$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Fissare un cucciolo di topo geneticamente modificato anestetizzato in un telaio stereotassico utilizzando barre auricolari in direzione opposta per evitare lesioni.
L'ippocampo del cucciolo ha interneuroni inibitori ridotti, portando all'ipereccitazione dei neuroni eccitatori.
Mantieni una posizione a testa piatta e copri il cucciolo con ghiaccio per prolungare l'anestesia.
Disinfettare il cranio e identificare la sutura lambda come punto di riferimento.
Posizionare l'ago per iniezione sulle coordinate ippocampali bersaglio.
Usando un ago piegato, crea un foro di microingresso riducendo al minimo i danni al cranio.
Abbassa l'ago alla profondità target e inietta le cellule precursori degli interneuroni di origine umana a una velocità controllata, riducendo al minimo i danni ai tessuti.
Ritrarre lentamente l'ago per prevenire il reflusso cellulare.
Rimuovi il cucciolo dal telaio, scaldalo fino a quando il movimento riprende, quindi rimettilo nella lettiera nella gabbia.
Le cellule precursori iniettate si disperdono nell'ippocampo, maturano e si integrano nella rete neuronale. Nel tempo, migliorano la trasmissione inibitoria, che ripristina l'equilibrio eccitatorio-inibitorio.
Posiziona il cucciolo posizionandolo sul telaio stereotassico e utilizzando le barre auricolari nella direzione opposta. Successivamente, pulire la superficie della pelle utilizzando un fazzoletto molle imbevuto di etanolo. Identificare lambda e impostare le coordinate su 0 sulla console del display digitale dello strumento stereotassico.
Dopo aver spostato la siringa di Hamilton alle coordinate desiderate, utilizzare un ago da insulina piegato a 90 gradi per penetrare nel cranio, creando un piccolo foro. Quindi abbassa la siringa di Hamilton fino a quando l'ago attraversa il cranio e 0 la coordinata dorso-ventrale.
Abbassare l'ago fino a raggiungere le coordinate dorso-ventrali desiderate. Ritrarre lentamente l'ago una volta che le cellule staminali sono state iniettate. Termina la procedura riscaldando il cucciolo con le mani fino a quando non inizia a muoversi prima di restituirlo alla madre.