Name: Sviluppo di un più sensibile e specifica Chromogenic Agar Media per la rilevazione di Parahaemolyticus Vibrio E Altro Vibrio Specie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Scopri un nuovo mezzo cromogenico per rilevare Vibrio parahaemolyticus con maggiore sensibilità e specificità rispetto ai metodi convenzionali. Questa tecnica avanzata migliora la sicurezza alimentare e il monitoraggio microbiologico ambientale.

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Ringraziamo M. Channey, E. Chau, e K. Tomas per la loro assistenza nel progetto. forniture di progetto sono stati in parte finanziati dalla California Polytechnic State University.

1. Media e coltura di ceppi microbici NOTA: Utilizzare tecniche asettiche in tutti gli esperimenti. Utilizzare materiali sterili. Sterilizzare tutti i contenitori, strumenti e reagenti prima dell&#39;uso. Autoclavare tutti i materiali di scarto prima dello smaltimento perché sono considerati a rischio biologico. la temperatura e il tempo Autoclave combinazione è ≥121 ° C x ≥15 min per tutte le seguenti procedure. <ol><li> Per rendere ~ 1-L Tryptic Soy Agar (TSA), prima aggiungere 1 L di acqua deionizzata in una beuta 2-L contenente una ancoretta magnetica. Utilizzare un pallone che è almeno due volte più grande del volume finale. Aggiungere 30 g di polvere di triptico brodo di soia e 20 g di agar granuli nel matraccio. NOTA: Utilizzare 2% agar invece del 1,5% per limitare brulicare di qualche Vibrio spp. <ol><li> Mescolare accuratamente accendendo l&#39;agitatore. Mentre si agita, accendere il fuoco a bollire la miscela. Rimuovere la beuta dal riscaldatore non appena il composto inizia a bollire. Liberamente coprire °e pallone con una carta stagnola. Nastro il foglio per fissarlo al pallone prima autoclave. </li><li> Per fare il brodo di soia trittico (TSB), omettere l&#39;agar dalla ricetta al punto 1.1. NOTA: Può usare bottiglie invece di beuta. </li><li> Per rendere triptico agar di soia integrato con cloruro di sodio 2% o NaCl (TSAS), aggiungere 20 g di NaCl nella miscela prima agitazione e riscaldamento. Per fare il brodo di soia trittico addizionato con 2% NaCl (TSBS), omettere l&#39;agar, aggiungere 20 g di NaCl nella miscela prima agitazione e riscaldamento. </li></ol></li><li> Per rendere infuso cuore cervello (BHI) agar, sospendere 37 g di polvere di BHI e 15 g granulato di agar in 1 L di acqua purificata. Il calore sotto agitazione per sciogliere la polvere. Autoclave. Omettere l&#39;agar per fare BHI brodo. </li><li> Per rendere TCBS agar, sospendere 89 g della polvere TCBS in 1 L di acqua purificata. Di calore con agitazione e far bollire per 1 minuto per sciogliere completamente la polvere. Non sterilizzare in autoclave. </li><li> Per tutti i supporti di agar, raffreddare l&#39;agar caldo per 45-50 ° C in un bagno d&#39;acqua. Disporre le piastre di Petri vuote in pile di cinque o sei piatti. Partendo dal fondo della pila, versare l&#39;agar fuso in ciascuna piastra di Petri per raggiungere circa metà pieno. Chiudere il coperchio piatto Petri dopo avere versato. Lasciare che l&#39;agar solidificare lasciando le piastre siedono a temperatura ambiente. <ol><li> Utilizzare le piastre di agar il giorno dopo o dopo 12 ore. Conservare le piastre inutilizzati in frigorifero per un massimo di due settimane. Prima dell&#39;uso, rimuovere le piastre dal frigorifero e equilibrare a temperatura ambiente per almeno 15 min. NOTA: agar Un litri rende ~ 45 piastre di agar. Lasciare le piastre di agar per asciugare sufficientemente il giorno di preparazione, e portare a temperatura ambiente dopo conservazione frigorifera per ridurre efficacemente la diffusione delle colonie. </li></ol></li><li> Ottenere piastre cioccolato e cromogenico agar e equilibrare a temperatura ambiente prima di ogni esperimento. </li><li> Sottocultura tutti i 54 ceppi microbici indicati nella tabella 1 ogni pochi days. <ol><li> Utilizzare un ciclo inoculo sterile per trasferire le culture da uno stock congelati o un lotto precedente di terreni non selettivi, come BHI, TSB / TSA o agar cioccolato. Grow halophilic Vibrio spp. su TSBS / TSAS. </li><li> Per controllare la purezza della cultura, consecutive tutti i ceppi in un modello che consenta di osservazione di colonie isolate. Ad esempio, utilizzare un modello striature trifase per diluire una grande quantità di batteri per piccole quantità, per ottenere alla fine colonie isolate. </li></ol></li><li> Incubare le piastre a testa in giù a 35-37 ° C per un massimo di 48 ore. Per campylobacter spp., Incubare i tubi o piastre in un vaso chiuso coperchio contenente una sacca di gas per produrre un ambiente microaerofili. Osservare morfologia delle colonie dopo l&#39;incubazione. colture pure dovrebbero produrre colonie che presentano simili morfologia delle colonie. NOTA: Incubare tutte le piastre capovolta per evitare goccioline d&#39;acqua condensate formate sul lato inferiore del coperchio di cadere sul colleOnies. </li></ol> 2. Specie Determinazione mediante PCR <ol><li> Condurre tlh -PCR per confermare l&#39;identità di V. ceppi parahaemolyticus. Utilizzare primer tlh -F (5 &#39;AAA GCG GAT TAT GCA GCA GAA CTG 3&#39;) e tlh -R (5 &#39;GCT ACT TTC TAG CAT TTT CTC TGC 3&#39;) per amplificare un frammento di 450 bp del gene termolabile hemolysin 20 . <ol><li> Utilizzare un ciclo inoculo sterile per trasferire alcune colonie isolate di