Morfometrica protocollo per la valutazione obiettiva dei blastocisti comportamento durante la vetrificazione e passaggi scaldavivande

Questo protocollo morfometrico consente il monitoraggio dell'intensità del restringimento e della espansione della blastocista durante i precedenti interventi di vetrificazione e recupero post-riscaldamento e fornisce informazioni sull'efficacia dei metodi di vetrificazione dei virus. Il vantaggio principale di questa tecnica è che può essere applicata a laboratori di fecondazione in vitro dotati di microscopi time-lapse e computer con software avanzato di editing delle immagini. Il quinto o sei giorno di espansione, sottopose una blastocista con almeno poche celle di massa cellulare interne e un trophectoderm coeso a un impulso laser da 0,4 a 0,7 millisecondi con un diametro del foro che va da 4,3 a 9,4 micrometri tangenzialmente diretti alla zona pellucida e alla giunzione di due cellule trophectodermal adiacenti.

Quindi, lasciare che il blastocoel collassi completamente o parzialmente per cinque minuti. Successivamente, utilizzare una piccola pipetta per aggiungere aseticamente un mezzo di equilibrazione nei fori dell'area della microdroplet di una piastra di Petri a nove pozzetti, appositamente progettata per la microscopia e la registrazione time-lapse. Quando tutto il mezzo è stato aggiunto, sovrapporre l'area della microdroplet con circa 30 microlitri di mezzo di equilibrazione.