Isolamento di più tipi di cellule dal cervello di un topo mediante omogeneizzazione meccanica
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:27 min. • July 8th, 2025
Inizia posizionando i componenti del macina tessuti sul ghiaccio. Questo dispositivo include un mortaio e due pestelli di diverso diametro.
Versare un tampone di sale freddo nel mortaio e poi aggiungere il tessuto cerebrale del topo.
Il tampone mantiene l'equilibrio osmotico, preservando la struttura e la funzione cellulare.
Macina il tessuto con più colpi delicati usando il pestello di diametro più piccolo, che taglia meccanicamente il tessuto in pezzi più piccoli.
Quindi, accarezzare con il pestello di diametro maggiore, facilitando l'ulteriore scomposizione del tessuto nelle cellule che lo compongono.
Trasferire il composto in una provetta e centrifugare.
Rimuovere il surnatante.
Aggiungere il tampone salino freddo e il vortice per rompere i grumi cellulari e la mielina.
Quindi, aggiungere un mezzo di gradiente di densità e centrifugare.
A causa delle differenze di forma e massa, le cellule si depositeranno nello strato inferiore, mentre i detriti e la mielina si accumuleranno nello strato superiore.
Scartare il surnatante.
Aggiungere una soluzione adatta per ottenere una sospensione a più celle per un ulteriore utilizzo.
Per l'omogeneizzazione dei tessuti, aggiungere 3 millilit
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