ciascun V. parahaemolyticus ceppo da TSAS a 5 ml di TSBS. Incubare a 35-37 ° C per 16-24 ore. </li><li> culture centrifugare a 14000 g per 1 min. Rimuovere il surnatante e lavare il pellet due volte con tampone fosfato (PBS). Far bollire la sospensione per 3 minuti a cedere lisato cellulare. NOTA: V. parahaemolyticus è facile essere lisate. Pertanto reagente di lisi non è necessaria. È anche possibile usare un po &#39;di colonia direttamente come modello. </li><li> Eseguire la PCR in una reazione di 25 microlitri volume. Preparare una miscela di reazione contenente una concentrazione finale di 1x tampone PCR, 1,5 mM MgCl 2, 100 mM di ciascun dNTP, 1 mM di ciascun primer, 1 U Taq polimerasi e 1 ml di lisato cellulare. Dopo preincubazione a 94 ° C per 5 min, eseguire 35 cicli di amplificazione di 94 ° C per 30 sec, 58 ° C per 30 sec e 72 ° C per 60 sec 21. </li><li> aliquote di carico di amplicone 5 ml a 1,5% gel di agarosio. Attivare alimentazione per iniziare l&#39;elettroforesi. Visualizzare la presenza o l&#39;assenza di ampliconi sotto illuminazione UV dopo colorazione con etidio bromuro. </li></ol></li></ol> 3. La crescita su selettivo e differenziale media <ol><li> Da due a quattro giorni prima dell&#39;esperimento, striscia tutti i ceppi microbici indicati nella tabella 1 su terreno non selettivo (TSAS, BHI o agar cioccolato) per l&#39;isolamento delle colonie. Incubare le piastre a 35-37 ° C per 48 ore. Controllare la purezza delle culture osservando la morfologia delle colonie dopo incubazione. colture pure dovrebbero produrre colonie che presentano simili morfologia delle colonie. </li><li> Trasferire alcune colonie isolate dal punto 3.1 in 5 ml di brodo. Incubare le provette a 35-37 ° C per 16-24 ore. Nota: utilizzare giovani colonie, che sono meno di quattro giorni, per preparare le culture durante la notte in tutti gli esperimenti. </li><li> Streak un&#39;ansata di culture durante la notte su terreni selettivi e differenziali (TCBS e cromogenico agar) per l&#39;isolamento delle colonie. Incubare le piastre a 35-37 ° C per un massimo di 96 ore. </li><li> Registrare la crescita complessiva di tutti i ceppi esaminando sia la densità coltura su piastra e la dimensione delle colonie isolate. Registrare il colore delle colonie sotto luce ambientale e / o UV. Nota altre caratteristiche della colonia isolata, come l&#39;elevazione, il margine e la forma. </li></ol> Assay 4. Recupero <ol><li> Selezionare un sottoinsieme rappresentativo di V. ceppi parahaemolyticus (n = 14) che comprendono diversi sierotipi e le origini di isolamento <sup&gt; 22. Seminare giovani culture dalle piastre in 5 ml di TSBS. Incubare le provette a 35-37 ° C per 16-24 ore. </li><li> Effettuare un metodo Plate Count standard delle culture overnight come descritto di seguito. <ol><li> Vortex per mescolare bene le culture durante la notte. Fare un 10 volte o 10 -1 diluizione con il trasferimento di 100 microlitri della cultura durante la notte in una provetta contenente 900 ml di PBS. Vortex per mescolare bene. </li><li> Utilizzare un nuovo puntale per trasferire 100 ul dal tubo 10 -1 diluizione ad un altro tubo contenente 900 ml di PBS. Vortex per mescolare bene. Ciò costituisce 10 -2 diluizione. Ripetere il processo sequenziale di ottenere 10 -7 diluizione. </li><li> Utilizzando i tubi di diluizione 10 -4 a 10 -7, piatto 100 ml ciascuno sulle cromogenici, TCBS e CST piastre di agar. NOTA: Il fattore di diluizione (df) sulla piastra diventa 10 -5 a 10 -8, rispettivamente. </li><li> Stendere le aliquote in modo uniforme su tegli AGAR superficie. NOTA: È bene utilizzare lo stesso spreader per ceppo sullo stesso supporto, purché il un&#39;aliquota più diluito viene diffuso prima (cioè, da 10 -8 a 10 -5). Non usare la stessa spreader per diversi media. </li><li> Incubare le piastre a 35-37 ° C per un massimo di 96 ore. Contare colonie sulle piastre. Ignorare lastre portanti colonie che sono troppo numerosi per contare (TNTC) o minore di 25. Calcolare CFU / ml secondo il seguente: <img alt="Equazione 1" src="/files/ftp_upload/54493/54493eq1.jpg" /> Dove N = numero di cellule nel tubo non diluito, espressa come CFU / ml o CFU / g C = il numero totale di colonie contate su piastre che portano 25-300 colonie n 1 = il numero di targa (s) dove colonie contate sono da df minore n 2 = il numero di targa (s) dove colonie contate sono dalla successiva diluizione di 10 volte dF = fattore di diluizione più basso (vale a dire, la diluizione più concentrata) </li></ol></li><li> Confronto CFU / ml tra i diversi mezzi di comunicazione. Utilizzare CFU / ml su TSAS al 100%, calcolare il recupero% di V. parahaemolyticus cresciuto sul agar cromogenico e TCBS. </li></ol> Assay 5. Concorrenza <ol><li> Scegliere un sottoinsieme di ceppi che mostrano diverse morfologie di colonia sul agar cromogenico e TCBS. NOTA: In questo modo, sarà possibile contare le colonie originati da V. parahaemolyticus solo, nonostante la presenza di altre specie nella inoculo. <ol><li> Scegliere un V. ceppo parahaemolyticus che produce i turchesi e ciano colonie attesi sulle TCBS e l&#39;agar cromogenico, rispettivamente. </li><li> Scegli un non V. parahaemolyticus e una specie non Vibrio che non crescono su uno di questi mezzi, o presentano diversi colori colonia. NOTA: per esempio, V. metschnikovii cresce molto debolmente on TCBS e non crescono sulla agar cromogenico. Shigella sonnei