefici sostanziali alle colture. Una spiegazione è che questo può essere dovuto alla perdita del PGPB durante le interazioni con microbi del suolo endogeni durante la durata della vita della pianta. Questa possibilità è stata difficile da confermare, dal momento che la maggior parte degli studi si concentra noto sulla colonizzazione iniziale piuttosto che sul mantenimento del PGPB all'interno delle comunità di rizosfera. Si ipotizza qui che l'assemblaggio, la coesistenza e il mantenimento delle comunità batteriche siano modellati da caratteristiche deterministiche del microambiente di rizosfera, e che queste interazioni possano influenzare la sopravvivenza di PGPB in ambienti nativi. Per studiare questi comportamenti, un saggio idroponico della crescita vegetale è ottimizzato utilizzando l'Arabidopsis thaliana per quantificare e visualizzare la distribuzione spaziale dei batteri durante la colonizzazione iniziale delle radici delle piante e dopo il trasferimento a una crescita diversa Ambienti. La riproducibilità e l'utilità di questo sistema vengono quindi convalidate con la ben studiata PGPB Pseudomonas simiae. Per studiare come la presenza di più specie batteriche può influenzare la colonizzazione e la dinamica di manutenzione sulla radice della pianta, una comunità modello da tre ceppi batterici (un Arthrobacter, Curtobacterium, e Microbacterium specie) originariamente isolata dalla rizosfera A. thaliana. È dimostrato che la presenza di queste diverse specie batteriche può essere misurata utilizzando questo saggio idroponico di pianta-maintanence, che fornisce un'alternativa agli studi della comunità batterica basata sul sequenziamento. Studi futuri che utilizzano questo sistema possono migliorare la comprensione del comportamento batterico nei microbiomi vegetali multispecie nel tempo e nelle mutevoli condizioni ambientali.

Introduzione

La distruzione delle colture da malattie batteriche e fungine comporta una riduzione della produzione alimentare e può interrompere gravemente la stabilità globale1. Sulla base della scoperta che i microbi nei suoli soppressivi sono responsabili dell'aumento della salute delle piante2,gli scienziati hanno chiesto se il microbioma vegetale possa essere sfruttato per sostenere la crescita delle piante modificando la presenza e l'abbondanza di particolari specie batteriche3. I batteri trovati per aiutare nella crescita o nello sviluppo delle piante sono collettivamente rilegati ai batteri che promuov....

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Protocollo

NOTA: la configurazione sperimentale viene descritta per chiarezza e utilizzata per generare i risultati rappresentativi inclusi in questo report, ma le condizioni possono essere modificate come desiderato. Tutte le misure devono essere eseguite utilizzando PPE e seguendo le ricattie istituzionali e federali per la sicurezza, secondo lo stato BSL dei batteri utilizzati.

1. Caratterizzazione dei batteri

  1. Determinare la morfologia dei batteri sulla piastra di agar medio di crescita. Risospendere le celle a un valore approssimativo Di OD600 - 0,5 e placcare un volume di 1 ll sul mezzo di agar di scelta. Aggiungere X-gal all....

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Risultati

Il ben caratterizzato PGPB P. simiae WCS417r è noto per colonizzare le radici di A. thaliana nella cultura idroponica. Questo batterio naturalmente fluorescente può essere facilmente visualizzato utilizzando la microscopia sulle radici delle piantine dopo la colonizzazione (Figura 2). Anche se è possibile immaginare l'intera lunghezza di queste radici di a. thaliana (lunghezza 4-6 mm), farlo per molte piante richiederebbe una quanti.......

