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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Educazione Scientific Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
Plasmid Purification
  • 00:00Panoramica
  • 00:44Principal Components of the Plasmid Purification Procedure
  • 02:25Plasmid Purification Procedure: Step by Step
  • 05:53Applications
  • 07:51Summary

Purificazione del plasmide

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Panoramica

La purificazione del plasmide è una tecnica utilizzata per isolare e purificare il DNA plasmidico dal DNA genomico, dalle proteine, dai ribosomi e dalla parete cellulare batterica. Un plasmide è un DNA piccolo, circolare, a doppio filamento che viene utilizzato come vettore di specifiche molecole di DNA. Quando introdotto in un organismo ospite attraverso la trasformazione, un plasmide verrà replicato, creando numerose copie del frammento di DNA in studio.

In questo video, viene descritta una procedura generalizzata passo-passo su come eseguire la purificazione del plasmide. La purificazione del plasmide comprende tre fasi fondamentali: crescita della coltura batterica, raccolta e lisi dei batteri e purificazione del DNA plasmidico. Il video contiene una spiegazione in cui il plasmide può essere trovato in ogni fase del protocollo e per analizzare quantitativamente e qualitativamente il DNA del plasmide con uno spettrofotometro e / o un’elettroforesi su gel. Esistono diversi tipi di metodi di purificazione del plasmide disponibili, che sono orientati verso la resa desiderata, il numero di copie del plasmide e il volume della coltura batterica.

Procedura

I plasmidi sono molecole circolari, extra cromosomiche, di DNA e in biologia molecolare fungono da vettori, o vettori, per uno specifico frammento di DNA. I batteri vengono utilizzati per replicare i plasmidi, in modo che il DNA di interesse sia prodotto in serie. Il processo attraverso il quale i ricercatori ottengono plasmidi dai batteri è chiamato purificazione dei plasmidi, che sarà spiegato in questo video. Ovviamente, la purificazione dei plasmidi comporta la purificazione dei pla…

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Plasmid Purification. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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