non crescono sugli TCBS ma produce colonie magenta sul agar cromogenico. </li></ol></li><li> Dopo la selezione dei ceppi di cui sopra, preparare brodi di coltura durante la notte utilizzando colonie isolate cresciute su terreni non selettivi. <ol><li> Fare culture durante la notte di V. parahaemolyticus e V. metschnikovii trasferendo alcune colonie isolate da TSAS a 5 ml di TSBS. Incubare a 35-37 ° C per 16-24 ore. </li><li> Fare culture durante la notte di Shigella sonnei con il trasferimento di alcune colonie isolate da BHI agar a 5 ml di brodo BHI. Incubare a 35-37 ° C per 16-24 ore. </li></ol></li><li> Per ogni ceppo, eseguire una serie di diluizioni simile ai punti 4.2.1 e 4.2.2. Piastra diluizioni appropriate sul TSAS o BHI per determinare CFU / ml della cultura durante la notte, utilizzando l&#39;equazione mostrato al passaggio 4.2.5. NOTA: in genere, 100 ml di diluizione 10 -5 a 10 -7tubi funziona per la maggior parte delle culture. Utilizzare i valori CFU / ml per eseguire il calcolo l&#39;esatta quantità di cellule utilizzate nella fase successiva. I valori CFU / ml calcolati si ottengono dopo incubazione, anche se le seguenti operazioni vengono eseguite nella stessa data come punto 5.3. </li><li> Utilizzando le culture durante la notte e tubi di diluizione in passi 5.2 e 5.3, mescolare diverse quantità di un V. ceppo parahaemolyticus e un non V. Specie parahaemolyticus. Ad esempio, miscelare 500 ml di tubo 10 -5 diluizione V. parahaemolyticus con 500 ml di culture durante la notte di V. metschnikovii. NOTA: Questa miscela simula fondo elevato microflora. Per simulare uno sfondo partire microflora, mescolare 500 ml ciascuna del tubo 10 -5 diluizione da entrambe le specie. </li><li> Distribuire 100 ml di miscela ciascuno sulla cromogenici, TCBS e CST piastre di agar. </li><li> Dopo incubazione a 35-37 ° C per un massimo di 96 ore, contare le colonie di V. parahaemolyticus e la non V. Specie parahaemolyticus in base alla loro differenza di crescita e morfologia delle colonie su agar cromogenico e TCBS. NOTA: Ad esempio, se la non V. specie parahaemolyticus non cresce sulla agar cromogenico e TCBS, tutte le colonie saranno di V. parahaemolyticus. Se la mancata V. Specie parahaemolyticus cresce su entrambi i supporti, solo le colonie turchese su colonie TCBS e ciano su agar cromogenico saranno di V. parahaemolyticus. La mancata V. Specie parahaemolyticus può o non può esibire simili morfologia delle colonie a V. parahaemolyticus su TSAS. <ol><li> Se la mancata V. Specie parahaemolyticus cresce in modo simile a V. parahaemolyticus su questo terreno non selettivo, dividere il conteggio delle colonie per due per ottenere i numeri per V. parahaemolyticus solo. Confrontare il conteggio effettivo colonie con il conteggio atteso derivata dal punto 5.3. </li></ol></li></ol> 6. Effetti di Oyster omogenati <ol><li> Pesare ≥50 g di carne di ostriche da ≥12 molluschi tra cui carne e liquori. <ol><li> Aggiungere la stessa quantità di PBS alla carne di ostriche e liquori. Miscela la miscela ad alta velocità per 90 sec. Ciò costituisce 2 -1 diluito omogeneizzato di ostriche. </li><li> Aggiungere 100 g di 2 -1 diluito omogenato ostriche a 400 g di PBS. Utilizzare una scala per misurare il peso, non in volume. Frullare il composto ad alta velocità per 1 min. Autoclave l&#39;omogeneizzato di ostriche. NOTA: Questo sarà l&#39;omogeneizzato ostrica utilizzato per la chiodare. </li></ol></li><li> Ripetere l&#39;analisi di recupero (fase 4), in presenza di ostriche omogeneizzato. <ol><li> Dopo il 500 g di ostriche omogenato si raffredda, aggiungere 100 ml di V. parahaemolyticus culture durante la notte coltivate in TSBS ad esso. Determinare la quantità effettiva di V. cellule parahaemolyticus nel inoculo di gestione delle procedure di conteggio su piastra standard descritti al punto 4.2. </li></ol></li><li> rappresentantemangiare il saggio di concorrenza (punto 5) in presenza di ostriche omogeneizzato. <ol><li> Dopo il 500 g di ostriche omogenato si raffredda, aggiungere 100 ml ciascuna delle culture durante la notte di V. parahaemolyticus e non V. parahaemolyticus ad esso. Determinare la quantità effettiva di batteri cellule nel inoculo di gestione delle procedure di conteggio su piastra standard descritto al punto 4.2 </li></ol></li><li> Mescolare le cellule batteriche con ostriche omogenato bene usando un omogeneizzatore. NOTA: Dopo la miscelazione, l&#39;omogeneizzato ostriche contenente le cellule aggiunti intenzionalmente è chiamato a spillo ostriche omogeneizzato. </li><li> Fare diluizioni del omogeneizzato ostrica a spillo per ottenere 10 -1 a 10 -3 tubi di diluizione secondo le modalità descritte al punto 4.2.2. Distribuire 100 ml di ogni diluizione sul cromogenico, TCBS e TSAS agar. Incubare le piastre a 35-37 ° C per un massimo di 96 ore. </li><li> Confrontare la conta delle colonie su agar reale cromogenico e TCBS con l&#39;expected conteggio delle colonie dedotta da Piazza 6.2.1 e 6.3.1. NOTA: Ad esempio, se un tubo di V. parahaemolyticus coltura overnight contiene 10 8 UFC / ml, un inoculo di 100 microlitri significa che 10 7 cellule vengono aggiunti 500 g di ostriche omogenato, ottenendo 5 x 10 4 cellule / g. Dopo la diluizione e la placcatura, la piastra avendo df = 10 -2 dovrebbe produrre 500 colonie; mentre che avere df = 10 -3 dovrebbe cedere 50 colonie. Queste sono le conta delle colonie attesi. </li></ol>

