Microscopia a riflessione interferenziale per la visualizzazione senza marcatura della dinamica dei microtubuli
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 6:36 min. • July 8th, 2025
La microscopia a riflessione per interferenza consente di visualizzare microtubuli che crescono e si restringono dinamicamente.
Fissare le strisce di paraffina su un vetrino coprioggetti e posizionare sopra un vetrino coprioggetti leggermente più piccolo. Scaldare per sciogliere la paraffina, formando un canale sigillato. Pipettare una soluzione contenente anticorpi attraverso il canale. Gli anticorpi si attaccano alla superficie del vetrino coprioggetti. Aggiungere una soluzione bloccante, bloccando le regioni non legate agli anticorpi e impedendo il legame non specifico della proteina.
Posizionare il vetrino coprioggetti sul tavolino del microscopio. Impostare il riscaldatore del campione su una temperatura che faciliti la crescita dei microtubuli.
Pipetta di semi di microtubuli stabilizzati con un trifosfato di guanosina non idrolizzabile, GTP, analogo. I semi si legano al vetrino coprioggetti rivestito di anticorpo. Aggiungere un tampone contenente tubulina non marcata, GTP e agenti riducenti.
A temperatura e condizioni tampone ottimali, i semi agiscono come siti di nucleazione, consentendo il legame della tubulina non marcata e la crescita dei microtubuli.
Inizia l'imaging. La
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