Name: Modificato vetrificazione MicroSecure: Un altamente Procedura Crioconservazione sicuro ed efficace, semplice e per blastocisti umane (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Scopri la vetrificazione MicroSecure per la crioconservazione sicura di blastocisti umane. Questo metodo semplice ed efficace elimina le variazioni tecniche tra biologi e laboratori, garantendo successi riproducibili.

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MC Schiewe desidera ringraziare il Sig Foresta Garner al Fertility Center di Las Vegas per la sua competenza statistici per l&#39;analisi e la valutazione dei dati annuali CDC e di Sart. Inoltre, gli autori desiderano ringraziare il loro direttore medico, il Dr. Robert E. Anderson, per il suo supporto dedicato e la fede nelle nostre capacità tecniche e competenze.

<ol><li>Edgar, D. H., Gook, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+appraisal+of+cryopreservation+%28slow+cooling+versus+vitrification%29+of+human+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">A critical appraisal of cryopreservation (slow cooling versus vitrification) of human oocytes and embryos.</a> Hum. Reprod. Update. 16, 536-554 (2012).</li>
<li>Schiewe, M. C., Whitney, J. B., Anderson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+risk+of+monochorionic+dizygotic+twin+blastocyst+formation+associated+with+early+laser+zona+dissection+of+group+cultured+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Potential risk of monochorionic dizygotic twin blastocyst formation associated with early laser zona dissection of group cultured embryos.</a> Fertil. Steril. 103, 417-421 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/301673333_The_Historic_Development_and_Incorporation_of_Four_Assisted_Reproductive_Technologies_Shaping_Today's_IVF_Industry">The historic development and incorporation of four assisted reproductive technologies shaping today's IVF industry.</a> J. Fertil. In Vitro Reprod. Med. Genet. 4, 2-9 (2016).</li>
<li>Rall, W. F., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ice-free+cryopreservation+of+mouse+embryos+at+-196+degrees+C+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ice-free cryopreservation of mouse embryos at -196 degrees C by vitrification.</a> Nature. 313, 573-575 (1985).</li>
<li>Rall, W. F., Wood, M. J., Kirby, C., Whittingham, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Fertil%22%5BJournal%5D)">Development of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> J. Reprod. Fertil. 80, 499-504 (1987).</li>
<li>Schiewe, M. C., Rall, W. F., Stuart, L. D., Wildt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cryoprotectant%2C+cooling+rate+and+in+situ+straw+dilution+using+conventional+freezing+or+vitrification+for+cryopreserving+sheep+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Analysis of cryoprotectant, cooling rate and in situ straw dilution using conventional freezing or vitrification for cryopreserving sheep embryos.</a> Theriogenology. 36, 279-293 (1991).</li>
<li>Lane, M., Schoolcraft, W. B., Gardner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitrification+of+mouse+and+human+blastocysts+using+a+novel+cryoloop+container-less+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil.+Steril%22%5BJournal%5D)">Vitrification of mouse and human blastocysts using a novel cryoloop container-less technique.</a> Fertil. Steril. 72, 1073-1078 (1999).</li>
<li>Mukaida, T., Oka, C., Goto, T., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+shrinkage+of+blastocoeles+using+either+a+micro-needle+or+a+laser+pulse+prior+to+the+cooling+steps+of+vitrification+improves+survival+rate+and+pregnancy+outcome+of+vitrified+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Artificial shrinkage of blastocoeles using either a micro-needle or a laser pulse prior to the cooling steps of vitrification improves survival rate and pregnancy outcome of vitrified human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 21, 3246-3252 (2006).</li>
<li>Kuwayama, M., Vatja, G., Ieda, S., Kato, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+open+and+closed+methods+for+vitrification+of+human+embryos+and+elimination+of+potential+contamination%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Comparison of open and closed methods for vitrification of human embryos and elimination of potential contamination.</a> Reprod. Biomed. Online. 11, 608-614 (2005).</li>
<li>Vanderzwalmen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Births+after+vitrification+at+morula+and+blastocyst+stages%3A+effect+of+artificial+reduction+of+the+blastocoelic+cavity+before+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification.</a> Hum. Reprod. 17, 744-751 (2002).</li>
<li>Schiewe, M. C. Quality control factors influencing the successful and reliable implementation of oocyte and embryo vitrification. <a target="_blank" href="http://www.intechopen.com/books/cryopreservation-in-eukaryotes/quality-control-factors-influencing-the-successful-and-reliable-implementation-of-oocyte-and-embryo-">Cryopreservation</a>. Marco-Jiménez, F., AkdemirKoç, H. , 1st Ed, InTech. Rijeka, Croatia. (2016).</li>
<li>Stachecki, J. J., Garrisi, J., Sabino, S., Caetano, J. P. J., Wiemer, K., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+safe%2C+simple%2C+and+successful+vitrification+method+for+bovine+and+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">A new safe, simple, and successful vitrification method for bovine and human blastocysts.</a> Reprod. Biomed. Online. 17, 360-367 (2008).</li>
<li>Panagiotidis, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+vitrification+of+blastocysts+from+an+oocyte-donation+programme%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed vitrification of blastocysts from an oocyte-donation programme: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 470-476 (2013).</li>
<li>Papatheodorou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open+versus+closed+oocyte+vitrification+system%3A+a+prospective+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biomed.+Online%22%5BJournal%5D)">Open versus closed oocyte vitrification system: a prospective randomized study.</a> Reprod. Biomed. Online. 26, 595-602 (2013).</li>
<li>Schiewe, M. C., Zozula, S., Anderson, R. E., Fahy, G. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Validation+of+microSecure+vitrification+(%26%23181%3BS-VTF)+for+the+effective+cryopreservation+of+human+embryos+and+oocytes">Validation of microSecure vitrification (µS-VTF) for the effective cryopreservation of human embryos and oocytes.</a> Cryobiology. 71, 264-272 (2015).</li>
<li>Schiewe, M. C. MicroSecure vitrification for oocytes and embryos: optimum simplicity, security and cost and effectiveness combining FDA-approved products. J. Clin. Embryol. 13, 33-51 (2010).</li>
<li>Rall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+survival+of+mouse+embryos+cryopreserved+by+vitrification%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the survival of mouse embryos cryopreserved by vitrification.</a> Cryobiology. 24, 387-402 (1987).</li>
<li>Seki, S., Mazur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+warming+rate+on+the+survival+of+vitrified+mouse+oocytes+and+on+the+recrystallization+of+intracellular+ice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of warming rate on the survival of vitrified mouse oocytes and on the recrystallization of intracellular ice.</a> Biol. Reprod. 79, 727-737 (2008).</li>
<li>Schiewe, M. C. General hygiene and quality control practices in an embryo-production laboratory. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchiewe%2C+MC+%22Manual+of+the+International+Embryo+Transfer+Society%3A+A+Procedural+Guide+and+General+Information+for+the+Use+of+Embryo+Transfer+Technology%2C+Emphasizing+Sanitary+Precautions%22">Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the Use of Embryo Transfer Technology, Emphasizing Sanitary Precautions</a>. Stringfellow, D. A., Givens, D. , 3rd Ed, International Embryo Transfer Society. Champaign, IL. (2008).</li>
<li>Whitney, J. B., Nugent, N. L., Anderson, R. E., Schiewe, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+center+validation+of+routine+blastocyst+biopsy+implementation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Asst.+Reprod.+Genet%22%5BJournal%5D)">Single center validation of routine blastocyst biopsy implementation.</a> J. Asst. Reprod. Genet. , (2016).</li>
<li>Liebermann, L., Conaghan, J. <a target="_blank" href="http://embryologists.com/jce161-artificial-collapse-prior-blastocyst-vitrification/">Artificial collapse prior blastocyst vitrification: improvement of clinical outcomes.</a> J. Clin. Embryol. 16, 107-118 (2014).</li>
<li>Parmegiani, L., Tatone, C., Cognigni, G. E., Bernardi, S., Troilo, E., Arnone, A., Maccarini, A. M., Di Emidio, G., Vitti, M., Filicori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+warming+increases+survival+of+slow-frozen+sibling+oocytes%3A+a+step+towards+a+single+warming+procedure+irrespective+of+the+freezing+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biomed+Online%22%5BJournal%5D)">Rapid warming increases survival of slow-frozen sibling oocytes: a step towards a single warming procedure irrespective of the freezing protocol.</a> Reprod Biomed Online. , (2014).</li>
</ol>