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</ol>

Alcuni media sono stati generosamente forniti da Hardy Diagnostics, Santa Maria, CA. Thorsen ha condotto questo studio mentre era studente alla California Polytechnic State University. Attualmente è un dipendente di Hardy Diagnostics.

Questo studio si concentra sullo sviluppo terreni di coltura e di valutazione. Convenzionalmente, TCBS è selettivo e differenziale mezzo utilizzato per l&#39;isolamento e la rilevazione V. parahaemolyticus, V. cholerae e V. vulnificus 12. Tuttavia, le limitazioni sono stati riportati per questo mezzo, come l&#39;incapacità di differenziare V. cholerae da altre specie Vibrio. Il saccarosio e indicatore di pH sono gli agenti di differenziazione di TCBS. Così, la produzione di...

In qualità di membro del genere Vibrio, V. parahaemolyticus è una curva, batterio a forma di bastoncello Gram-negativi, non sporigeni. Presenta elevata motilità sia in ambienti liquidi e semisolidi. La maggior parte V. ceppi parahaemolyticus non sono patogeni per l&#39;uomo, ma i sottotipi patogeni hanno causato epidemie e pandemie, quindi questa specie è considerata un importante agente patogeno di origine alimentare in molti paesi 1,2. L&#39;incidenza di infezione da Vibrio negli Stati Uniti ha mostrato una tendenza al rialzo dal 2000 3. Tra Vibrio spp., V. parahaemolyticus è la specie più frequentemente riportati causano malattie negli Stati Uniti 4,5. Altre specie clinicamente rilevanti includono V. alginolyticus, V. vulnificus, V. cholerae, ecc Una piccola percentuale delle malattie è causata da specie multiple simultaneamente. V. parahaemolyticus è un ghiaccinhabitant di acqua marina e quindi ampiamente distribuita nelle acque marine in tutto il mondo, tra cui gli estuari. La specie è stata scoperta nel 1950 a seguito di un focolaio di intossicazione alimentare in Giappone. Negli Stati Uniti, la specie è stato isolato in acqua di mare, sedimenti, e frutti di mare nella regione di Puget Sound 6,7. Filtratori in habitat marini, come molluschi bivalvi, possono porto V. parahaemolyticus come parte della loro flora naturali 8. Come tale, V. infezioni parahaemolyticus in umano sono spesso legati al consumo di frutti di mare contaminati, in particolare frutti di mare crudi o poco cotti. Un percorso meno comune di entrata si verifica quando ferita aperta è esposto ad acqua di mare, che porta a infezioni della pelle. La maggior parte V. ceppi parahaemolyticus non causano malattie umane, ma alcuni sottotipi ospitano fattori di virulenza, come emolisina termostabile diretta (TDH) sono patogeni. I sintomi più frequenti di origine alimentare V. infezione parahaemolyticus sonodiarrea e dolori addominali, seguito da nausea, vomito e febbre. Mal di testa e brividi sono anche riportati. Il periodo di incubazione medio è di 15 ore, ma può essere fino a 96 ore dopo il consumo di una quantità sufficiente di ceppi patogeni 9. La malattia dura da due a tre giorni. I sintomi gastroenterite causata da V. parahaemolyticus sono largamente auto-limitante e quindi il trattamento speciale non è necessaria. I casi lievi di gastroenterite possono essere efficacemente trattati con reidratazione orale. Più gravi malattie possono essere trattati con antibiotici come la tetraciclina o ciprofloxacina 10. tasso di mortalità è circa il 2% per i casi di gastroenterite, ma può essere alto come il 29% per coloro che sviluppano infezione sangue o setticemia. Qualsiasi persona che consuma frutti di mare o ha ferita aperta esposta all&#39;acqua di mare è a rischio di V. infezione parahaemolyticus. La forma più grave di malattie, la setticemia pericolosa per la vita, è più comune in una sottopopolazione con sottostante co medicalli operativi 11, che includono l&#39;alcolismo, malattie del fegato, diabete, malattie renali, tumori maligni, e le altre condizioni che portano ad una risposta immunitario indebolito. In particolare, questo gruppo di individui è anche ad un elevato rischio di contrarre gravi malattie causate da V. vulnificus, che si trova in habitat naturali simili a V. parahaemolyticus. V. parahaemolyticus è abitualmente isolato usando tiosolfato-citrato-biliari sali-saccarosio (TCBS) agar come un terreno selettivo e differenziale. Arricchimento in acqua peptonata alcalina può precedere isolamento su TCBS agar. presunte colonie su TCBS sono poi ulteriormente testati in una serie di test biochimici e / o saggi molecolari mirati la presenza di geni specie-specifici. Metodi basati sulla PCR sono spesso usati per confermare l&#39;identità di V. parahaemolyticus amplificando il gene emolisina termolabile, tlh 12. Indipendentemente dal choice dei metodi di conferma, è importante disporre di un mezzo efficace per isolare e differenziare V. parahaemolyticus da altri vibrioni marini, in primo luogo. TCBS è stato solitamente usata per differenziare le specie all&#39;interno del genere Vibrio secondo le loro capacità di fermentare il saccarosio 12. Reazione di fermentazione positiva è accompagnato da un cambiamento di colore dell&#39;indicatore pH bromotimolo blu. V. colonie parahaemolyticus sono abbastanza distintivo TCBS, esibendo blu al colore verde. Tuttavia, questo mezzo non può facilmente distinguere V. alginolyticus e V. cholerae. Proteus saccarosio-fermentazione possono produrre colonie gialle simili a V. cholerae o V. alginolyticus 13. Su isolamento iniziale TCBS, V. parahaemolyticus può anche essere erroneamente identificato come Aeromonas hydrophila, shigelloides Plesiomonas, e Pseudomonas spp 14. Ceppi con ferm saccarosio in ritardosentazione può essere confusa con altri saccarosio nonfermenting Vibrio 13, che comprendono V. parahaemolyticus. TCBS è risultato essere non sensibili contro Escherichia coli, putrefaciens Pseudomonas, tra gli altri. Diverse altre specie cedono verde di colonie grigie, che sono potenzialmente confondibili con V. parahaemolyticus o V. vulnificus 15. Di conseguenza, è desiderabile sviluppare mezzi di cultura alternativa con una migliore sensibilità e specificità verso individuare e isolare V. parahaemolyticus e di altre specie strettamente correlate. Diverse alternative dei media sono stati recentemente sviluppati. Inoltre l&#39;inclusione di agenti selettivi, più incorporano substrati cromogeni per differenziare le specie in base alle loro attività enzimatiche differenziali. Ad esempio, indoxyl-β-glucoside e indoxyl-β-galattoside sono stati utilizzati come substrati cromogeni differenziare V. paràcolonie haemolyticus (che appaiono blu-verde) da quelle di V. cholerae (viola) a causa della loro capacità di produrre differenziali β-glucosidasi e β-galattosidasi 16. Diverse formulazioni di cromogenico agar sviluppate da diversi gruppi sono stati valutati e sono stati segnalati per eseguire paragonabile o superiore a quella TCBS 17,18,19. Un vantaggio di utilizzare un terreno cromogeno è che la colorazione del mezzo circostante è minimo facilitando così l&#39;isolamento di colonie particolari. In questo studio abbiamo valutato la capacità di un terreno cromogeno nuova formulazione per rilevare ed isolare V. cholerae, V. parahaemolyticus e V. vulnificus; con un focus particolare sulla sua capacità di differenziare V. parahaemolyticus da altre specie.

