Imaging simultaneo della dinamica microgliale e dell'attività neuronale in un topo sveglio
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:13 min. • May 29th, 2025
Cominciamo con un topo transgenico fissato in una cornice stereotassica, con una finestra cranica impiantata sulla sua corteccia visiva.
Il topo esprime EGFP nella microglia e R-CaMP, un indicatore di calcio fluorescente rosso, nei neuroni della corteccia visiva.
Posiziona il mouse sotto un microscopio a due fotoni e regola la lente dell'obiettivo per mettere a fuoco la superficie del cervello.
Spostare il mouse con la cornice stereotassica dalla lente dell'obiettivo e collegare un dispositivo di ombreggiatura.
Riempire il dispositivo di ombreggiatura con acqua e riposizionare il mouse sotto il microscopio.
Coprire la lente con una pellicola nera.
Il dispositivo di ombreggiatura e la pellicola bloccano le interferenze della luce esterna, garantendo immagini accurate.
Posizionare un monitor LCD davanti all'occhio del mouse per fornire una stimolazione visiva.
Impostare i parametri di imaging e iniziare l'imaging.
La stimolazione visiva innesca l'eccitazione neuronale, portando all'afflusso di calcio e ad un aumento della fluorescenza R-CaMP.
Nel frattempo, le microglia ritraggono i loro processi mentre interagiscono con i neuroni attivati, come osservato attraverso l'imaging dal vivo.
Per
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici