Encyclopedia of Experiments: Biology
È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo Contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Til at begynde med skal du fastgøre en frugtflue-puppe-dorsal eller ryg, side op. Fjern operculumet eller den forreste ende af puppen for at eksponere dyrets hoved. Fortsæt med at åbne puppen ved at skære og skrælle huset væk, når det er befriet, dæk den dissekerede puppe med PBS for at undgå udtørring.
For at eksponere øjen-hjerne-komplekset, som omfatter de to nethinder, der er fastgjort til de optiske lobes, skal du begynde at rive epitelet fra brystkassens skære åbne kant og fortsætte med at åbne hovedkapslen gradvist. Derefter skal du omhyggeligt guide øjenhjernekomplekset væk fra resterne af hovedkapslen.
I eksempelprotokollen vil vi se en demonstration af en pupal eye-brain dissektion, der bruges til at isolere væv til forskellige downstream-analyser.
- Efter at have placeret Drosophila pupper på en sort dissekere parabol, lægge et nyt stykke dobbeltsidet tape på dissekere parabol væk fra pupper og bruge et par pincet til omhyggeligt at placere pupper dorsal side op på båndet.
Placer skålen under et stereomikroskop og brug pincet til at fjerne operculum af hver puppe. Brug microdissection saks til at skære hver pupal sag, så det kan flapped åben for at afsløre hovedet, brystkasse, og forreste abdominal segment, og sikre kanterne af pupal sagen til dobbeltsidet tape.
Pierce maven af hver puppe med skarpe pincet og fjerne puppen fra sin pupal sag. Placer puppen på dissektion parabol væk fra båndet, og dække pupper med 400 mikroliter af iskold PBS. Brug pincet til at forstå hver enkelt af maven, og bruge microdissection saks til at gøre en ren tværsnit snit gennem brystkassen, skære pupper i halve.
Ved hjælp af to par fine pincet, forstå de afskårne kanter af hver brystkasse epitel og gradvist rive åbne brystkassen og hoved kapsel, udsætter eye-hjerne kompleks i det omgivende fedtvæv. Derefter, uden at gribe vævet, bruge pincet til at guide hver gennemskinnelig, off-white, håndvægt-formet øje-hjerne kompleks væk fra resterne af hovedkapslen.