<table><tbody><tr><td>Reagent/Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0140-15-4</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BHI powder</td><td>Fisher</td><td>Scientific DF0418-17-7</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Blender</td><td>Any</td><td></td><td>per frullare la carne di ostrica</td></tr><tr><td>Gas CampyGen generatore</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>CN035A</td><td>per fornire un'atmosfera microaerofilica; può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Piastre per agar al cioccolato</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>E14</td><td>può utilizzare reagenti</td></tr><tr><td>PCR di altre marche comuni (dNTP, MgCl2, Taq Polimerasi)</td><td>Qualsiasi</td><td></td><td>o utilizzare perle PCR (Fisher Sci 46-001-014)</td></tr><tr><td>Provette per coltura</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50712</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>di provette Eppendorf</td><td>Fisher Scientific</td><td>S348903</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Gel doc</td><td>Qualsiasi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HardyChrom Vibrio piastre di agar</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>G319</td><td>Questo studio valuta questo mezzo</td></tr><tr><td>Incubatrice</td><td>Qualsiasi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ansa di inoculazione</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-606</td><td>In questo studio è stato utilizzato il formato da 10 microlitri</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Ostriche</td><td>Qualsiasi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>R23701</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Piastra di Petri</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Pipetta e puntali</td><td>Qualsiasi</td><td></td><td>puntale sterilizzato</td></tr><tr><td>Primer per tlh</td><td>IDT Scala del DNA</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Qualsiasi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>spalmatore</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-100-11</td><td>Le perline possono essere utilizzate al loro posto</td></tr><tr><td>Frullatore Stomacher</td><td></td><td>400</td><td>I campioni sono stati omogeneizzati a 200 giri/min per 30 sec.&nbsp; È possibile utilizzare altri omogeneizzatori.</td></tr><tr><td>Sacchetti filtro sterili per frullatori</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-5</td><td></td></tr><tr><td>TCBS polvere</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>265020</td><td>Questo studio valuta questo mezzo</td></tr><tr><td>Termociclatore</td><td>Qualsiasi</td> TSB in polvere Fisher <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Scientific</td><td>DF0370-07-5</td><td>può utilizzare altre marche</td></tr><tr><td>Cabina di visualizzazione UV</td><td>Qualsiasi</td><td></td><td>Emettere luce</td></tr> <tr>UV a onde lunghe<td>Bagno d'acqua</td><td>Qualsiasi</td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Name</td><td>Sources</td><td>Numero di catalogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Specie e ceppi batterici</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aeromonas hydrophila</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Candida albicans</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Campylobacter jejuni</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Proteus mirabilis</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Pseudomonas aeruginosa</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Salmonella Choleraesuis</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella boydii</td><td>ATCC</td>Shigella flexneri<<td></td><td></td></tr><tr><td>/em></td><td>ATCC</td><td></td><td></td><</tr>em<tr><td>>Shigella sonnei</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Vibrio alginolyticus</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. cholerae (i sierotipi includono O139, O1, non O1, El Tor biovars)</td><td>FDA, ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>V. damsela</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. fisheri</td><td>Environment</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. fluvialis</td><td>CDC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. furnissii </td><td>CDC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. hollisae</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. metschnikovii</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>V. mimicus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. parahaemolyticus (i sierotipi includono O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8, ecc.)</td><td>ATCC, FDA, CDC, Ambiente</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. proteolyticus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. vulnificus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sviluppo di un più sensibile e specifica chromogenic agar media per la rilevazione di<em&gt; parahaemolyticus vibrio</em&gt; e altro<em&gt; vibrio</em&gt; specie