MC Schiewe serve come membro del comitato scientifico di Cryo innovative imprese e come direttore tecnico per la California Cryobank. La produzione di questo video-articolo è stato pagato da Ovation fertilità. Gli autori non hanno accordi finanziari concorrenti o conflitti di interesse di rivelare quanto riguarda la vetrificazione dei gameti e degli embrioni.

Oggi, vi è un&#39;alta aspettativa di raggiungere sopravvivenza blastocisti completa (&gt; 95%) e raggiungere il successo impianto simile a quello di embrioni freschi. Alcuni gruppi hanno suggerito che i tassi di natalità live di cicli di trasferimento di embrioni vetrificati sono forse addirittura superiore blastocisti fresche quando l&#39;embrione crioconservato intatto viene trapiantato in un sano utero, non ormonale-stimolata. I nostri dati indicano chiaramente che la vetrificazione in modo efficace e affidabile mantiene la vitalità dell&#39;embrione fresco. Inoltre, abbiamo dimostrato che il nostro asettica, metodo chiuso, chiamato MicroSecure vitrificazione (mS-VTF), può raggiungere un risultato ottimale paragonabile o superiore alle norme commerciali (ad esempio, sistemi di dispositivi aperti) utilizzati nell&#39;industria FIV. Variazione è associato con ripetibilità tecnica e affidabilità tra individui che utilizzano una moltitudine di vitrificazione dispositivi / metodi. A sua volta, questo ha portato a inconsistencies tra i programmi che applicano vetrificazione. Pertanto, non è sorprendente che il dispositivo di familiarità è un fattore importante per quanto riguarda competenza del laboratorio e risultati di successo. E &#39;questo concetto di &quot;firma tecnica&quot; 11 che spiega il motivo per cui la ripetibilità tra i programmi può essere problematico. Non solo ha lo sviluppo di più di una dozzina di dispositivi commerciali complicato questo fenomeno, ha creato problemi di controllo della qualità. Fortunatamente, chiuso sistemi di vetrificazione, come mS-VTF, Rapid-I, e VitriSafe, sono ora dimostrando di essere ugualmente efficace per aprire i sistemi di dispositivo 12, 13, 14. MicroSecure VTF è un romanzo, tecnica di vitrificazione asettica sviluppata con facilità tecnica, affidabilità e crio-sicurezza in mente. Combinando l&#39;uso di due dispositivi, conformi FDA precedentemente approvati, è un sistema di vetrificazione non commerciale with il vantaggio di avere un basso costo stabilita, in contrasto con dispositivi specializzati. Inoltre, la sua prova di manomissione unico e sistema di etichettatura a due colori interiorizzato, oltre a numerosi altri vantaggi di controllo della qualità, hanno fatto mS-VTF un&#39;opzione globale attraente 11. Come dispositivo VTF non commerciale, tuttavia, la sua applicazione industriale diffusa si sta evolvendo lentamente. Solo attraverso la continua pubblicazione della sua sicurezza, la sicurezza e l&#39;efficacia clinica guadagnerà mS-VTF crescente utilizzo. Nel mese di agosto 2014, di fronte alla impossibilità di acquisire l&#39;originale embrione paglia 0,3 mL fabbricato con una, non traspirante spina idrofobico interno, siamo stati in grado di modificare in modo affidabile il metodo mS-VTF. In breve, i nuovi sperma 0,3 mL / cannucce embrione con le loro spine cotone-PVP sono stati efficacemente adattati. Ciò è stato semplicemente ottiene creando una tenuta interna prima che la spina cotone, impedendo così il contatto e il fluido traspirante con lapunta VTF a tempo indeterminato (cioè, il flexipette contenente l&#39;embrione o le uova). Inoltre, se aste ID 40 mm non sono accessibili, il problema galleggiamento associato con le aste più leggeri di 30 mm può essere contrappesi mediante due cuscinetti a sfere. Questi passaggi aggiuntivi hanno reso la tecnica leggermente meno semplice, ma altamente efficace. Oggi, l&#39;economia e l&#39;efficacia stanno diventando sempre più importanti preoccupazioni, come blastocisti biopsia sono tipicamente vetrificati individualmente fino a quando il suo stato euploidy è confermato in un report genetica. Blastocisti con uno stato aneuploidia non vitali confermato in genere vengono scartate, con il consenso del paziente, in poche settimane. Così, la maggior parte (&gt; 50%) di dispositivi VTF vengono scartati dopo conservazione a breve termine, causando un costo annuo crescente quando si utilizzano dispositivi commerciali. Nel complesso, mS-VTF è una procedura altamente efficace, affidabile e ripetibile per la crioconservazione delle blastocisti umane. Il controllo di qualità di progettazione securel superioreetichette Y e sicuro memorizza embrioni / ovociti eliminando mancato recupero e l&#39;ottimizzazione della sopravvivenza post-riscaldamento e la redditività, che giustifica l&#39;uso del sistema come un approccio universale alla embrione vetrificazione.

