Progettazione di dispositivi microfluidici per lo studio Risposte cellulare in singolo o Coesistenza chimico / elettrico / Shear stress stimoli

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di progettare e fabbricare dispositivi microfluidici per osservare come le cellule rispondono agli stimoli ambientali. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella biologia cellulare e nell'ingegneria biomedica. Come il modo in cui le cellule rispondono a diversi stimoli ambientali, tra cui sostanze chimiche, sollecitazioni di taglio e campo elettrico. Il vantaggio principale di questa tecnica è che i tubi sono facili da fabbricare e assemblare. E questi dispositivi microfludici possono rendere la condizione in vivo con elevate capacità superbe. A dimostrare la procedura saranno Tzu-Yuan Chou, uno studente universitario del mio laboratorio, e Hsien-San Hou, un post-staff del laboratorio del Dr. Julian Chung. Per iniziare, accendi il laser a forma di anidride carbonica e controlla la sua connessione al computer. Quindi carica un modello di albero di Natale pre-disegnato, come uno dei modelli mostrati qui nello scriba. Quindi, posiziona un foglio di PMMA o un pezzo di nastro biadesivo sopra il tavolino del tracciatore. Regola la messa a fuoco del laser ad anidride carbonica utilizzando la barra di calibrazione e il laser al neon ad elio visibile. Quindi incidere il motivo sul substrato. Al termine, raccogli il substrato del modello, rimuovi i pezzi indesiderati e usa un flusso di azoto per pulire la superficie da eventuali detriti rimanenti. Ripeti questo processo per ogni componente del chip. Assemblare il chip microfluidico da sforzo di taglio chimico. Per fare ciò, attaccare tre fogli di fogli di PMMA modellati con sollecitazione di taglio chimico utilizzando due pezzi di nastro biadesivo inciso. Usa la super colla per fissare un adattatore acrilico con filettature al centro allo strato di PMMA più in alto del chip allineando le filettature delle viti e i fori. Questi adattatori fungeranno da prese di ingresso medie e connettori a ponte salino. Quindi aggiungere un altro pezzo di nastro biadesivo di 07 mm di spessore sul fondo del chip e attaccare il chip a una piastra di Petri di 10 cm di diametro. Una volta assemblato, mettere il chip in una camera a vuoto per una notte. Ora assembla il chip del campo chimico-elettrico. Fissare il foglio di PMMA inciso per il chip del campo chimico-elettrico con nastro biadesivo a una piastra di Petri di 10 cm di diametro. Prima di utilizzare le patatine, esponile ai raggi UV per 30 minuti per sterilizzarle. Quindi, collegare gli ingressi dei chip a siringhe riempite di PBS da 3 ml tramite tubi di plastica e dadi serrati a mano. Allo stesso modo, collegare le uscite a un tubo di scarico. Premere lentamente lo stantuffo della siringa per innescare i canali fluidici con PBS. Spingere la siringa avanti e indietro per rimuovere le bolle, quindi inserire le patatine all'interno di un'incubatrice durante la notte. Per impostare i chip del campo chimico-elettrico, riempire il 3% di agaro nei dadi tubolari per impostare i ponti salini. Quindi posizionare gli elettrodi di cloruro d'argento e argento nei dadi tubolari. Far crescere le cellule CL1-5 del cancro del polmone in D-MEM integrato con il 10% di FBS fino a raggiungere il 90% di confluenza. Quindi aspirare il terreno. Lavare le celle una volta con PBS preriscaldato. E aggiungere 2 ml di una soluzione tampone allo 05% di tripsina in una piastra di 10 cm di diametro. Riposizionare le celle a 37