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Infezioni di origine alimentare negli Stati Uniti causata da specie Vibrio hanno mostrato una tendenza al rialzo. Nel genere Vibrio, V. parahaemolyticus è responsabile per la maggior parte delle infezioni -associated Vibrio. Così, la differenziazione precisa tra Vibrio spp. e rilevazione di V. parahaemolyticus è di fondamentale importanza per garantire la sicurezza del nostro approvvigionamento alimentare. Sebbene le tecniche molecolari sono sempre più comuni, i metodi di coltura-base sono ancora regolarmente fatte e sono considerati metodi standard in determinate circostanze. Pertanto, un nuovo mezzo agar cromogeno è stato testato con l&#39;obiettivo di fornire un metodo migliore per l&#39;isolamento e la differenziazione di clinicamente rilevante spp Vibrio. Il protocollo rispetto al limite di sensibilità, specificità e rilevamento per il rilevamento di V. parahaemolyticus tra il nuovo terreno cromogeno e un mezzo convenzionale. Vari V. ceppi parahaemolyticus (n = 22) ripresentando diversi sierotipi e fonte di origine sono stati utilizzati. Essi sono stati precedentemente individuati dalla Food and Drug Administration (FDA) e Centri per il Controllo e la Prevenzione delle Malattie (CDC), e ulteriormente verificati nel nostro laboratorio da tlh -PCR. In almeno quattro prove separate, questi ceppi sono stati inoculati sui cromogenici agar e tiosolfato-citrato-biliari sali-saccarosio (TCBS) agar, che è il mezzo consigliato per la coltura di questa specie, seguita da incubazione a 35-37 ° C per 24 -96 ore. Tre V. ceppi parahaemolyticus (13,6%) non sono cresciuti in modo ottimale su TCBS, comunque esposti colonie verdi se non ci fosse la crescita. Due ceppi (9,1%) non ha dato i colonie ciano attesi sul agar cromogenico. V. non- ceppi parahaemolyticus (n = 32) sono stati testati per determinare la specificità del agar cromogenico. Tra questi ceppi, 31 non sono cresciuti o esposte altre morfologie di colonia. Il recupero medio di V. parahaemolyticus sul chromogenic agar era ~ 96,4% rispetto al agar soia trittico integrato con il 2% di NaCl. In conclusione, il nuovo agar cromogeno è un mezzo efficace per rilevare V. parahaemolyticus e per differenziarlo da altri vibrioni.

In questo studio, 54 ceppi microbici sono stati assemblati, che comprendeva 22 ceppi all&#39;interno V. Specie parahaemolyticus, altre 19 specie Vibrio, e 13 specie Vibrio non (Tabella 1). La maggior parte V. ceppi parahaemolyticus erano o ricevute da parte della FDA, CDC o altri dipartimenti sanitari statali. Essi rappresentano diversi sierotipi e fonti di isolamento. Questi ceppi sono stati precedentemente identific...

Il rilevamento e l'isolamento di specie di Vibrio clinicamente rilevanti richiedono terreni di coltura selettivi e differenziali. Questo studio ha valutato la capacità di un nuovo mezzo cromogenico di rilevare e identificare V. parahaemolyticus e altre specie correlate. Il nuovo mezzo è risultato avere una migliore sensibilità e specificità rispetto al mezzo convenzionale.

Sviluppo di un più sensibile e specifica Chromogenic Agar Media per la rilevazione di<em&gt; Parahaemolyticus Vibrio</em&gt; E Altro<em&gt; Vibrio</em&gt; Specie

