Name: La somministrazione orale di Rotenone utilizzando un Gavage e Image Analysis di alfa-sinucleina inclusioni nel sistema nervoso enterico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-26T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Scopri come somministrare rotenone per via orale con sondaggio gastrico e analizzare l'accumulo di alfa-sinucleina nel sistema nervoso enterico di topi. Questo metodo consente di studiare gli effetti neurotossici dei pesticidi.

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Pedro Barrie de la Maza Fondazione ha sostenuto questo lavoro.

1) Amministrazione intragastrico di Rotenone <ol><li> Pesare l'animale. </li><li> Calcolare il volume totale di rotenone / veicolo soluzione necessaria. In questo caso 0,01 ml per grammo di peso animale. </li><li> Caricare una siringa da 1 ml con il volume già calcolato di soluzione rotenone (0,625 mg / mL rotenone, 4% carbossimetilcellulosa cloroformio e 1,25%) o soluzione di veicoli (4% carbossimetilcellulosa cloroformio e 1,25%). In questo caso corrisponde ad un 5 mg / kg dose di rotenone. </li><li> Raccogliete il mouse e, tenendo la coda di topo con una mano, allungare la pelle del collo tirandolo con le prime due dita dell'altra mano. </li><li> Una volta che la testa è fissato tra le due dita, appoggiate il palmo della mano e girarlo a testa in giù. Fissare la coda con il quarto e quinto dito. </li><li> Mantenere la testa verso la parte posteriore, premere il palato per aprire la bocca del mouse. Introdurre delicatamente la sonda gastrica in bocca. E 'importante utilizzare un ago sonda gastrica e non un ago normale. Lentamente, spostare la sonda gastrica nella direzione dello stomaco abbastanza lontano. Ciò eviterà materiale trovato nei polmoni. </li><li> Somministrare la soluzione rotenone o di un veicolo premendo delicatamente l'embolo. Una volta completato, lentamente estrarre la sonda gastrica. </li><li> Posizionare il nuovo animale in un'altra gabbia fino a quando tutti gli animali da una gabbia è fatto. </li></ol> 2) L'immunocolorazione Procedure <ol><li> Dopo il trattamento, i topi vengono anestetizzati utilizzando Ketamin 100 mg / kg und Xylazin 10 mg / kg ip e intracardially perfusi con paraformaldeide 4% in PBS. </li><li> Il fegato viene estratto da dissezione, e collocato nel 15% saccarosio durante la notte. Il giorno successivo, il tessuto viene trasferito al 30% di saccarosio e incubate di nuovo una notte a 4 ° C. </li><li> Il tessuto viene poi messo in tessuto-tek e conservati in un congelatore ° -80 C fino all'utilizzo. </li><li> Utilizzando un criostato, 20 micron intestino sezioni vengono trasferite alle diapositive Superfrost. </li><li> Blocco e immunostaining procedure utilizzando anti-βIII-tubulina e anti-alfa-sinucleina anticorpi vengono poi eseguite come descritto in precedenza 9. </li></ol> 3) Analisi dell'immagine alfa-sinucleina Inclusione Si raccomanda che una persona esterna a conoscenza di origine immagini 'esegue l'analisi. Pertanto, i dati devono essere codificati. Analisi delle immagini è stata effettuata utilizzando il software FIGI. <ol><li> Aprire il file immagine confocale. Poi, dividere i canali in modo che sia possibile lavorare su ogni canale in modo indipendente. </li><li> Chiudere quei canali che non stanno per essere utilizzare e selezionare Analisi&gt; Imposta Scala e impostare la dimensione del pixel a 1. Impostare la distanza nota a 0,13 (questo dipenderà l'obiettivo e la risoluzione utilizzata) e cliccare su globale. La dimensione dell'immagine sarà ora mostrato in micron. </li><li> Seleziona alfa-sinucleina e selezionate ganglio, assicurarsi che la selezione racchiude il ganglio in tutte le sezioni. </li><li> Image Press&gt; Duplica per duplicare l'immagine. Con il ganglio selezionato, solo un'immagine delle dimensioni del ganglio verranno duplicati. </li><li> Premere Modifica&gt; Fuori Cancella. La parte dell'immagine di fuori della regione selezionati diventeranno neri. </li><li> Duplicare l'immagine di nuovo per determinare in fasi successive come pure la procedura è andato. Le immagini che hanno un segnale alto in rapporto al rumore di fondo non deve essere utilizzato per l'analisi delle immagini. </li><li> Seleziona Immagine&gt; Regolazioni&gt; Soglia e quindi selezionare MaxEntropy. Quindi spostare sulle fette nella immagine ritagliata e l'originale per garantire che la procedura è andata bene. La soglia entropica seleziona un livello di segnale di intensità in base alla istogramma dell'immagine e solo i pixel con intensità superiore a questa soglia sarà visualizzato in un bianco su un'immagine nera. </li><li> Selezionare Elabora, quindi fare clic su Smooth. Questo passo pixeled trasforma i bordi delle immagini in bordi lisci. </li><li> Selezionare Elabora, poi clicca sul binario, e scegliete Crea binari. L'immagine verrà visualizzata come immagine nero su