La vitrificazione è la tecnologia assistita più incisivo unico riproduttiva nel settore fecondazione in vitro (IVF) in quanto lo sviluppo di iniezione intracitoplasmatica dello spermatozoo. Oggi, blastocisti sono crioconservati senza la perdita di vitalità degli embrioni precedentemente associati ai tradizionali metodi lento congelamento 1. Con affidabile di post-riscaldamento embrione di sopravvivenza, l&#39;industria infertilità sta trasformando in uso preferenziale dei cicli di trasferimento di embrioni crioconservati, che danno esiti della gravidanza simili o superiori rispetto trasferimento tradizionale embrioni freschi. In collaborazione con blastocisti biopsia e screening genetico preimpianto (PGS), vetrificazione è diventato uno strumento di vitale importanza clinica per ottimizzare sani nascita risultati in tempo reale tramite euploid singolo trasferimento di embrioni 2, 3. Murino vetrificazione degli embrioni è stato sviluppato a metà degli anni 1980 4, </sup&gt; 5 e adattato agricoltura animale entro il 1990 6. Sulla base della premessa che le soluzioni di vetrificazione formano uno stato glasseous metastabile, senza danneggiare la formazione di cristalli di ghiaccio, si è dimostrato di preservare più efficacemente l&#39;integrità cellulare completa di embrioni. È interessante notare che l&#39;accettazione promettente di vetrificazione in embriologia umana non ha cominciato a realizzarsi fino al 21 ° secolo. I primi pubblicazioni che promuovono l&#39;uso di vetrificazione coinciso con lo sviluppo di dispositivi di sistema &quot;aperto&quot; unici 7, 8, 9. Tuttavia, l&#39;adozione di vetrificazione nella pratica clinica era lento, come è venuto in un momento miglioramenti congelamento lento blastocisti avvennero anche. Successful convenzionale lenta velocità di congelamento, oltre alla vetrificazione, sono state allineate con i miglioramenti nei sistemi di coltura dell&#39;embrione, nonché con la Incorporationi di approcci blastocele-collasso, che ha migliorato sia la sopravvivenza globale di trophectoderm e, successivamente, l&#39;impianto 10. Negli ultimi dieci anni, la tecnologia si è rapidamente soppiantato vetrificazione pratiche di congelamento convenzionali. In larga misura, ciò è dovuto allo sviluppo di dispositivi vitrificazione specializzati. Alcuni di questi dispositivi hanno ostacolato la sicurezza generale, l&#39;efficienza e l&#39;efficacia della vetrificazione clinica con l&#39;introduzione di difetti di progettazione inerenti ai dispositivi utilizzati nell&#39;industria FIV 11. Infatti, le sfumature di diversi dispositivi introducono significativa variazione tecnica tra programmi, comunemente indicato come &quot;firme tecniche&quot; 12. Così, riviste scientifiche, come il Journal of Experiments visualizzate (JoVE), può servire come una risorsa preziosa per dimostrare i dettagli tecnici, che contribuirà a ridurre le variazioni risultato. Un altro problema in corso è che some embriologi continuano ad essere male informato, ancora oggi, sulla base delle domande che il &quot;ultra-rapido raffreddamento di embrioni o ovociti in un &#39;sistema di vetrificazione aperto&#39; (vale a dire, il contatto embrione diretto con azoto liquido (LN 2)) è un prerequisito per l&#39;ottimizzazione i tassi di successo. &quot; Chiaramente, questa credenza è imprecisa, basato sul comprovato successo dei asettica sistemi 13, 14, 15 chiuse. Sulla base dei principi cryobiological di vetrificazione, l&#39;efficacia di vetrificazione è più altamente dipendente tassi di riscaldamento che su tassi 16, 17, 18 di raffreddamento. In generale, indipendente dal dispositivo vetrificazione utilizzato, il tasso di riscaldamento deve superare la velocità di raffreddamento per assicurare alti tassi di sopravvivenza. Alti tassi di riscaldamento riducono al minimo la possibilità di una crescita del ghiaccio (vale a dire, il Recrystallization di impurità nucleate in crio-soluzioni) durante la fase di devetrificazione del riscaldamento. Certo, la stabilità della soluzione vetrificazione (cioè, il tipo e la concentrazione di agenti crioprotettivi usati) può avere un effetto di confusione, ma questo viene indirizzato in una pubblicazione separata 11. Considerando i problemi di velocità di raffreddamento-riscaldamento, MicroSecure di vetrificazione (mS-VTF) è stato sviluppato nel 2008 come un metodo poco costoso, non commerciale FDA-compliant che ottimizzato gli aspetti di controllo di qualità di vetrificazione. Era unico in quanto ha offerto a prova di manomissione, interiorizzato, etichettatura dual-color. Inoltre, per il carico e memorizzare gli embrioni direttamente nella flexipette sterile utilizzato per pipettare (cioè senza pipettaggio ad una superficie periferica secondaria) e utilizzando cannucce ionomerica-resina che sigillano completamente saldato utilizzando un sigillante automatizzato, variante tecnica è stata eliminata in modo efficace. Nel valutare la completeness di dispositivi vitrificazione per l&#39;uso potenziale, ci sono diversi fattori di controllo della qualità che dovrebbero essere presi in considerazione, tra cui: 1) Etichettatura potenziali etichette -Può essere rispettate in modo sicuro? Sono a prova di manomissione? Offrono due colori potenziale di identificazione? C&#39;è bisogno di un&#39;etichetta secondaria, e può l&#39;etichetta essere facilmente rimosso per scopi di registrazione (ad esempio, il paziente verifica) post-riscaldamento? 2) facilità tecnica embrioni -Può essere facilmente caricati nel / sul dispositivo in modo tempestivo e semplicemente identificati e monitorati post-riscaldamento? 3) procedurale semplicità / ripetibilità -La il metodo di vetrificazione offerta semplicità e affidabilità che permette facilmente per la ripetibilità, che riduce al minimo la variazione tra tecnici (interni) e programmi (esterni)? 4) capacità di stoccaggio LN 2 -Può i dispositivi essere facilmente gestito e sicuro e identificato? È il loro storabbia spazio potenziale efficiente? Fa il dispositivo di sicurezza offerta e la sicurezza da danni fisici o possibili contaminanti come un sistema chiuso asettico? 5) il potenziale di recupero / resilienza -È il disegno dispositivo soggetto a potenziali problemi nel recupero garantito di embrioni, e faranno in modo affidabile vetrificare e mantenere completa integrità cellulare post-riscaldamento? Quest&#39;ultima preoccupazione specifica qualità, il tasso di recupero, è stato effettivamente sorprendentemente ridotto al minimo in rapporti pubblicati; questo viene fatto generalmente nascondendo la esito sfavorevole (cioè, embrione perso o uovo) nel tasso di sopravvivenza in genere-buoni. Qualsiasi dispositivo inclini a recupero incoerente (&lt;99%) è gravemente lacunosa e costituisce una passività procedurale. Il nostro asettica, chiuso metodo mS-VTF è stato sviluppato in modo strategico per tenere conto di ogni misura di controllo della qualità. Tuttavia, dopo 5 anni di successo clinico superiore e validazione 14, la procedura ha avuto to essere modificato. L&#39;originale cannucce embrione 0,3 mL (in possesso di una spina idrofobico) sono stati rimossi dal settore FIV e sostituiti con una cannuccia sperma 0.3 mL in possesso di un tampone di cotone / PVP standard (ad esempio, rietichettato come sperma / embrione di paglia). Questo documento procedurale vengono descritte le procedure specifiche e le strategie necessarie per attuare in modo sicuro, semplice ed efficace mS-VTF. Inoltre, si segnalano la modifica (s) necessario per tenere conto in modo affidabile per limitazioni di approvvigionamento, fino al momento in cui un contenitore di paglia ideale alternativa viene reintrodotto nel laboratorio clinico.

