Arto Remote ischemica precondizionamento: una tecnica neuroprotettivo nei roditori

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di erogare un'ischemia nell'arto posteriore che condiziona i tessuti remoti contro lo stress successivo. Ad esempio, la retina contro le lesioni leggere. Ciò si ottiene calibrando prima il manometro manuale Ingle mom.

Successivamente, l'animale viene anestetizzato e posizionato su un termoforo. Quindi la zampa posteriore dell'animale viene estesa e il polsino viene posizionato in posizione. Infine, l'ischemia remota viene eseguita gonfiando il bracciale con la pompa, sgonfiando il bracciale e ripetendo il processo una seconda volta.

In definitiva, se applicata prima di una lesione lieve, l'ischemia remota viene utilizzata per mostrare un miglioramento della funzione retinica e del numero di fotorecettori sottoposti ad apoptosi. Questo metodo può rispondere a domande chiave nel campo delle neuroscienze, come ad esempio come viene indotta l'autoprotezione con il precondizionamento ischemico remoto per effettuare il monitoraggio della temperatura cutanea in tempo reale. Aprire il software di registrazione della temperatura, regolare l'impostazione della temperatura tra 30 e 35 gradi Celsius e la frequenza del campionamento ogni 100 millisecondi utilizzando un bracciale neonatale di seconda taglia per un ratto da 250 a 550 grammi, collegare il bracciale al manometro fome utilizzando un adattatore se necessario.

Quindi, sgonfiare il bracciale allentando la valvola di rilascio dell'aria o scollegando il tubo del bracciale dall'adattatore. Assicurarsi che non rimanga pressione nel tubo e che l'ago del manometro poggi a zero all'interno del rettangolo ovale. Quindi per controllare la pressione tra il tubo, il manometro e la tosse.

Utilizzare pompe delicate del bulbo di gonfiaggio per gonfiare il bracciale fino a quando il manometro non legge 100 milligrammi di mercurio. Dopo essersi assicurati che la pressione rimanga costante, sgonfiare il bracciale aprendo lentamente la valvola di rilascio dell'aria dopo il tramonto, adattando l'animale secondo il protocollo di testo. Conferma che ha un buon tono muscolare pizzicando l'arto posteriore superiore per confermare che sia presente un muscolo adeguato.

Dopo aver sedato l'animale secondo il protocollo di testo, controllare la profondità dell'anestesia estendendo la gamba e pizzicando la pelle sul lato inferiore del piede. Quindi applicare lacrime artificiali. Posiziona il ratto su un termoforo o su un tubo dello scaldabagno circolante in posizione prona con i cuscinetti dei piedi degli arti inferiori rivolti verso l'alto.

Per applicare la sonda di temperatura cutanea, estendere la zampa del ratto che andrà incontro a ischemia e posizionare saldamente la sonda cutanea sul poggiapiedi, posizionandola in modo da massimizzare il contatto tra la sonda di temperatura e la pelle. Quindi utilizzare del nastro di carta per fissare la sonda. Controllare il posizionamento della sonda cutanea monitorando la temperatura sul software di registrazione della temperatura per uno o due minuti.

Assicurarsi che la temperatura della pelle sia compresa tra 30 e 34 gradi Celsius e rimanga stabile. In caso contrario, regolare la sonda per eseguire l'ischemia a distanza. Inizia con un bracciale sgonfio e assicurati che la valvola di pressione dell'aria sia chiusa.

Estendi la gamba e circonda liberamente il polsino sull'arto posteriore superiore. Usa l'indice e il pollice per estendere la gamba e le dita inferiori per mantenere in posizione il polsino allentato. Ora, aumentare la pressione del bracciale a 160 millimetri di mercurio.

Una volta raggiunta la pressione corretta, avviare il timer e le registrazioni della temperatura del piede. La temperatura del piede dovrebbe scendere di due gradi Celsius dopo cinque minuti di pressione costante, pompare ripetutamente il bulbo di gonfiaggio in brevi raffiche per mantenere la pressione desiderata del bracciale e mantenere la posizione del bracciale sopra il ginocchio dell'animale durante l'ischemia. Eroga continuamente ischemia remota per cinque minuti.

Quindi rilasciare la valvola della pressione dell'aria per una riperfusione di cinque minuti prima di ripetere l'ischemia remota. Al termine della procedura, sgonfiare la pressione del bracciale allentando la valvola di pressione dell'aria. Controllare la variazione di temperatura nel corso del protocollo di ischemia.

Quindi rilasciare il bracciale. Posizionare l'animale su un termoforo e continuare a monitorare fino all'ambulatorio. Quando l'animale sta camminando, riportalo nell'alloggio.

Infine eseguire la lesione leggera ed eseguire il test del tunnel. Secondo il protocollo di testo, come si vede chiaramente qui, un bracciale per la pressione sanguigna posizionato sopra il ginocchio sollevato a oltre 160 millimetri di mercurio interrompe il flusso sanguigno all'arto posteriore. La mancanza di flusso sanguigno ha comportato una riduzione della temperatura del piede inferiore alla temperatura interna dell'animale, che è aumentata dopo che il bracciale è stato sgonfiato in linea con la condizione necessaria per la RIP.

In questa figura, l'elettroretinogramma adattato al buio o ERG di un ratto normale allevato in fioc ha mostrato un grande fotorecettore e una risposta retinica interna a un lampo luminoso una settimana dopo la lesione leggera. Le registrazioni ERG hanno mostrato una grave riduzione dell'ampiezza rispetto ai controlli, riflettendo la perdita di fotorecettori, tuttavia, il precondizionamento dell'arto posteriore con ischemia utilizzando un protocollo di riperfusione di due per cinque minuti immediatamente prima dell'ischemia ha protetto i fotorecettori da lesioni leggere. Questo pannello mostra che le ampiezze R-I-P-E-R-G erano maggiori della sola lesione leggera con una leggera riduzione dell'onda A.

Infine, un bracciale posizionato sotto il ginocchio non protegge i fotorecettori dalle lesioni da luce come riflesso nelle ampiezze ERG ridotte viste qui. Metodi come il precondizionamento ischemico remoto possono essere eseguiti per rispondere a ulteriori domande, come ad esempio quali sono i meccanismi della neuroprotezione endogena e come può essere applicata l'ischemia remota per migliorare la funzione da lesioni e degenerazioni del SNC.