Isolamento di cellule mononucleate dal cervello di topo: una tecnica di centrifugazione a gradiente di densità per isolare le cellule mononucleate residenti nel cervello
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0 visualizzazioni • 4:11 min. • April 30th, 2023
Le cellule mononucleate nel cervello, che comprendono linfociti e monociti, svolgono un ruolo cruciale nel mantenimento della funzione cerebrale e dell'omeostasi.
Per isolare queste cellule mononucleate, in primo luogo, prendere un cervello di topo appena raccolto e perfuso con soluzione fisiologica.
La perfusione consente la rimozione del sangue e dei suoi componenti dai vasi sanguigni, consentendo l'isolamento delle cellule immunitarie residenti nel cervello nelle fasi successive.
Ora, sciacquare il cervello con un terreno adatto per rimuovere i globuli rossi aderenti. Seguire il risciacquo con la macinazione per acquisire piccoli pezzi di tessuto.
Omogeneizzare i pezzi di tessuto per ottenere una sospensione di singole cellule e frammenti cellulari.
A questa sospensione, aggiungere quindi il mezzo refrigerato e il mezzo di gradiente di densità adatto in volumi appropriati per formare un mezzo di gradiente a bassa densità.
Quindi, aggiungere un volume specifico di un mezzo gradiente ad alta densità; il mezzo gradiente ad alta densità forma uno strato separato nella parte inferiore, creando un gradiente di densità discontinuo.
Centrifugare la sospensione ad alta velocità e in cond
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