Name: Flash Congelamento e criosezionamento E12.5 cervello di topo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: Impara le tecniche di criosezionamento per tessuto cerebrale embrionale di topo usando il congelamento rapido e il criostato. Questo metodo fornisce consigli pratici per ottenere sezioni di alta qualità senza crepe o distorsioni.

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<ol><li> Fissare il tessuto in paraformaldeide 4% in PBS per il tempo desiderato. </li><li> Saccarosio infondere tessuto (crioprotezione) <ol><li> Preparare la soluzione di saccarosio al 30% in PBS w / v nel 2059 tubo. </li><li> Lavare il tessuto in PBS 3x (~ 5 min con dondolo). </li><li> Tessuto posto in soluzione di saccarosio al 30%. Tessuto non affonderà. </li><li> Posizionare il tessuto in 4 ° C durante la notte, o fino a quando è affondata. </li></ol></li><li> Dimensione etichetta appropriata cryomold con informazioni e orientamento. </li><li> Riempire cryomold con OCT (evitare bolle). </li><li> Trasferimento di tessuto a bagno ottobre e il cappotto con ottobre </li><li> Trasferimento di tessuto da ottobre a cryomold. </li><li> Orientare il tessuto al microscopio. </li><li> Versare l&#39;azoto liquido in plastica piastra di Petri. </li><li> Rapidamente e con attenzione abbassare il tessuto cryomold in azoto. (Non immergere la parte superiore del cryomold.) </li><li> Quando l&#39;OCT è solido bianco, posto il tessuto congelato nel freezer -80 ° C per la conservazione. </li><li> Equilibrare tessuto a ~ 20 ° C per almeno 30 min. prima di sezionamento. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Stampo per criosezione Tissue-Tek</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di saccarosio</td><td></td><td></td><td>soluzione di saccarosio al 30% in PBS p/v</td></tr><tr><td>paraformaldeide</td><td></td><td></td><td>paraformaldeide al 4% in PBS</td></tr></tbody></table>

flash congelamento e criosezionamento e12.5 cervello di topo

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">Dimostrato in questo video sono le tecniche per flash congelamento e sezionamento del tessuto embrionale del cervello di topo. Consigli utili per l&#39;utilizzo del criostato sono dati, compresi i metodi di risoluzione dei problemi che possono essere utilizzati durante il taglio per assicurare che le sezioni risultanti tessuti sono privi di crepe e altre distorsioni.</p>

Flash Congelamento e criosezionamento E12.5 cervello di topo

<p>Ciao, sono Spencer Curley dell'Università della California, Irvine, e del laboratorio di Ed Maki, e vi mostrerò come eseguire il taglio criostatico. Per farlo, utilizzo innanzitutto questi reagenti comunemente impiegati. Il composto di inclusione o il mezzo di inclusione che uso si chiama OCT, acronimo di optimal cutting temperature.</p><p>È una soluzione limpida, molto densa e viscosa, che trattiene bene il tessuto mentre lo si orienta, e successivamente si congela; inoltre, è solubile in acqua, quindi può essere rimossa durante qualsiasi procedura di colorazione. Pertanto, incorporo il tessuto in uno stampo. Questi contenitori per biopsie in stampi criogenici sono disponibili in diverse dimensioni.</p><p>Utilizzerò questo stampo più piccolo perché lavoro con tessuti embrionali di topo. Congeliamo rapidamente i nostri tessuti in azoto liquido. Per prima cosa, riempirò questa fiala vuoto-protetta con azoto liquido proveniente dalla bombola qui presente.</p><p>Prima di congelare rapidamente il tessuto, è necessario effettuare una crioprotezione del tessuto, altrimenti il congelamento stesso distruggerebbe il tessuto. Pertanto, si immerge il tessuto in una soluzione al 30% di saccarosio per tutta la nott</p>

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Biologia

Questo video dimostra la crioconservazione del cervello di un topo per isolare aree anatomiche discrete o specifiche popolazioni cellulari dai tessuti tumorali. Questa tecnica è fondamentale per ottenere una risoluzione ottica ottimale della morfologia del tessuto cerebrale per la successiva analisi.

Crioconservazione del cervello murino mediante congelamento rapido: una tecnica per congelare rapidamente un intero campione di cervello di topo per l'analisi istologica

In questo video, dimostriamo il sezionamento di un tessuto tumorale cerebrale di topo congelato utilizzando un criostato. Le sezioni di tessuto cerebrale congelate così ottenute vengono conservate a basse temperature fino a ulteriori analisi.

