Microscopia a due fotoni per lo studio dell'attrazione del processo microgliale verso un composto in una fetta di cervello di topo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:28 min. • April 28th, 2025
Posizionare una fetta di cervello di topo in una camera di perfusione contenente aCSF sotto un microscopio a due fotoni.
Il topo è geneticamente modificato per esprimere la GFP nella microglia, consentendo il tracciamento del movimento microgliale.
Fissare la fetta con un supporto.
Utilizzando l'illuminazione a campo chiaro, individuare la regione di interesse.
Passare all'illuminazione a fluorescenza per visualizzare la microglia.
Riempire una micropipetta con il composto in esame, montarla su un supporto per siringa e abbassarla fino a toccare la fetta.
Attiva la modalità di imaging a due fotoni, concentrando la luce del vicino infrarosso a bassa energia nel tessuto.
Nel punto focale del laser, due fotoni combinano la loro energia per eccitare la GFP, emettendo fluorescenza.
Acquisisci immagini su più piani Z per concentrarti sui processi microgliali.
Registrare l'attività di base, quindi iniettare il composto e continuare la registrazione.
Il composto si lega ai recettori microgliali, innescando vie di segnalazione che guidano l'estensione del processo microgliale verso la fonte del composto.
Monitorare l'aumento della fluorescenza vicino al sito di iniezione nel tempo per tracciare il mo
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