bianco. </li><li> Duplica immagine per eseguire il passaggio successivo sull'immagine duplicato. </li><li> Fare clic su Analizza&gt; Analizzare particelle. Quindi selezionare Mostra: Contorni e cliccare su Riassumere. Il resto delle impostazioni dovrebbe essere lasciato in default. Questa funzione riconosce il numero totale di pixel con un segnale e quelli che sono raggruppati insieme. La superficie totale di pixel con il segnale più il numero di gruppi di pixel e la dimensione media sono segnalati. </li><li> Confrontare e selezionare la fetta più grande che si adatta bene. La fetta sarà segnato. </li><li> Copiare la tabella di dati con il totale alfa-sinucleina superficie, il numero di inclusioni e la dimensione media delle particelle. Incollare i dati in un foglio excel o annotato altrove. </li><li> Torna a FIJI e trovare la fetta precedentemente selezionato nella β-tubulina di canale, e selezionarlo. </li><li> Seleziona area ganglio e cliccare su Analizza quindi selezionare Misura. Un'altra tabella apparirà mostrando lasuperficie totale del ganglio. </li><li> Estrarre i dati dalla tabella al foglio di eccellere nei pressi della alfa-sinucleina misura o copiare il basso altrove. </li><li> Utilizzando Excel, dividere i vari parametri ottenuti nelle alfa-sinucleina misura dalla superficie ganglio di ottenere totale alfa-sinucleina numero superficie e inclusione normalizzato in base alle dimensioni ganglio. </li></ol> 4) Rappresentante Risultati Quando il protocollo amministrazione sonda gastrica viene eseguita correttamente i disagi per l'animale sono minimi. Trattamento con questa concentrazione di rotenone permette un effetto locale di rotenone sulle ENS senza rotenone livelli nel sangue e nessuna inibizione del complesso muscolo o cervello mitocondriale ho anche dopo 1,5 mesi di trattamento (vedi Figura 1). Se l'analisi delle immagini viene eseguita correttamente una rigorosa analisi di alfa-sinucleina modello dovrebbe essere possibile. Fornisce dati affidabili sulla quantità totale di alfa-sinucleina (superficie totale), alfa-sinucleina modello nella cella (numero di inclusioni) e la presenza di alfa-sinucleina inclusioni (dimensione inclusione) (Figura 2). <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Disfunzione motoria in topi trattati con rotenone senza riconoscimento del rotenone nel sangue o nel sistema nervoso centrale. A, di serie (50 ng / mL) e cromatogramma da campioni di cervello di 20, 10 e 5 mg / kg topi trattati. B e C, la quantificazione dei livelli di rotenone nel sangue (B) e sistema nervoso centrale (C). B, i livelli di sangue 1 , 2 e 3 ore dopo il trattamento. I topi sono stati divisi in tre gruppi (n = 3) e trattati con 2,5, 5, 10 e 20 mg / kg rotenone (n = 3), 300 ml di sangue è stato estratto ore 1, 2 e 3 dopo la somministrazione rotenone e raccolto insieme per analisi HPLC. C, i topi sono stati trattati per una settimana una volta al giorno con 5 (n = 3), 10 (n = 3) e 20 (n = 1) mg / kg rotenone, cervello e tronco encefalico sono stati estratti 1 e 2 ore dopo ultima somministrazione e preparati per l'analisi HPLC. D, Complesso I mitocondriale attività in campioni di muscolo e nel cervello dei topi trattati con 1,5 mesi. <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Rotenone amministrato localmente induce alfa-sinucleina fosforilazione, l'accumulo e l'aggregazione con gliosi nei gangli ENS. (Bar scala 20 micron). A, B, C, anti βIII-tubulina, l'alfa-sinucleina e colorazione DAPI nel duodeno (B) e ileo ( A, C) sezioni. Freccia in B, 1,5 mesi di trattamento ha indotto un aumento di alfa-sinucleina modello puntata all'interno dei gangli del sistema nervoso enterico rispetto ai 3 controlli mesi (A). Freccia in C, 3 mesi di trattamento ha indotto la formazione di grandi alfa-sinucleina inclusioni (ø&gt; 6 micron). D, colorazione di immunofluorescenza utilizzando anticorpi anti-alfa-sinucleina, Thioflavine S e DAPI. Freccia in D, solo 3 mesi i topi trattati hanno mostrato l'aggregazione di più questi alfa-sinucleina accumuli. E, E ', E'', immagine passi quantificazione analisi. E, esempio di immagine utilizzati nel quantificazione mostrando un ganglio ENS immunostained contro l'alfa sinucleina mostrando inclusioni diverse. E ', esempio di immagine ottenuta dopo il protocollo di analisi delle immagini. E'', sovrapposizione tra alcune delle inclusioni originale (verde) e la rappresentazione ottenuto dopo aver eseguito il protocollo (linee gialle). FG, quantificazione di questo esperimento mostrato in AC è stata fatta utilizzando la segmentazione automatica e l'entropia metodi basati soglia. Singolo asterisco, P &lt;0,05, e doppio asterisco, P &lt;0,01. F, ogni colonna rappresenta il totale di alfa-sinucleina superficie / ganglio superficie. G, ogni colonna rappresenta il numero totale di alfa-sinucleina inclusioni / superficie ganglio. Tutti i grafici mostrano media ± sem