<table><tbody><tr><td>Canna in alluminio</td><td>IVM</td><td>XC055</td><td></td></tr><tr><td>Cuscinetti a sfera, 3/32"</td><td>VXB.com</td><td>KIT15977</td><td></td></tr><tr><td>cannuccia per sperma/embrioni CBS in acciaio inossidabile, 0,3 mL</td><td>CryoBioSystems</td><td>25292</td><td>colore sterile individuale</td></tr><tr><td>, aste ID, 30 mm</td><td>CryoBioSystems</td><td>019021-26</td> provette <td>di coltura pesate</td></tr><tr><td>, 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352099</td><td>conico</td></tr><tr><td>Provette per coltura, 10 mL</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td>Snap-cap</td></tr><tr><td>Cryosleeves</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Filtro, 250 mL</td><td>Fisher Sci.</td><td>09-740-2A</td><td>0,22 &mu; m</td></tr><tr><td>Fiasche, Coltura tissutale 50 mL</td><td>Falcon</td><td>353014</td><td></td></tr><tr><td>Flexipettes, 300 &mu; m ID</td><td>Cuoco Med.</td><td>K-FPIP-1300-10BS-5</td><td>Sterile, 20/confezione</td></tr><tr><td>Pinza, Grande</td><td>Miltex</td><td>6-30TC</td><td></td></tr><tr><td>Pinza, Scheggia - fine</td><td>Miltex</td><td>17-305</td><td></td></tr><tr><td>Calice</td><td>IVM</td><td>PA003</td><td></td></tr><tr><td>Termosigillatrice, SYMS 1</td><td>CryoBioSystems</td><td>16399</td><td>110 V o 220 V con adattatore</td></tr><tr><td>Hepes-buffered media&nbsp;</td><td>Life Global o</td><td>LGGH-100; 100&nbsp; mL, o</td><td>conservato a 2 - 8 &ordm; C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>H-HTF; 90126; 100 mL</td><td>con etichette AA non essenziali</td></tr><tr><td>, Cryo</td><td>GA International</td><td>CL-23T1</td><td>Vari colori</td></tr><tr><td>Serbatoio di azoto liquido, 40&nbsp; L</td><td>MVE o Taylor Warton</td><td>vari</td><td>depositi di liquidi&nbsp;</td></tr><tr><td>LN2; Pallone Dewar, 0,5&nbsp; L</td><td>Hampton Research</td><td>HR4-695</td><td></td></tr><tr><td>Piastre di Custer a 6 pozzetti</td> in acciaio inossidabile <td>Biogenics</td><td>015/020</td><td>in plastica per custodia</td></tr><tr><td>Pipetta a bulbo, Micro Cap</td><td>Drummond</td><td>Fisher#13681451</td><td>Foro sull'apice del bulbo</td></tr><tr><td>Piastre di Petri,</td> piastre di Petri <td>Falcon</td><td>351006</td><td></td>da 35 mm</tr>, piastre di Petri <tr><td>Nunc</td><td>150288</td><td></td><td>da 58 mm</td></tr><tr><td>, 100 mm</td><td>Falcon</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Puntali per pipette, ART lunghi</td><td>Fisher Sci.</td><td>02-707-80</td><td>10 - 100 &mu; L</td></tr><tr><td>Pipet Aid</td><td>Drummond o Falcon</td><td>vari</td><td></td></tr><tr><td>dispositivi di pipettaggio ricaricabili, Stripper</td><td>Cooper Surgical</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, sierologico 1&nbsp; mL</td><td>Falcon</td><td>357521</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes, sierologico 2&nbsp; mL</td><td>Falcon</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>Pipette, sierologico 5&nbsp; mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Pipette, sierologiche 10&nbsp; mL</td><td>Falcon</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>forbici, chirurgo Mayo</td><td>Miltex</td><td>5-SC-16</td><td></td></tr><tr><td>stereomicroscopio</td><td>Nikon, Olympus, Leica</td><td>vari</td><td></td></tr><tr><td>tamponi di garza sterili, 4 "x 4"</td> <td>Kendall Healthcare</td><td>6939</td><td></td></tr><tr><td>siero sintetico</td><td>Life Global, o</td><td>LGPS-20; 20 ml, o</td><td>conservato a 2 - 8 &ordm; C</td></tr><tr><td></td><td>Irvine Scientific</td><td>SS-99193; 12 x 10 mL</td><td>acquisto lotto a basso contenuto di endotossine</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma Chemical Co.</td><td>#S9378</td><td>Aliquot in 50&nbsp; mL di matracci, 1 anno; 
17,1 g/pallone + Medium fino a 50 mL; 
fa una soluzione 1 M; 
Filtra con 0,22 &micro; m unit</td></tr><tr><td>Timer</td><td>Nalgene</td><td>5016-001</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di scongelamento</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-TS (&le; 1,0 m saccarosio)</td><td>T1, T2, T3, T4; torato a 2 - 8 &ordm; C per &le; 1 mese dopo l'apertura di</td></tr><tr><td>Vitrification Solution*,**</td><td>Innovative Cryo Enterprises</td><td>BL-VS (&ge; 7,9 M [Glicerolo/EG])</td><td>V1, V2, V3; conservato a 2 - 8 &ordm; C per &le; 1 mese dopo l'apertura</td></tr><tr><td colspan="4">* Gli additivi crioprotettivi non permeanti possono includere: saccarosio, ficoll e ialuronato di sodio&nbsp;</td></tr><tr><td colspan="4">** Altre preparazioni commerciali sono tipicamente glicole etilenico (EG)/dimetilsolfossido (DMSO; 30% v/v; 4.8 M), ma potrebbero essere EG/glicole propilenico (32% v/v; 5.2 M). Le soluzioni miscelate sono generalmente utilizzate per ridurre i problemi di criotossicità di una soluzione ad alto molare. Le soluzioni commerciali includono in genere una soluzione ES e VS. La formulazione del preparato commerciale è tipicamente una proprietà proprietaria.</td></tr></tbody></table>

