Isolamento e caratterizzazione di mouse Antral ovociti Sulla base Nucleolare cromatina Organizzazione

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di dettagliare tutti i passaggi necessari per caratterizzare gli ovociti antrali di topo in base alla loro organizzazione della cromatina, in base alla loro capacità di sostenere pienamente un futuro sviluppo embrionale. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia dello sviluppo, come ad esempio come distinguere e isolare due diversi tipi di ooyctes antrali, SN, nucleolo circondato, e NSN, nucleolo non circondato, che risiedono nel compartimento antrale dell'ovaio dei mammiferi. Per raccogliere le ovaie, iniziare iniettando topi femmina IP di età compresa tra tre e sei settimane con 2,5 unità internazionali di gonadotropina sierica di cavalla gravida.

Due giorni dopo, circa un'ora prima del raccolto, riempire una capsula di Petri sterile con terreno M2 e aggiungere diverse gocce da 20 micrilitri di terreno M2 a una seconda piastra di Petri, coprendo ogni goccia con 1,5 millilitri di olio minerale. Quindi trasferire tutte le piastre di Petri in un incubatore a 37 gradi Celsius, con il 5% di anidride carbonica per consentire al mezzo di equilibrarsi. Successivamente, utilizzare le forbici da dissezione sterili per praticare un'incisione nella pelle che copre la parete addominale, seguita da un'incisione nel peritoneo del primo topo iniettato con ormoni.