<ol><li>Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+alpha-synuclein+immunoreactive+inclusions+in+Meissner%27s+and+Auerbach%27s+plexuses+in+cases+staged+for+Parkinson%27s+disease-related+brain+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner's and Auerbach's plexuses in cases staged for Parkinson's disease-related brain pathology.</a> Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).</li>
<li>Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+an+immunohistochemical+study+of+Lewy+body-containing+neurons+in+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system.</a> Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).</li>
<li>Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restricted+occurrence+of+Lewy+bodies+in+the+dorsal+vagal+nucleus+in+a+patient+with+late-onset+parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism.</a> J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).</li>
<li>Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+lesions+in+dorsal+horn+layer+I%2C+involvement+of+parasympathetic+and+sympathetic+pre-+and+postganglionic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons.</a> Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).</li>
<li>Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+in+the+development+of+Parkinson%27s+disease-related+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Stages in the development of Parkinson's disease-related pathology.</a> Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).</li>
<li>Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+Parkinson%27s+disease+with+exposure+to+pesticides%2C+farming%2C+well+water%2C+and+rural+living%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">The risk of Parkinson's disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living.</a> Neurology. 50, 1346-1350 (1998).</li>
<li>Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease+and+exposure+to+agricultural+work+and+pesticide+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals.</a> Neurology. 42, 1328-1335 (1992).</li>
<li>Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+antecedents+of+young-onset+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Environmental antecedents of young-onset Parkinson's disease.</a> Neurology. 43, 1150-1158 (1993).</li>
<li>Pan-Montojo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+of+Parkinson%27s+disease+pathology+is+reproduced+by+intragastric+administration+of+rotenone+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Progression of Parkinson's disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice.</a> PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).</li>
<li>Sherer, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+toxicity+in+rotenone+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease.</a> J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).</li>
<li>Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxin-induced+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Toxin-induced models of Parkinson's disease.</a> NeuroRx. 2, 484-494 (2005).</li>
<li>Inden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurodegeneration+of+mouse+nigrostriatal+dopaminergic+system+induced+by+repeated+oral+administration+of+rotenone+is+prevented+by+4-phenylbutyrate%2C+a+chemical+chaperone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone.</a> J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).</li>
</ol>

Francisco Pan-Montojo ha una domanda di brevetto in sospeso per questo modello animale (numero Application PCT / EP 2009/005688).

Amministrazione intragastrica è stato precedentemente effettuato 12. Tuttavia, secondo il manoscritto Inden, il rotenone è stato somministrato sciolto in carbossimetilcellulosa sale dello 0,5% di sodio (CMSS) da solo. Rotenone è una sostanza ad alta liphophylic. Pertanto, rotenone non può essere sciolto in 0,5% CMSS da solo e si precipitano se fatto così. L&#39;uso del cloroformio crea una sospensione rotenone distribuito uniformemente evitando precipitazioni. Inoltre, a causa della maggiore concentrazione de...