modificato vetrificazione microsecure: un altamente procedura crioconservazione sicuro ed efficace, semplice e per blastocisti umane

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

Clinical embrione vetrificazione si è evoluto con lo sviluppo di dispositivi di vitrificazione unici nel 21 ° secolo e con l&#39;idea sbagliata che ultra-rapido raffreddamento in un sistema &quot;aperto&quot; (cioè, diretta LN 2 contatto) era una necessità per ottimizzare il successo vetrificazione. Il dogma che circonda l&#39;importanza della velocità di raffreddamento ha portato a pratiche pericolose soggette a variazioni tecniche e alla creazione di dispositivi vitrificazione che disattese importanti fattori di controllo della qualità (ad esempio, la facilità d&#39;uso, la ripetibilità, l&#39;affidabilità, la sicurezza di etichettatura, e la sicurezza di stoccaggio). La comprensione dei difetti di controllo di qualità di altri dispositivi consentiti per lo sviluppo di un metodo di mS-VTF protetto, sicuro, ripetibile e affidabile l&#39;obiettivo di ridurre al minimo variazioni nelle e tra-tecnico. Altrettanto importante, ha unito la disponibilità di due dispositivi FDA conformi esistenti: 1) un 0,3 mL ionomerica paglia resina embrione con interiorizzato, a due colori, manomissione-petichettatura tetto con ripetibile potenziale sigillo di saldatura; e 2) abbreviato, comunemente usato, ID 300 micron flexipettes sterili per caricare direttamente l&#39;embrione (s) al fine di creare un dispositivo vetrificazione globale altamente efficace. Come altri asettica, chiusi sistemi vetrificazione (ad esempio, alta sicurezza vitrificazione (HSV), Rapid-i, e VitriSafe) efficacemente utilizzato in medicina riproduttiva, microSecure vitrificazione (mS-VTF) ha dimostrato di poter conseguire un livello elevato di sopravvivenza post-riscaldamento e gravidanza risultati con la sua attenzione alla semplicità, e ha ridotto la variazione tecnica. Anche se la paglia dell&#39;embrione 0.3 mL contenente una spina idrofobico interno è stato sostituito in commercio con una cannuccia sperma normale possedere cotone-polivinilpirrolidone (PVP) spine, ha mantenuto la sua composizione di resina ionomerica per garantire la tenuta della saldatura. Tuttavia, i tappi di cotone possono stoppino il contenuto liquido-embrione del flexipettes al contatto. Metodo mS-VTF modificato è stato adattato per includere una saldatura interna aggiuntivasigillare prima la spina sul lato dispositivo di caricamento. Il passo tecnico aggiunto alla procedura di mS-VTF non ha colpito la sua applicazione di successo, i tassi di sopravvivenza più in alto (&gt; 95%) e tassi di gravidanza continuano oggi.

1.341 blastocisti vetrificati sono stati riscaldati tra il 2012 al giugno 2014, e 1.341 embrioni recuperati (100%), mentre 1.316 sono sopravvissuti (98,1%). blastocisti biopsia sperimentato oltre il 99,5% di sopravvivenza. Al momento il trasferimento prevalentemente singolo, geneticamente testato, euploid, embrioni vetrificati, siamo stati in grado di raggiungere alcuni tra i tassi di impianto più alti e tassi di natalità dal vivo negli Stati Uniti, indipendentemente dall'età (figura 3) 20, secondo recenti statistiche nazionali riportati dal Centro per il controllo delle Malattie e la Società per tecniche di riproduzione assistita (tabelle 1 e 2). Valutare una popolazione di pazienti buona prognosi (meno di 35 anni) per i soli cicli crioconservati (Tabella 1), il nostro laboratorio ha superato la media nazionale sia per i tassi di impianto (ad esempio, l'efficienza di un embrione per stabilire una gravidanza) e, infine, vivere tassi di natalità di oltre il 30%. Inoltre, l'iniziale di validazione / verifica delle nostre cannucce di stoccaggio modificati in metà del 2014 con 70 di ricerca titolari di autorizzazione, blastocisti aneuploidi ri-vetrificate portato a 100% di recupero e il 100% di sopravvivenza. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig1.jpg"> Figura 1. Installazione MicroSecure VTF. Il piatto VTF (A) è assemblato con 3 file distinte di soluzioni di vetrificazione, che utilizzano 3 gocce di lavaggio prima del posizionamento nei distinti, goccioline di holding numerate. Inoltre, le singole pipette con punte VTF accorciati (cioè, flexipettes 300 micron ID) sono protetti e organizzati in un rack tubo di polistirolo (B), che può essere ruotata per un uso ordinato. Si noti che un gruppo di pipettaggio lampadina micropipetta monouso rappresentante è appoggiato sul rack di polistirolo. Arget = "_ blank"&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/54871/54871fig2.jpg"> Figura 2. Modificato blastocisti Grading System. Conti Il nostro sistema di classificazione blastocisti Gardner modificato per l'ernia indotta delle cellule TE per facilitare blastocisti biopsia. La modifica considera la schiusa prematura di blastocisti completi (A: Grado 3 = meno del 10% ernia) e blastocisti espanse (B: grado 4 = fino al 50% ernia), mentre una blastocisti cova (C) ha superiore al 50% ernia 16. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> 54871fig3.jpg "/&gt; Figura 3. gravidanza risultati comparativi. Nel corso di un intervallo di cumulativo di 1,5 anni, i dati di gravidanza sono stati confrontati per valutare gli effetti del trasferimento di blastocisti euploidi vetrificati-riscaldato (n = 172 cicli / 144 trasferimenti) rispetto ai cicli non PGS (n = 160 cicli / 153 trasferimenti) che coinvolgono prevalentemente fresco trasferisce 18. Per i nostri scopi sperimentali, questo dato rivela chiaramente che la blastocisti biopsia vetrificati dalla procedura mS-VTF mantengono la loro vitalità. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54871/54871fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Fonte di dati </td><td> # cicli </td><td> Medio di embrioni trasferiti # </td><td> Impianto Tariffe (%) </td><td> I tassi di natalità in diretta (%) </td></tr><tr><td> NB Lab * </td><td> 144 </td><td> 1.2 </td><td> 74.00% </td><td> 74.50% </td></tr><tr><td> Media nazionale </td><td> 20.423 </td><td> 1.7 </td><td> 39.60% </td><td> 44.10% </td></tr><tr><td colspan="5"> * I dati sono stati mediati sulla base del 2014 prestazioni di Orange County fertilità, Southern California Fertility Center e il sud della California Center for Reproductive Medicine cliniche utilizzando l'Ovation corrente fertilità laboratorio (NB Lab), che ha fondato la procedura microSecure vetrificazione nel 2008. </td></tr></tbody></table> Tabella 1. 2014 CDC Assisted Reproductive statistiche. Congelati i dati trasferimento di embrioni di gravidanza delle donne sotto i 35 anni da tre segnalazione cliniche medico utilizzando il nostro laboratorio NB rispetto alla media nazionale degli Stati Uniti il ​​2013 di oltre 450 cliniche di segnalazione. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2"> Medie nazionali SART </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Clinica - Stato </td><td> Donne </td><td> Donne </td><td> Donne </td><td> Donne </td></tr><tr><td></td><td> &lt;35 anni </td><td> 35-37 anni </td><td> 38-40 anni </td><td> 41-42 anni </td></tr><tr><td> SCCRM-CA * </td><td> 63,1% </td><td> 58,3% </td><td> 40,6% </td><td> 32,3% </td></tr><tr><td> CCRM-CO * </td><td> 64,7% </td><td> 61,5% </td><td> 40,4% </td><td> 32,2% </td></tr><tr><td> RMA-NJ * </td><td> 63,2% </td><td> 59,7% </td><td> 34,6% </td><td> 18,7% </td></tr><tr><td> Media nazionale </td><td> 48,6% </td><td> 38,3% </td><td> 24,3% </td><td> 12,3% </td></tr><tr><td colspan="5"> SCCRM-Southern California Center for Reproductive Medicine; CCRM-Colorado Center for for Reproductive Medicine; e RMA-Reproductive Medicine Associates </td></tr><tr><td colspan="5"> * Queste cliniche principali sono tutti prevalentemente realizzato cicli di trasferimento di embrioni vetrificati, in associazione con test genetici preimpianto, nella loro pratica standard di cura del paziente per ottimizzare il successo nati vivi per ogni embrione trapiantato. </td></tr></tbody></table> Tabella 2. 2014 i tassi cumulativi di natalità dal vivo, come riportato dalla Società per tecniche di riproduzione assistita (SART), per la Clinica SCCRM utilizzando il nostro Ovation fertilità Lab di Newport Beach, CA, in contrasto con molti altri programmi rispettati, così come con il SART medie nazionali.