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Discussione

Le piante in tutti gli ambienti interagiscono con migliaia a milioni di diversi batteri e funghi5,7. Queste interazioni possono avere un impatto negativo e positivo sulla salute delle piante, con potenziali effetti sulla resa delle colture e sulla produzione alimentare. Lavori recenti suggeriscono anche che la colonizzazione variabile delle colture da parte dei PGPB può spiegare le dimensioni imprevedibili delle piante e la resa delle colture nelle prove sul camp.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto da fondi di ricerca forniti dal Dipartimento di Ricerca Biologica e Ambientale Dell'Energia (DOE-BER 0000217519 a E.A.S.), dalla National Science Foundation (INSPIRE IOS-1343020 a E.A.S.). SLH è stata anche sostenuta dal National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program. Ringraziamo il Dottor Jeffery Dangl per aver fornito ceppi batterici e informazioni preziose. Ringraziamo il Dottor Andrew Klein e Matthew J. Powers per i suggerimenti sperimentali. Infine, SLH desidera ringraziare le connessioni sui social media per ricordarci che diffondere la scienza è un privilegio e una responsabilità, soprattutto attraverso mezzi cr....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Materiali necessari
1,5 mL provette eppendorfqualsiasiN/A
Piastre a 24 pozzettiBD Falcon1801343
AerasealExcel ScientificBE255A2
AutoclavequalsiasiN/A
Batteri di interessequalsiasiN/AConservato a - 80? C in glicerolo al 40% preferito
BactoAgarBD2306428; REF 214010
candegginaqualsiasiN/A
ConvironqualsiasiN/AGiorno corto Cicli luce-buio: 460-600 &; Moli/m²/s impostato a 9/15 ore chiaro/scuro a 18/21? C, con presa di corrente interna
Essiccatore Barattolo: vetro o plastica pesantequalsiasiEtanolo N
fiamma
ForzaA
pinzaIncubatore
A temperaturaottimale per la crescita di batteri specificati
Acido cloridrico Acido cloridrico Acido cloridrico
Lennox LB BrodoRPIL24066-1000.0
MicrocentrifugaqualsiasiN/A
MicropipetterqualsiasiN/AVolumi 5 & micro; L a 1000 & micro; L
Microscopio (preferibilmente a fluorescenza)qualsiasiN/APotrebbe essere leggero se la migliore definizione non è importante
Sali MS + MESRPIM70300-50.0
Agitatore per piastre orbitaliqualsiasiN/AIn grado di funzionare a 220 giri/min per almeno 96 ore
Piastre di PetriN/A50 mL di volume totale
SerbatoiqualsiasiN/A
SpettrofotometroqualsiasiN/A
Perforatore standardqualsiasiN/ADiametro del punzone di circa 7 mm
Acqua sterilequalsiasiN/A
Nastro chirurgico3MMMM1538-1
Rete in teflonMcMaster-Carr1100t41
UltrasuonatorequalsiasiN/A
Miscelatore a vorticequalsiasiN/A
X-galGoldBiox4281caltri fornitori disponibili
Materiali consigliati
24 Attacco per ultrasuonatore a puntaqualsiasiN/APer sonicare più campioni contemporaneamente. Può essere fatto individualmente
Alumaseal IIExcel ScientificFE124F
Perle di vetroqualsiasiN/A
Multipetter/RepetterqualsiasiN/A
Piastre sterili a 96 pozzettiqualsiasiN/APer diluizioni seriali. Può essere sostituito da eppendorf tubes
Materiali biologici utilizzati
Arabidopsis thaliana semiqualsiasiN/ARaccomandiamo l'Arabidopsis Biological Resource Center for seed stocks
Arthrobacter nicotinovoransLevy, et al. 2018
Curtobacterium oceanosedimentumLevy, et al. 2018
Microbacterium oleivoransLevy, et al. 2018
Pseudomonas simiae WCS417rPubblicato in un sistema simile in Haney, et al. 2015. Ceppo utilizzato sviluppato in Cole, et al. 2017
A qualsiasi

Riferimenti

  1. Strange, R. N., Scott, P. R. Plant disease: a threat to global food security. Annual Review of Phytopathology. 43, 83-116 (2005).
  2. Cook, A. M., Grossenbacher, H., Hütter, R. Isolation and cultivation of microbes with biodegradative potential. Experientia. 39

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Ristampe e permessi

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