Differenze valutando in capacità competitiva sperma in Drosophila

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di verificare le differenze nella capacità competitiva degli spermatozoi tra drosophila, maschi melanogaster con genotipi distinti. Ciò si ottiene tracciando i marcatori genetici visibili che identificano la paternità della progenie da una femmina accoppiata a due maschi diversi, genotipi nel test, le femmine sono prima autorizzate ad accoppiarsi con un maschio di riferimento e poi autorizzate ad accoppiarsi con un maschio sperimentale. La frazione della prole partorita dal maschio sperimentale viene dedotta esaminando la colorazione degli occhi della progenie.

I risultati confrontano indirettamente la capacità competitiva degli spermatozoi maschili sperimentali in base alle loro prestazioni relative agli spermatozoi maschili di riferimento. Questi metodi possono aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della genetica e dell'evoluzione in biologia, come la valutazione dell'impatto di un fattore genetico sulla capacità competitiva SPR che dimostra che questa procedura sarà S e studenti universitari del nostro laboratorio. Il seguente protocollo illustra l'analisi di un fattore genetico chiamato sic, che presumibilmente codifica per una proteina coinvolta nella motilità degli spermatozoi.

Inizia posizionando da 15 a 20 fiale per ogni fiala. Cospargere leggermente il terreno con alcuni pellet di lievito attivo essiccato. Per facilitare la posizione dell'ove.

Utilizzare sempre mezzi nutritivi freschi come un mezzo di lievito di farina di mais. Quindi, a ogni fiala, aggiungi da otto a 10 femmine, ma non di più, e aggiungi cinque maschi. L'identificazione del sesso può essere ottenuta mediante l'ispezione visiva di alcune differenze morfologiche.

Conservare le fiale a 25 gradi Celsius e trasferire gli adulti in nuove fiale almeno ogni tre-cinque giorni. Trasferisci gli adulti a giorni alterni per ottenere il miglior risultato. Conserva l'uovo contenente le fiale per raccogliere la progenie.

Il numero di fiale necessarie dipenderà dal numero di tipi maschili sperimentali nello studio e dal numero stimato di individui necessari per la potenza statistica. Quattro o cinque giorni dopo che i genitori sono stati trasferiti fuori da una fiala, aumentare la superficie disponibile per l'impupamento nella fiala inserendo una carta piegata a più pieghe nel mezzo. Esamina le fiale per verificare la presenza di pupe scure quando sono visibili.

Queste mosche emergeranno entro 24 ore, da 11 a 12 giorni dopo che l'incrocio è stato impostato per la prima volta. Inizia a raccogliere femmine vergini e maschi ingenui da queste fiale. Per prima cosa al mattino, scartare le mosche emerse durante la notte.

Quindi, una o due volte durante il giorno, a intervalli di quattro-sei ore, raccogliere le mosche dalle fiale, anestetizzare le mosche introducendo anidride carbonica nella fiala. Quindi picchietta le mosche verso il basso e sessuatele sotto lo stereomicroscopio. Posizionare le mosche desiderate in fiale diverse per sesso e fenotipo ed etichettare le fiale in modo appropriato.

Non caricare i flaconcini con più di 10 potenzialmente . Le femmine vergini impostano un ciclo di luce e buio da 12 a 12 sulle mosche per regolare il loro tempo di occlusione a tuo vantaggio. Le ore di picco dell'occlusione si verificano una o due ore dopo l'alba soggettiva e due ore prima che le luci vengano spente.

Esistono due versioni di questo esperimento. Sono indicati come il saggio di reato e il test di difesa. Questa sezione descrive come condurre il test di reato la mattina del primo giorno, impostare il primo accoppiamento utilizzando un aspiratore.

Un aspiratore è costituito da un pezzo di tubo attaccato a una punta di pipetta con una barricata che mantiene le mosche aspirate nella punta. Il foro della punta è allargato. Per le mosche predisporre fiale contenenti dieci femmine vergini di quattro o cinque giorni.

