Encyclopedia of Experiments: Biology
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- शुरू करने के लिए, एक फल फ्लाई पिल्ला पृष्ठीय, या पीछे, साइड अप को सुरक्षित करें। जानवर के सिर को बेनकाब करने के लिए पिल्ला के ओपरक्यूम या पूर्वकाल के छोर को हटा दें। केसिंग को काटने और छीलने के बाद पिल्ला को खोलना जारी रखें। एक बार मुक्त होने के बाद, विच्छेदनित पिल्ला को पीबीएस से ढक कर रखें ताकि वेकीफिकेशन से बचा जा सके। छाती के माध्यम से एक साफ, क्रॉस-सेक्शनल कट बनाएं और शव के पोस्टर भाग को हटा दें।
आंखों के मस्तिष्क परिसर को बेनकाब करने के लिए, जिसमें ऑप्टिक लोब्स से जुड़े दो रेटिना शामिल हैं, छाती के कट-खुले किनारे से एपिथेलियम को फाड़ना शुरू करें और सिर कैप्सूल को धीरे-धीरे खोलते रहें। फिर, ध्यान से सिर कैप्सूल के अवशेषों से दूर आंख-मस्तिष्क परिसर का मार्गदर्शन करें।
उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम विभिन्न डाउनस्ट्रीम विश्लेषणों के लिए ऊतक को अलग करने के लिए उपयोग किए जाने वाले प्यूपल आंख-मस्तिष्क विच्छेदन का प्रदर्शन देखेंगे।
- ड्रोसोफिला पिल्ले को काले विच्छेदन पकवान पर रखने के बाद, प्यूप से दूर विच्छेदन पकवान पर डबल-तरफा टेप का एक ताजा टुकड़ा रखें और पिल्ला पृष्ठीय पक्ष को ध्यान से टेप पर रखने के लिए संदंश की एक जोड़ी का उपयोग करें।
प्रत्येक प्यूपा के ऑप्लसकुलम को हटाने के लिए डिश को स्टीरियो माइक्रोस्कोप के नीचे रखें और संदंश का उपयोग करें। प्रत्येक प्यूपल केस को स्लाइस करने के लिए माइक्रोडिसेक्शन कैंची का उपयोग करें, जिससे यह सिर, छाती और पूर्वकाल पेट खंड को प्रकट करने के लिए खुला हो और पुपल मामले के किनारों को दो तरफा टेप तक सुरक्षित कर सके।
प्रत्येक पिल्ला के पेट को तेज संदंश से छेदें और उसके प्यूपल केस से पिल्ला को हटा दें। प्यूपा को विच्छेदन डिश पर टेप से दूर रखें और प्यूपा को बर्फ से ठंडे पीबीएस के 400 माइक्रोलीटर के साथ ढक दें। पेट से हर एक को समझने के लिए संदंश का प्रयोग करें, और छाती के माध्यम से एक साफ क्रॉस-सेक्शनल चीरा बनाने के लिए माइक्रोडिसेक्शन कैंची का उपयोग करें, पिल्ला को आधे में काटें।
ठीक संदंश के दो जोड़े का उपयोग करना, प्रत्येक छाती एपिथेलियम के कटे हुए किनारों को समझें और धीरे-धीरे छाती और सिर कैप्सूल को खोलदें, आसपास के वसा ऊतकों में आंख-मस्तिष्क परिसर को उजागर करें। फिर, ऊतक को समझे बिना, प्रत्येक पारदर्शी, ऑफ-व्हाइट, डम्बल के आकार के आंख-मस्तिष्क परिसर को सिर कैप्सूल के अवशेषों से दूर मार्गदर्शन करने के लिए बल का उपयोग करें।
