JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:53 min. • May 29th, 2025
Prendi un vetrino coprioggetti con una coltura di neuroni ventrali del mesencefalo derivati da embrioni di topo.
Le cellule vengono infettate con un vettore virale per esprimere un indicatore di calcio.
Trasferire il vetrino coprioggetti nella camera di registrazione di un microscopio confocale perfuso con un tampone di registrazione.
Utilizzando la luce visibile, identifica una regione contenente più neuroni, quindi passa all'imaging a fluorescenza.
A bassi livelli intracellulari di calcio, l'indicatore rimane non legato, mostrando una bassa intensità di fluorescenza.
Le proprietà intrinseche dei neuroni generano potenziali d'azione spontanei, innescando l'apertura dei canali del calcio voltaggio-dipendenti e consentendo l'afflusso di calcio.
L'eccesso di calcio si lega all'indicatore, inducendo un cambiamento conformazionale che aumenta l'intensità della fluorescenza.
Registra l'intensità della fluorescenza nel tempo per monitorare l'attività spontanea del calcio.
Introdurre un neurotrasmettitore ad alta concentrazione, che si lega ai recettori sui neuroni, generando potenziali d'azione continui.
L'attivazione prolungata del canale del calcio voltaggio-dipendente prolunga l'afflusso di c
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