Con 10 maschi di riferimento ingenui, hanno preparato due o tre fiale di questo tipo al giorno per cinque giorni consecutivi. Per ogni fiala, lasciare che le mosche si accoppino per due ore, quindi scartare i maschi di riferimento e trasferire ogni femmina in una nuova fiala utilizzando un aspiratore, etichettare ogni fiala V una e lasciare la femmina nella fiala per due giorni. Il terzo giorno, impostare il secondo accoppiamento con maschi naïve dell'altro genotipo per ogni femmina.

Due ore prima del tramonto soggettivo, utilizzare un aspiratore per trasferire la femmina in una nuova fiala con maschi sperimentali di tre, cinque o sei giorni dello stesso genotipo. Etichettare le fiale con il genotipo maschile ed etichettare la nuova fiala V due. La mattina dopo è il quarto giorno.

A due ore prima delle mosche soggettive, all'alba scartare i maschi utilizzando l'aspiratore. Il sesto giorno, trasferisci ogni femmina in un'altra nuova fiala etichettata V tre. Il 10° giorno, scartare le femmine il 17° giorno.

Ispezionare le fiale V one della progenie. Determina se la femmina era vergine o meno quando si è accoppiata con la posta di riferimento e se si è accoppiata con la posta di riferimento. Lo stesso giorno, ispezionare la progenie dalle due fiale V abbattendo le mosche con il carbonio.

Ordinali per colore degli occhi e sesso. Quindi registra il numero di progenie generata dal primo e dal secondo maschio. In questo esperimento, solo la progenie femminile può essere assegnata in modo inequivocabile come indicato dai maschi di riferimento o sperimentali.

In altri esperimenti, diversi marcatori genetici potrebbero essere utilizzati anche per determinare la paternità della prole maschile. Scartare la progenie ispezionata, ma conservare le due fiale V per un secondo. Ispezione il giorno 20, registrare la paternità della progenie dalle due fiale V per la seconda volta ed effettuare la prima ispezione della progenie emersa dalle tre fiale V.

Quindi, tre giorni dopo, il giorno 23, ispeziona la progenie emersa in V tre. Ancora una volta, i conteggi della progenie registrati dovrebbero essere organizzati in modo appropriato per una facile ispezione visiva e un'analisi efficiente con un pacchetto statistico per ogni femmina e i conteggi da V due e V tre. Per calcolare il numero totale di progenie citate dal maschio di riferimento e dal maschio sperimentale, calcolare il punteggio P 2 per ciascuna femmina come la proporzione di progenie citata dal maschio sperimentale rispetto alla progenie sia del maschio sperimentale che di quella di riferimento.

Alcune femmine devono essere escluse dall'analisi. In primo luogo, quelli senza progenie o con una progenie molto limitata, in secondo luogo le femmine che sono morte durante la procedura e in terzo luogo le femmine che sono state inseminate con successo solo da uno dei due maschi. Cerca le differenze statistiche nei valori P due.

Tra i tipi maschili sperimentali, utilizzare test parametrici o non parametrici basati sull'inclinazione della distribuzione dei valori P due e sulla dipendenza tra la varianza e la proporzione media. I dati di solito non vengono distribuiti normalmente. La trasformazione del segno dell'arco, nota anche come trasformazione angolare, può essere applicata a P originale due valori prima del test T o di un test NOVA di uno studente, o semplicemente utilizzare test non parametrici come WIL Coxin due esperimenti di reato con drosophila melanogaster.

I maschi sperimentali sono stati condotti uno con e l'altro senza un cluster ESIC funzionale. In tutto, dal 58% all'83% delle donne erano informative. I maschi senza un cluster ESIC funzionale hanno mostrato punteggi P 2 significativamente più bassi rispetto ai maschi con il cluster ESIC intatto.

Ciò indica che il cluster SIC aumenta la capacità competitiva degli spermatozoi. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire esperimenti di doppio accoppiamento, in modo da poter rilevare le differenze nella capacità competitiva degli spermatozoi tra maschi mutanti e di controllo.