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

L'obiettivo generale di questa procedura è valutare la sensibilità e la specificità di un nuovo mezzo cromogeno per la capacità di rilevare e isolare Vibrio parahaemolyticus rispetto ai mezzi convenzionali. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della microbiologia alimentare e ambientale, ad esempio qual è la prevalenza delle specie di Vibrio negli alimenti e negli ambienti di raccolta? Il principale vantaggio della nostra procedura è che possono essere utilizzati molti isolati batterici, anche in presenza di una matrice alimentare.Prima di coltivare i batteri, sterilizzare in autoclave tutti i mezzi solidi contenenti agar. Successivamente, raffreddare l'agar a 45-50 gradi Celsius in un bagno termico. Quando l'agar è pronto, disporre le piastre di Petri vuote in pile di cinque-sei piastre.Quindi, partendo dal fondo della pila, versare l'agar fuso in ogni piastra fino a riempirla per circa metà, sostituendo i coperchi dopo il travaso. Lasciare solidificare l'agar a temperatura ambiente per almeno 12 ore. Per preparare le colture dei ceppi microbici, quando l'agar è pronto, utilizzare un’ansa inoculante sterile per trasferire le colture sulle appropriate piastre di agar non selettivo, seminando i batteri con un tracciato che permetta l'osservazione di colonie isolate.Dopo aver seminato tutte le colonie, incubare le colture capovolte a 35-37 gradi Celsius per un massimo di 48 ore, tranne per le specie di Campylobacter, che devono essere incubate in un barattolo con coperchio chiuso contenente una bustina gassosa per creare un ambiente microaerofilo. Osservare la morfologia delle colonie al termine dell'incubazione. Colture pure dovrebbero produrre colonie che mostrano una morfologia simile.Per far crescere le colonie di interesse su terreni selettivi e differenziali, trasferire alcune colonie isolate in cinque millilitri di brodo appropriato e reincubare le colture a 35-37 gradi Celsius per 16-24 ore. Il giorno successivo, effettuare un’isolazione con un’ansa delle colture ottenute dopo la notte su almeno una piastra di agar TCBS (Thiosulfate-Citrate-Bile-Salts-Sucrose) e su almeno una piastra di agar cromogenico, incubando fino a 96 ore a 35-37 gradi Celsius. Al termine dell'incubazione, esaminare sia la densità della coltura sulla piastra sia le dimensioni delle colonie isolate per determinare la crescita complessiva dei ceppi, registrando il colore delle colonie alla luce ambiente o UV, secondo necessità, e annotando ogni altra caratteristica importante delle colonie.Per eseguire un saggio di recupero, inoculare colture giovani di Vibrio parahaemolyticus in cinque millilitri di brodo tripticaso-soia, integrato con il due percento di cloruro di sodio, o TSBS, e collocare le provette a 35-37 gradi Celsius per 16-24 ore. Il giorno successivo, vortexare le colture da incubazione notturna e preparare diluizioni da uno per 10 alla meno uno a uno per 10 alla meno sette del batterio in PBS. Utilizzando le diluizioni da uno per 10 alla meno quattro a uno per 10 alla meno sette, distribuire uniformemente 100 microlitri di ciascuna diluizione su piastre singole di agar cromogenico, TCBS e agar tripticaso-soia integrato con il due percento di cloruro di sodio, o TSAS.Incubare tutte le piastre a 35-37 gradi Celsius per un massimo di 96 ore. Quindi contare le colonie, ignorando le piastre con colonie troppe numerose per essere contate o contenenti meno di 25 colonie. Per eseguire un saggio di competizione, selezionare una ceppo di V. Parahaemolyticus che produce le colonie turchesi previste su TCBS e colonie ciano su agar cromogenico, e un non-V.Specie di Parahaemolytius che non cresce su nessuno dei due terreni oppure presenta un colore diverso delle colonie. Trasferire alcune colonie isolate di V. Parahaemolyticus e V. Metschnikovii da un'agare TSAS in cinque millilitri di TSBS per un'incubazione di 16-24 ore a 35-37 gradi Celsius. Trasferire alcune colonie isolate di Shigella sonnei da agar Brain Heart Infusion, o BHI, in cinque millilitri di brodo BHI per 16-24 ore a 35-37 gradi Celsius.Il giorno successivo, effettuare una diluizione seriale per ciascun ceppo, seminando le diluizioni su piastre di agar non selettivo per determinare le unità formanti colonie per millilitro delle colture notturne. Successivamente, utilizzare le colture notturne e i tubi di diluizione per miscelare diversi volumi di un ceppo di V. parahaemolyticus e di una specie non V. parahaemolyticus e distribuire 100 microlitri della miscela batterica su piastre di agar cromogenico, TCBS e TSAS singole.Dopo un massimo di 96 ore a 35-37 gradi Celsius, contare le colonie in base alle differenze nella crescita e nella morfologia sulle piastre cromogeniche e TCBS. Per valutare gli effetti degli omogeneizzati di ostrica sulla crescita batterica su terreni selettivi e differenziali, pesare innanzitutto almeno 50 grammi di polpa di ostrica proveniente da almeno 12 molluschi, inclusa la polpa e il liquido. Successivamente, aggiungere una massa equivalente di PBS ai tessuti di ostrica e omogeneizzare la miscela ad alta velocità per 90 secondi.Successivamente, aggiungere 100 grammi dell'omogenato di ostrica diluito a 400 grammi di PBS e omogeneizzare la miscela ad alta velocità per un minuto. Quindi, sterilizzare l'omogenato in autoclave. Dopo il raffreddamento, aggiungere 100 microlitri di ciascun ceppo di V. Parahaemolyticus e non-V. coltivati per 18-24 ore.Aggiungere la coltura di Parahaemolyticus alla sospensione di ostrica e utilizzare un omogeneizzatore per mescolare le cellule batteriche con l'omogenato di ostrica. Preparare diluizioni da una volta 10 alla meno uno a una volta 10 alla meno tre dell'omogenato di ostrica contaminato in PBS come illustrato, distribuendo 100 microlitri di ciascuna diluizione su piastre singole di agar cromogenico, TCBS e TSAS. Dopo 96 ore a 35-37 gradi Celsius, confrontare i conteggi effettivi delle colonie sui gel di agar cromogenico e TCBS con i conteggi attesi dedotti dal conteggio standard delle piastre effettuato sulle colture notturne.Per determinare la crescita e la morfologia delle colonie dei ceppi utilizzati in questo studio, i batteri sono stati coltivati su terreni selettivi e differenziali. Il TCBS è il mezzo convenzionale utilizzato per l'isolamento di alcune specie di Vibrio, tra cui il Vibrio parahaemolyticus di colore turchese e il Vibrio cholerae giallo. L'uso di un mezzo cromogenico per selezionare specie di Vibrio clinicamente rilevanti da campioni alimentari e ambientali porta alla formazione di colonie di Vibrio parahaemolyticus di colore ciano e di Vibrio cholerae di colore magenta.Le colonie di V.Parahaemolyticus cresciute su piastre di agar cromogeno in presenza di omogeneizzato di ostrica sono osservate in numeri simili a quelle su mezzi non selettivi, suggerendo che il limite di rilevamento del mezzo cromogeno è paragonabile a quello dei mezzi non selettivi, anche in presenza di una matrice alimentare. Inoltre, la crescita e il recupero di V.Parahaemolyticus non sono influenzati dalla presenza di una specie non appartenente a V. Parahaemolyticus, un attributo essenziale per i mezzi differenziali e selettivi, poiché i campioni ambientali contengono diverse specie di Vibrio in elevato numero, specialmente dopo una procedura di arricchimento.Inoltre, il confronto tra agar TCBS e agar cromogenici mediante PCR per l'emolisina termolabile rivela una maggiore sensibilità e specificità dell'agar cromogenico, indicando una prestazione complessivamente migliore di questo mezzo differenziale e selettivo per il rilevamento e l'identificazione di V. parahaemolyticus. Una volta acquisita padronanza, l'intero procedimento, compresi i tempi di analisi e di incubazione di circa 50 ceppi, può essere completato entro 30 giorni se eseguito correttamente. Durante l'esecuzione di questo procedimento, è fondamentale ricordare di etichettare scrupolosamente tutte le colture e di utilizzare sempre una tecnica asettica.Al termine di questa procedura, possono essere eseguiti altri metodi come la PCR su colonia per rispondere a ulteriori domande, ad esempio: Questo isolato specifico possiede un gene di virulenza? Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della sicurezza alimentare e della salute pubblica per studiare il rilevamento di specie di Vibrio nei molluschi e nell'ambiente estuariale. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come eseguire un conteggio standard su piastra e di come valutare la sensibilità, la specificità e il limite di rilevamento di un mezzo di coltura.Ricordare che lavorare con agenti patogeni e mezzo caldo può essere estremamente pericoloso, e precauzioni come indossare indumenti protettivi, coprire eventuali ferite aperte e separare i rifiuti biologicamente pericolosi devono essere sempre adottate durante l'esecuzione di questa procedura.

