Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- Per iniziare, fissare una pupa dorsale di mosca della frutta, o posteriore, lateralmente verso l'alto. Rimuovere l'opercolo o l'estremità anteriore della pupa per esporre la testa dell'animale. Continuare ad aprire la pupa tagliando e staccando l'involucro. Una volta liberato, coprire la pupa sezionata con PBS per evitare l'essiccazione. Effettuare un taglio pulito e trasversale attraverso il torace e rimuovere la parte posteriore della carcassa.
Per esporre il complesso occhio-cervello, che include le due retine attaccate ai lobi ottici, iniziare a strappare l'epitelio dal bordo aperto del torace e continuare ad aprire gradualmente la capsula della testa. Quindi, guidare attentamente il complesso occhio-cervello lontano dai resti della capsula della testa.
Nel protocollo di esempio, vedremo una dimostrazione di una dissezione occhio-cervello pupale utilizzata per isolare i tessuti per varie analisi a valle.
- Dopo aver posizionato le pupe di Drosophila su un piatto di sezionazione nero, posare un nuovo pezzo di nastro a doppia mano sul piatto di sezionamento lontano dalle pupe e utilizzare un paio di forcep per posizionare con cura il lato dorsale delle pupe sul nastro.
Posizionare il piatto al microscopio stereo e utilizzare le flessori per rimuovere l'opercolo di ogni pupa. Utilizzare le forbici di microdisezione per tagliare ogni custodia pupale, consentendone l'apertura per rivelare la testa, il torace e il segmento addominale anteriore e fissare i bordi della custodia pupale al nastro biale.
Perforare l'addome di ogni pupa con forcette affilate e rimuovere la pupa dal suo caso pupale. Posizionare la pupa sul piatto di dissezione lontano dal nastro e coprire la pupa con 400 microlitri di PBS ghiacciato. Utilizzare le forcette per afferrare ognuna dall'addome e utilizzare le forbici della microdisezione per fare un'incisione trasversale pulita attraverso il torace, tagliando le pupe a metà.
Utilizzando due paia di forcep fini, afferrare i bordi tagliati di ogni epitelio toracico e strappare gradualmente il torace e la capsula della testa, esponendo il complesso occhio-cervello nel tessuto adiposo circostante. Quindi, senza afferrare il tessuto, utilizzare le forcelle per guidare ogni complesso oculare traslucido, bianco troppo bianco e a forma di manubrio lontano dai resti della capsula della testa.