Sezionamento del tessuto cerebrale del topo congelato: una procedura per ottenere sottili sezioni di tessuto congelato dal tessuto cerebrale murino congelato

Questo video mostra un protocollo dettagliato passo dopo passo per la preparazione di sezioni di tessuto cerebrale di topo congelate per le analisi a valle.

Elaborazione di un cervello di topo per l'analisi a valle

Qui, presentiamo un protocollo per congelare e sezione di tessuto cerebrale da più animali come alternativa ad alta produttività per singoli cervelli di elaborazione. Questo riduce la variabilità di colorazione durante immunohistochemistry e imaging e tempo cryosectioning.

Cryosectioning simultanea di più cervelli roditore

Questa procedura descrive la raccolta di regioni cerebrali congelate discrete per ottenere proteine e RNA di alta qualità utilizzando strumenti economici e comunemente disponibili.

Raccolta di regioni cerebrali del roditore congelato per analisi a valle

Questo protocollo descrive un metodo per combinare l'ibridazione in situ a fluorescenza (FISH) e l'immunoistochimica a fluorescenza (IHC) in sezioni cerebrali di topo sia fresche congelate che fisse, con l'obiettivo di ottenere FISH multimarca e segnale IHC di fluorescenza. IHC ha preso di mira le proteine citoplasmatiche e attaccate alla membrana.

Combinazione dell'ibridazione <em>in situ</em> a fluorescenza multiplex con immunoistochimica fluorescente su sezioni cerebrali di topo fresche, congelate o fisse

Viene presentato un comodo metodo di perfusione alimentato a gravità per l'analisi istologica del sistema nervoso centrale del topo. Il rilevamento immunofluorescente della α-sinucleina fosforilata è dimostrato in un modello murino di malattia di Parkinson. Questo lavoro descrive anche in modo completo le fasi di perfusione transcardica, dissezione, congelamento / incorporamento dei tessuti e sezionamento congelato.

Un metodo di perfusione transcardica alimentato per gravità per l'analisi istologica del sistema nervoso centrale del topo

Il presente protocollo descrive una strategia pratica per accelerare la fase di verifica delle coordinate di iniezione stereotassiche prima di eseguire il tracciamento virale utilizzando coloranti e sezioni congelate.

Validazione preliminare delle coordinate di iniezione stereotassiche tramite criosezione

Questo studio presenta un protocollo semplificato per l'elaborazione dei tessuti che coinvolge la decapitazione, la fissazione, la criosezione, la colorazione a fluorescenza, l'immunocolorazione e l'imaging, che può essere esteso all'imaging confocale e multifotonico. Il metodo mantiene un'efficacia paragonabile alle dissezioni complesse, bypassando la necessità di capacità motorie avanzate. L'analisi quantitativa delle immagini offre un ampio potenziale di indagine.

Criosezione diretta delle teste di <em>Drosophila</em> per una migliore colorazione a fluorescenza cerebrale e immunocolorazione

La retina mostra una complessa organizzazione spaziale attraverso la sua struttura laminare. Le moderne tecniche di trascrittomica spaziale e sequenziamento richiedono sezioni di tessuto &lt; 20 μm di spessore, limitandone l'applicabilità nella ricerca retinica. Questo metodo di criosezione appena congelato produce sottili sezioni en face della retina di topo preservando le relazioni spaziali planari, consentendo una mappatura molecolare completa tra le lamine.

<em>En face</em> Criosezione della retina di topo per analisi molecolare spaziale ad alta dimensione

Questo protocollo standardizza la criotomografia elettronica (crio-ET) per tessuti spessi integrando il congelamento ad alta pressione (HPF) con il metodo waffle, il sollevamento criogenico del fascio di ioni a fuoco (crio-FIB) e l'acquisizione parallela a simmetria dose, producendo lamelle uniformemente sottili e campioni vitrificati per analisi riproducibili in situ nell'ippocampo del topo.

Flusso di lavoro di crio-tomografia elettronica per tessuti spessi dimostrato nell'ippocampo del topo

Impara le tecniche di criosezionamento per tessuto cerebrale embrionale di topo usando il congelamento rapido e il criostato. Questo metodo fornisce consigli pratici per ottenere sezioni di alta qualità senza crepe o distorsioni.

Flash Congelamento e criosezionamento E12.5 cervello di topo

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