MicroSecure Vitrification è stato sviluppato come un sistema di vitrificazione chiuso asettico non commerciale, conforme alle buone pratiche di produzione e manipolazione dei tessuti della FDA. A causa del ritiro dall'industria delle paillettes per embrioni ostruite idrofobiche, la procedura di vitrificazione è stata modificata per includere un sigillo interno prima del tappo di cotone interno standard.

Modificato vetrificazione MicroSecure: Un altamente Procedura Crioconservazione sicuro ed efficace, semplice e per blastocisti umane

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

L'obiettivo generale del metodo di vitrificazione degli embrioni MicroSecure è quello di fornire una procedura di vitrificazione chiusa asettica sicura, semplice, ma efficace per gli embrioni umani. Questo metodo è stato sviluppato per ridurre al minimo le variabili di controllo della qualità nella vitrificazione degli embrioni umani, garantendo così un successo affidabile e riproducibile. Il vantaggio principale di questa tecnica è che si sforza di eliminare le variazioni tecniche tra biologi e laboratori.La nostra tecnica è così semplice da eseguire che riteniamo che la sfida più grande per i nostri tirocinanti sia imparare a pipettare gli embrioni senza perderli. L'idea alla base del nostro metodo era quella di eliminare la necessità di dispositivi specializzati adattando due articoli comunemente usati approvati dalla FDA. Una cannuccia ionomerica etichettata internamente e un flexipet sterile.La dimostrazione visiva di questa tecnica è estremamente utile in quanto evidenzia i suggerimenti di base che ne garantiscono il successo dell'applicazione. Prima di iniziare la procedura, posizionare la cannuccia sterile da 0,3 ml di salvietta sulla superficie in teflon dell'elettrodo di una sigillatrice a impulsi da tavolo di base, proprio davanti al tappo, per creare una tenuta interna. Premere la maniglia per attivare il calore, rilasciando la maniglia quando la luce rossa è spenta e si sente un segnale acustico.Quindi spingere il tappo di cotone in avanti contro la guarnizione interna prima di completare la configurazione. Per la criodiluizione e il caricamento di blastocisti dei campioni, rimuovere la piastra di coltura del paziente dall'incubatore e confermare tutte le identificazioni dei campioni con una fonte secondaria. Sotto uno stereomicroscopio, utilizzare un flexipet di vitrificazione, indicato come punta vit, per spostare le blastocisti in singole goccioline di tenuta nella fila superiore di una corrispondente capsula criogenica.Successivamente, preriempire il flexipet con 3 microlitri di soluzione V1 ed erogare metà del contenuto sul primo embrione. Aspirare l'embrione e trasferirlo nella prima gocciolina di lavaggio V1. Quindi pipettare l'embrione due o tre volte attorno al perimetro della gocciolina e rimuovere il contenuto residuo della pipetta al di fuori della gocciolina sulla superficie della piastra.Quindi spostare la blastocisti su una singola goccia di tenuta V1 e precaricare il puntale vit con la successiva soluzione V2 prima di pipettare gli embrioni aggiuntivi con un nuovo puntale vit. Dopo aver lavato tutte le blastocisti nelle goccioline V2 e V3 come appena dimostrato, eliminare la soluzione residua e le bolle dalla punta della vit al di fuori della gocciolina di tenuta V3 e riempire completamente la punta con una soluzione V3 pulita intorno al primo embrione. Espellere circa 1 microlitro del volume e aspirare completamente la blastocisti e la restante soluzione V3 nella punta della vite.A questo punto, rimuovere il puntale dalla pipetta e utilizzare una garza sterile per asciugare la soluzione V3 residua dalla superficie esterna del puntale vit. L'asciugatura della superficie esterna della punta è fondamentale e non comporta alcun rischio aggiuntivo di perdita di embrioni. Quindi inserire prima l'estremità della punta nell'estremità aperta della cannuccia presigillata e capovolgere la cannuccia, con l'etichetta rivolta verso il basso.Osservare la punta sul tappo interno. Lasciare uno spazio d'aria di 1 cm sull'estremità aperta, quindi saldare in modo sicuro. Quando tutte le cannucce sono state sigillate, immergerle direttamente nell'azoto liquido in un pallone dewar in acciaio inossidabile e conservare le cannucce nel calice aperto attaccato al bastone del paziente.Per l'eluizione e la diluizione della criosoluzione, posizionare la corrispondente piastra di diluizione a sei pozzetti al centro di un tavolino per stereomicroscopio e una piastra di Petri da 60 mm contenente un bagno riscaldante al saccarosio a 37 gradi Celsius su un lato del microscopio. Quindi, isolare la cannuccia da riscaldare e tenere il sigillo superiore della cannuccia sopra il livello del liquido per confermare l'identità del campione. Usa le forbici per maionese per fissare la cannuccia sotto il tappo interno, per mantenere la punta in vit immersa nell'azoto liquido.Battere con decisione le forbici contro il pallone