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DOI: 10.3791/60113-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for evaluating the balance between glutamate release and clearance at single corticostriatal glutamatergic synapses using acute slices from adult mice. By employing the fluorescent sensor iGlu u for glutamate detection, researchers can identify local mismatches in transmitter dynamics, aiding in the investigation of dysfunctional synapses in disease contexts.
Presentiamo un protocollo per valutare l'equilibrio tra il rilascio del glutammato e l'autorizzazione alle singole sinapsi glutamatergiche corticosterogiche in fette acute di topi adulti. Questo protocollo utilizza il sensore fluorescente iGluu per il rilevamento del glutammato, una telecamera sCMOS per l'acquisizione del segnale e un dispositivo per l'illuminazione laser focale.
L'imaging ad alta risoluzione di singole sinapsi che esprimono un sensore di glutammato veloce consente di rilevare la mancata corrispondenza locale tra il rilascio del trasmettitore e l'assorbimento. Nel caso della malattia, questo metodo può essere utilizzato per identificare sinapsi disfunzionali. Per la correzione dell'autofluorescenza, in primo luogo, posizionare una fetta cerebrale dal mouse di interesse nella camera di registrazione di un microscopio con un fotone.
Immergere la fetta in liquido cerebrospinale ossigenato e artificiale e utilizzare l'obiettivo 20x di immersione in acqua per localizzare lo striato dorsale. Fissare le fette con una griglia di nylon su un'arpa di platino per ridurre al minimo il movimento del tessuto e passare all'obiettivo 63x di immersione in acqua. Utilizzando un filtro passa alto a 510 nanometri, acquisire un'immagine delle strutture positive del sensore autofluorescente e glutammato insieme.
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