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Abbiamo recentemente riportato un nuovo approccio per generare sonde DNAzyme fluorogenici che possono essere applicati per impostare un semplice, "mix-e-leggere" test di fluorescenza per la rilevazione batterica. Queste sonde di DNA specifiche catalizzare il clivaggio di un cromoforo-modificato DNA-RNA chimerico substrato in presenza della miscela grezza extracellulare (CEM) prodotta da un batterio specifico, così traducendo rilevamento batterica nella generazione del segnale di fluorescenza.

Rilevazione di batteri utilizzando DNAzimi fluorogenici

Fonte: Heering, J., et al. Induzione del differenziamento cellulare e imaging di singole cellule di Vibrio parahaemolyticus Swimmer e Swarmer. J. Vis. Exp. (2017)Questo video dimostra l'induzione della differenziazione delle cellule swarmer in Vibrio parahaemolyticus utilizzando un terreno di agar appositamente preparato. Manipolando i segnali ambientali come l'esaurimento del ferro, l'integrazione di calcio e il contatto con la superficie, i batteri sono stimolati a passare dalla loro forma di...

Induzione del differenziamento di Vibrio parahaemolyticus in cellule Swarmer

Fonte: Heering, J., et al., Induzione della differenziazione cellulare e imaging di singole cellule di Vibrio parahaemolyticus Swimmer e Swarmer. J. Vis. Exp. (2017).Questo video mostra la preparazione di cellule swarmer da una colonia di Vibrio parahaemolyticus per l'imaging a fluorescenza. I batteri sono geneticamente modificati per esprimere una proteina marcata con fluorofori che si localizza unipolarmente nelle cellule nuotatrici e bipolarmente nelle cellule a sciame allungate, consentendo...

Preparazione delle cellule Swarmer di Vibrio parahaemolyticus per l'imaging

Fonte: Yeung, M., et al. Sviluppo di un terreno cromogenico agar più sensibile e specifico per la rilevazione di Vibrio parahaemolyticus e di altre specie di Vibrio . J. Vis. Exp. (2016)Questo video mostra un metodo basato sulla coltura per identificare le specie di Vibrio , evidenziando l'agar cromogenico come un'alternativa più accurata all'agar comunemente usato tiosolfato-citrato-sali biliari-saccarosio o TCBS. L'agar cromogenico fornisce una differenziazione superiore dei ceppi di Vibrio...

Un nuovo mezzo cromogenico per la rilevazione rapida delle specie di vibrioni

Fonte: Brumfield, K. D., et al., Tecniche di laboratorio utilizzate per mantenere e differenziare i biotipi degli isolati clinici e ambientali di Vibrio cholerae . J. Vis. Esp. (2017).Questo video dimostra il test Voges-Proskauer (VP) per differenziare tra tre biotipi di Vibrio cholerae: classico, tipo selvatico El Tor e variante El Tor. Ogni coltura viene inoculata in un mezzo contenente glucosio, incubata e trattata con α-naftolo e idrossido di potassio per rilevare la presenza di acetoina.

Saggio Voges-Proskauer per la differenziazione dei biotipi di Vibrio cholerae

Viene presentato qui un protocollo che coinvolge la concentrazione integrata, l'arricchimento e il rilevamento colorimetrico end-point di agenti patogeni di origine alimentare in grandi volumi di acqua agricola.  L'acqua viene filtrata attraverso tamponi di Moore modificati (MMS), arricchiti con terreni selettivi o non selettivi, e il rilevamento viene eseguito utilizzando dispositivi analitici a base di carta (μPAD) incorporati con substrati colorimetrici indicativi dei batteri.

Colorimetrico carta a base di rilevamento di<em&gt; Escherichia coli</em&gt;,<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp., E<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Da grandi volumi di acqua agricolo

Questo manoscritto descrive le appropriate tecniche di manutenzione Vibrio cholerae oltre ad una serie di dosaggi biochimici, utilizzati collettivamente per una differenziazione rapida e affidabile tra la clinica e l'ambiente V. Biotipi di colera in un ambiente di laboratorio.

Tecniche di laboratorio utilizzate per mantenere e differenziare i biotipi di<em&gt; Vibrio cholerae</em&gt; Isolati clinici ed ambientali

Questo protocollo consente la microscopia a cellule singole del nuotatore diverso Vibrio parahaemolyticus e delle cellule swarmer. Il metodo produce una popolazione di cellule swarmer facilmente accessibili per l'analisi delle cellule singole e copre la preparazione delle colture cellulari, l'induzione della differenziazione swarmer, la preparazione del campione e l'analisi delle immagini.

Induzione della differenziazione cellulare e dell&#39;immagine delle cellule singole di<em&gt; Vibrio parahaemolyticus</em&gt; Nuotatore e cellule Swarmer

Un protocollo per lo sviluppo di un biosensore elettrochimico di DNA che comprende un elettrodo di carbonio nanoparticelle-modificato, serigrafata, acido-stabilizzato, oro polilattico per rilevare il vibrione paraemolitico è presentato.

Sviluppo di un biosensore elettrochimico del DNA per rilevare un patogeni di origine alimentare

Qui introduciamo il principio, la struttura e le istruzioni del sistema intelligente di test di sensibilità antimicrobica/screening fagico ad alto rendimento. La sua applicazione è illustrata utilizzando come esempio la Salmonella isolata dal pollame nello Shandong, in Cina. Viene calcolato l'indice di Lar e viene discusso in modo esaustivo la sua importanza nella valutazione della resistenza antimicrobica.

Applicazione del sistema intelligente di test di sensibilità antimicrobica/screening fagico ad alto rendimento e dell'indice Lar di resistenza antimicrobica

Scopri un nuovo mezzo cromogenico per rilevare Vibrio parahaemolyticus con maggiore sensibilità e specificità rispetto ai metodi convenzionali. Questa tecnica avanzata migliora la sicurezza alimentare e il monitoraggio microbiologico ambientale.

Sviluppo di un più sensibile e specifica Chromogenic Agar Media per la rilevazione di Parahaemolyticus Vibrio E Altro Vibrio Specie (Video) | JoVE Journal

Sviluppo di un più sensibile e specifica Chromogenic Agar Media per la rilevazione di

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