di dewar più volte per rimuovere la punta dalla parete laterale interna della cannuccia come precauzione di controllo qualità e sollevare la cannuccia nell'aria ambiente con orientamento orizzontale accanto o sotto la superficie dello stereoscopio. Afferrando l'estremità non etichettata della cannuccia, tagliare la cannuccia dal tappo interno. Quindi sollevare la cannuccia sopra la pirofila da bagno riscaldante e versare la punta in vit nella vasca con un angolo di 60 gradi, fino a quando la punta non è completamente estrusa.La base del flexipet deve poggiare sopra la parete laterale del piatto. Dopo 5-10 secondi, trasferire la base della pipetta in un dispositivo di pipettaggio per microcapsule. Avvia un timer di cinque minuti.Durante l'osservazione del microscopio, utilizzare un dito indice per coprire il foro del bulbo e premere delicatamente il bulbo per rilasciare la blastocisti vetrificata dalla punta della vit nel lavaggio T1. Dopo aver confermato il rilascio della blastocisti, eliminare la soluzione V3 residua e le bolle mediante pressione positiva, evacuando il contenuto al centro di un pozzetto di scarto inutilizzato. Trasferire il puntale vit su una pipetta sterber, spostando l'embrione nella seconda gocciolina T1 sotto olio per i restanti quattro minuti.Durante l'incubazione, preriempire il flexipet con la soluzione successiva, quindi diluire la blastocisti nelle goccioline T2, 3 e 4 a intervalli di tre minuti. Infine, equilibrare le blastocisti nella gocciolina T5 per cinque minuti su una superficie di 37 gradi Celsius, prima di rimetterle nell'incubatore. Il sistema di classificazione delle blastocisti di Gardner modificato considera le blastocisti complete come aventi meno del 10% di ernia delle cellule del trofoectoderma, mentre le blastocisti con ernia fino al 50% sono classificate come espanse.Le blastocisti che dimostrano un'ernia superiore al 50% sono considerate in fase di schiusa. Utilizzando i metodi di crioconservazione e riscaldamento dimostrati, sono stati costantemente raggiunti alti livelli di nati vivi per inizio ciclo con o senza test genetici preimpianto. Sebbene questi successi siano notevolmente superiori, utilizzando blastocisti euploidi preselezionate.Infatti, valutando una buona popolazione di pazienti con prognosi per i soli cicli crioconservati, questi dati sul trasferimento di embrioni congelati dimostrano tassi di successo migliori rispetto alla media nazionale sia per i tassi di impianto che per i tassi di nascita vivi di oltre il 30%Trasferendo prevalentemente singole blastocisti vitrificate euploidi geneticamente testate, alcuni dei più alti tassi di impianto e tassi di nati vivi negli Stati Uniti, indipendentemente dall'età, sono stati raggiunti, rispetto alle recenti statistiche nazionali riportate dal Center for Disease Control per altre due cliniche di fertilità ben rispettate, e ai dati rilasciati dalla Society for Assisted Reproductive Technologies. La vetrificazione MicroSecure è una nuova procedura asettica sviluppata per garantire la facilità tecnica, l'affidabilità e la criosicurezza. Questo semplice sistema di vetrificazione non commerciale offre un'alternativa altamente efficace e a basso costo ai dispositivi di vetrificazione.Sin dal suo sviluppo, il metodo MicroSecure ha garantito un recupero dell'embrione di oltre il 99,9% e una sopravvivenza completa della blastocisti di oltre il 95%. Ciò ha permesso la trasformazione della nostra pratica clinica in quasi tutti i cicli di trasferimento di embyro crioconservati negli ultimi tre anni. Abbiamo modificato efficacemente la nostra procedura per includere una guarnizione interna davanti al tappo di cotone delle paillettes ionomeriche per produrre ancora guarnizioni di saldatura affidabili e risultati eccezionali dopo il riscaldamento.Esistono molti sistemi di dispositivi diversi utilizzati oggi nei settori delle tecnologie di riproduzione assistiva, ma nessun altro dispositivo offre la semplicità e la ripetibilità tecnica per eliminare essenzialmente la variazione dell'utente e fornire una sicurezza ottimizzata, come la vetrificazione MicroSecure.

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Un glicole etilenico metodo basato vetrificazione per embrioni di topo è descritto. E 'vantaggioso per altri metodi nella sua semplicità e bassa tossicità embrionale, e quindi può essere ampiamente applicabile a molti ceppi di topi, compresi topi inbred e geni modificati.

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Spatola Montevideo Dispositivo per la vitrificazione di embrioni di mammiferi

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Modificato vetrificazione MicroSecure: Un altamente Procedura Crioconservazione sicuro ed efficace, semplice e per blastocisti umane (Video) | JoVE Journal

Modificato vetrificazione MicroSecure: Un altamente Procedura Crioconservazione sicuro ed efficace, semplice e per blastocisti umane

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