È necessario avere un abbonamento a JoVE per visualizzare questo. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Capitoli
- 00:00Titolo
- 01:21Virus Production
- 04:11Titering of Virus
- 06:13Transduction of Human Diploid Fibroblasts
- 07:19FACS Experiments
- 08:50Proteasomal Activity in vivo
- 10:04Conclusion
En metode for å overvåke ubiquitin-proteasom aktivitet i levende celler er beskrevet. En degron-destabilisert GFP-(GFP-DGN) og en stabil GFP-dgnFS fusjonsprotein genereres og transduced inn i cellen ved hjelp av en lentiviral ekspresjonsvektor. Denne teknikken gjør det mulig å generere en stabil GFP-dgn/GFP-dgnFS uttrykke cellelinje der ubiquitin-proteasom aktivitet kan lett vurdert ved hjelp epifluorescence eller flowcytometri.
Tags
Ubiquitin-proteasome ActivityDegronGreen Fluorescent Protein (GFP)Reporter ProteinProteolysisIntracellular OrganelleAbnormal ProteinsMisfolded ProteinsDamaged ProteinsOxidized ProteinsProteasome MaintenanceCellular ProcessesStress ResponseCell Cycle RegulationCellular DifferentiationImmune System ResponseUbiquitin-proteasome System DysfunctionTumorsNeurodegenerative DiseasesCellular SenescenceOrganismal AgingPrimary CellsLentiviral Expression VectorsTransfection Efficiency