<table><tbody><tr><td>Rotenone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td>Germania</td></tr><tr><td>Cloroformio</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3313.1</td><td>Germania</td></tr><tr><td>Carbossimetilcellulosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5678</td><td>Germania</td></tr><tr><td>Gavage 1,2 mm x 60 mm</td><td>Unimed</td><td></td><td>Svizzera</td></tr><tr><td>LSM 510</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FIJI</td><td>http://pacific.mpi-cbg.de</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

la somministrazione orale di rotenone utilizzando un gavage e image analysis di alfa-sinucleina inclusioni nel sistema nervoso enterico

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

Nella malattia di Parkinson (PD) pazienti, la patologia associata segue un modello caratteristico che coinvolge tra l&#39;altro il sistema nervoso enterico (ENS) 1,2, il bulbo olfattivo (OB), il nucleo motore dorsale del vago (DMV) 3, l&#39;intermedio- nucleo dei 4 midollo spinale e la substantia nigra, fornendo la base per la messa in scena neuropatologici della malattia 4,5. L&#39;ENS e l&#39;OB sono le strutture più esposte nervoso e le prime ad essere colpite. È interessante notare che PD è stata correlata ai pesticidi 6-8. Qui vi mostriamo nel dettaglio due metodi utilizzati nel nostro studio precedente 9. Per analizzare gli effetti del rotenone agire localmente sulle ENS, abbiamo somministrato rotenone utilizzando una sonda gastrica per un anno vecchio C57/BL6 topi. Rotenone è un pesticida largamente usato che inibisce fortemente complesso mitocondriale I 10. E &#39;altamente lipofile e scarsamente assorbito nel tratto gastrointestinale 11. I nostri risultati hanno mostrato che la somministrazione di 5 mg / kg di rotenone non ha inibito l&#39;attività Complesso I mitocondriale nel muscolo o del cervello. Così, suggerendo che usando il nostro metodo di rotenone amministrazione non ha attraversato il sistema epatoportale e agiva esclusivamente sulla ENS. Qui vi mostriamo un metodo di amministrare con una sonda gastrica pesticidi e il protocollo di analisi delle immagini utilizzate per analizzare gli effetti del pesticida in alfa-sinucleina accumulo nel ENS. La prima parte illustra un metodo che consente la somministrazione intragastrica di pesticidi (rotenone) ad una concentrazione desiderata precisa. Il secondo metodo mostra una semi-automatica protocollo di analisi delle immagini per analizzare alfa-sinucleina accumulo nel ENS utilizzando un software di analisi dell&#39;immagine.

Morbo di Parkinson è stata correlata all&#39;esposizione ai pesticidi. Qui vi mostriamo un metodo per fornire pesticidi utilizzando un tubo gastrico alla concentrazione desiderata e un metodo per analizzare il loro effetto in alfa-sinucleina accumulo nel sistema nervoso enterico.

La somministrazione orale di Rotenone utilizzando un Gavage e Image Analysis di alfa-sinucleina inclusioni nel sistema nervoso enterico

Nei pazienti affetti da malattia di Parkinson (PD), la patologia associata segue un pattern caratteristico che coinvolge, tra le altre cose, il sistema nervoso enterico (ENS) 1,2, ...

I sintomi della malattia di Parkinson, inclusi i disturbi motori e della parola, derivano dalla ridotta attività delle cellule cerebrali che secernono dopamina. Il sistema nervoso enterico e il bulbo olfattivo sono le strutture nervose più esposte e le prime ad essere colpite. Alla malattia di Parkinson è stata associata l'esposizione a pesticidi.Per analizzare gli effetti dei pesticidi sul sistema nervoso enterico, il pesticida roone viene somministrato ai topi mediante gavaggio orale. Successivamente, i topi vengono perfusi per via intracardiaca con paraformaldeide al 4% per fissare il cervello e il sistema nervoso enterico. I tessuti vengono quindi estratti, preparati e sottoposti a immunomarcatura per le proteine associate al PD.Le immagini di beta-tubulina tre e alfa-sinucleina ottenute mediante microscopia confocale dimostrano l'accumulo di alfa-sinucleina all'interno dei neuroni del sistema nervoso enterico negli animali esposti a pesticidi. Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come l'amministrazione sistemica di rotenone, è che con questa tecnica si garantisce che l'effetto del rotenone sia confinato al sistema nervoso enterico. Questo met

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Questo video dimostra l'iniezione di fibrille di alfa-sinucleina in un topo per indurre la neuroinfiammazione. Le fibrille vengono iniettate per via intraperitoneale in un topo transgenico che esprime proteine alfa-sinucleina mutate. Una volta raggiunto il sistema nervoso centrale, le fibrille entrano nei neuroni e inducono l'aggregazione delle proteine mutate. Gli aggregati si diffondono ai neuroni vicini, alle microglia e agli astrociti. Il riconoscimento degli aggregati innesca la microglia...

Induzione della neuroinfiammazione nei topi tramite iniezione di fibrille di alfa-sinucleina

Viene descritta un'ELISA che offre un approccio quantitativo innovativo. Rileva specificamente l'α-sinucleina associata alla malattia (αSD) in un modello di topo transgenico (M83) di sinucleinopatia utilizzando diversi anticorpi contro la forma αS fosforilata nella Ser129 o la parte C-terminale della proteina.

Il rilevamento della malattia associata α-sinucleina da avanzato ELISA nel cervello di topi transgenici A53T umano Mutato α-sinucleina

Questo manoscritto descrive come la consegna genica locale mediata da vettori virali fornisca un modo attraente per esprimere i transgeni nel sistema nervoso centrale.  Il protocollo delinea tutti i passaggi cruciali per eseguire un'iniezione di vettore virale nella substantia nigra del ratto per sviluppare un modello animale basato su vettore virale per la malattia di Parkinson.

Sviluppo di un Rat modello Alfa-sinucleina per la malattia di Parkinson mediante iniezione stereotassica di un ricombinante vettore virale adeno-associato

Iniezione periferica di fibrille alfasinucleina nel peritoneo o linguetta di Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) topi che esprimono umana alfasinucleina con la mutazione A53T familiare e luciferasi di lucciola, può indurre neuropatologia, compreso neuroinflammation , nel loro sistema nervoso centrale.

Bioluminescenza Imaging di Neuroinflammation in topi transgenici Dopo periferica inoculazione di alfa-sinucleina fibrille

Qui presentiamo un metodo automatizzato per la determinazione semi-quantitativa del numero di neuroni dopaminergici nella substantia nigra pars compacta del ratto.

Determinazione semi-quantitativa della densità neuronale dopaminergica nella Substantia Nigra dei modelli di roditori utilizzando l'analisi automatizzata delle immagini

In questo articolo, mostriamo come utilizzare un sistema di punteggio a sette punti per quantificare costantemente i cambiamenti nella morfologia del dendrite neurone dopaminergico in C. elegans. Questo sistema è destinato alle analisi di saggi di neurodegenerazione dopaminergica che utilizzano modelli genetici, chimici e basati sull'età di disturbi neurodegenerativi.

Quantificazione dei livelli di alterazione morfologica e degenerazione dei neuroni dopaminergici in Caenorhabditis elegans

Questo lavoro analizza la dose vettoriale e il tempo di esposizione necessari per indurre neuroinfiammazione, neurodegenerazione e compromissione motoria in questo modello preclinico di malattia di Parkinson. Questi vettori che codificano la α-sinucleina umana vengono consegnati nella substantia nigra per ricapitolare la patologia sinucleina associata al morbo di Parkinson.

Analisi del modello murino della malattia di Parkinson indotto da vettori virali adeno-associati che codificano la α-sinucleina umana

Viene presentato un comodo metodo di perfusione alimentato a gravità per l'analisi istologica del sistema nervoso centrale del topo. Il rilevamento immunofluorescente della α-sinucleina fosforilata è dimostrato in un modello murino di malattia di Parkinson. Questo lavoro descrive anche in modo completo le fasi di perfusione transcardica, dissezione, congelamento / incorporamento dei tessuti e sezionamento congelato.

Un metodo di perfusione transcardica alimentato per gravità per l'analisi istologica del sistema nervoso centrale del topo

Il presente protocollo descrive un metodo per la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina. Questo metodo fornisce informazioni sulla propagazione della α-sinucleina dalla mucosa olfattiva al bulbo olfattivo nella malattia di Parkinson.

Tecnica per la somministrazione intranasale di aggregati di α-sinucleina

Questo articolo descrive in dettaglio un protocollo per elettroporare in utero della corteccia cerebrale e l'ippocampo a E14.5 nei topi. Abbiamo anche dimostrato che questo è un metodo valido per studiare dendriti e spine in queste due regioni cerebrali.

Visualizzazione e manipolazione genetica di dendriti e spine nella corteccia cerebrale e nell&#39;ippocampo mouse utilizzando<em&gt; In utero</em&gt; Elettroporazione

Scopri come somministrare rotenone per via orale con sondaggio gastrico e analizzare l'accumulo di alfa-sinucleina nel sistema nervoso enterico di topi. Questo metodo consente di studiare gli effetti neurotossici dei pesticidi.

La somministrazione orale di Rotenone utilizzando un Gavage e Image Analysis di alfa-sinucleina inclusioni nel sistema nervoso enterico (Video) | JoVE Journal

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